宝草锦haworthia cymbiformis vartriebnent poelln组培继代培养激素优化研究

20141304101006+赵秋洋+宝草锦var.triebnentpoelln)组培继代养的激素优化研报告检测时间：2018-06-12检测字数：11,931作者名称：佚所属20141304101006+赵秋洋+宝草锦var.triebnentpoelln)组培继代养的激素优化研报告检测时间：2018-06-12检测字数：11,931作者名称：佚所属单位：邯郸学◎中文科技期刊论文全文数据◎中文主要报纸全文数据◎中国专利特色数◎博士/硕士学位论文全文数据◎中国主要会议论文特色数据◎港澳台文献资◎外文特色文献数据全◎维普优先出版论文全文数据◎互联网数据资源/互联网文档资◎高校自建资源◎图书资◎古籍文献◎个人自建资源◎年鉴资◎IPUB原创时间范围：1989-01-01至2018-06-全文总（总相似比=复写率+他引率+自引率（原创内容占全文的比重（相似或疑似重复内容占全文的比重,含专业用语（引用他人的部分占全文的比重，请正确标注引用（引用自己已发表部分占全文的比重，请正确标注引用专业用（公式定理、法律条文、行业用语等占全文的比重总相似片段1systemforrapidpropagationofbroccoli.Itcanprovidereferenceforgermplasmresourcesprotection,andutilization,horticulturalcultivation,genetictransformationandmolecularbreeding.First,thesystemforrapidpropagationofbroccoli.Itcanprovidereferenceforgermplasmresourcesprotection,andutilization,horticulturalcultivation,genetictransformationandmolecularbreeding.First,thepollution-adventitiousbudsoftheHaworthiacymbiformisvar.triebnetpoellnwereinoculatedinthesupercleanandtheninoculatedintoMSmediumwithdifferenthormoneconcentrationtoproliferate.TheresultsshowedthatoptimummediumforinducingproliferationofadventitiousbudswasMS+6-KeywordsHaworthiacymbiformisvar.triebnetpoelln,tissueculture,adventitiousbud,rapid1前言1.1植物组织培养外植体的选用消毒1.2植物组织培养培养基和培养方式的选用1.2.1培养方式的选用1.2.2培养基的选用1.3培养基的培养条件1.4不定芽增殖所需植物激素的比例1.5宝草锦的概述1.6研究意义2材料与方法42.1主要实验材料、试剂和设备2.1.1实验材料2.1.2实验试剂2.1.3实验所用培养基2.1.4实验设备2.2实验方法2.2.1材料的选择2.2.2培养基的配制2.2.3宝草锦不定芽接种2.2.4增殖培养3结果与分析3.1植物激素6-BA对宝草锦不定芽的影响3.2植物激素NAA对宝草锦不定芽的影响4结论参考文献致谢宝草锦(Haworthiacymbiformisvar.triebnet组培继代培养的激素优化研1植物组织培养（PlantTissueCulture）是20世纪初，以植物生理学为基础发展起来的一门新兴技术，它是指在组织器官或细胞等体的条件下利用人工培养基进行培养，使其形成完整植株[1,2]。其中包括器官培养、茎尖分生组织培养、细胞培养、原生质体培和愈伤组织培养等。但是愈伤组织培养最为常见。一般类型都要经历愈伤组织阶段才能形成完整植株，茎尖分生组织培养和少数器3培养除外。植物组织培养的原理是利用细胞的全能型，即指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所培养除外。植物组织培养的原理是利用细胞的全能型，即指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必须的全部信息。利用这个特性使植物成熟细胞经历脱分化之后形成愈伤组织再经由再分化形成完整的植株[3]植物组织培养这项技术已经成为举世瞩目的生物技术之一。经过几十年的发展在医学、农业、工业和林业中得到广泛应用，尤其新品种培育、快速繁殖、植物次生代谢产物和苗木脱毒等生产方面发挥着巨大作用，并创造了巨大的经济效益[4]1.1植物组织培养外植体的选用和选择合适的外植体是组织培养工作中的第一步，其种类的选择直接影响组织培养的效果。外植体选择时需要考虑培养目的、外植体培养能力及取材是否会对母株造成影响等因素。芽、叶片和花径都可以作为多肉植物的外植体诱导再生植株，然而各有各的缺点。此，多肉植物最适外植体的选择还要根据多肉种类和实际情况而定。外植体消毒灭菌是植物组培重中之重。它既要消除微生物又不破坏织物表面细胞及组织。往往消毒灭菌是非常严谨的，要根据其生长环境、取材位置、取材时间等等来确定消毒剂和消毒时间。用的消毒剂有：乙醇、升汞（或二氯化汞）、次氯酸盐等[5]。那淑芝[6]用75%的酒精溶液浸泡15s，然后用0.1%HgCl2溶液灭菌min，来给库拉索芦荟灭菌。赵娟[7]等用70%酒精消毒30s，0.1%HgCl2灭菌15min，来给褐斑伽蓝叶片灭菌。宋扬[8]采用75%处理冰灯玉露幼嫩花茎10s，再用0.1%升汞消毒7min。目前，多肉植物外植体消毒比较常用的方法是70%75%的酒精与0.1%的氯汞以不同时间的组合对外植体进行消毒1.2植物组织培养培养基和培养方式的选1.2.1培养方式的选植物组织培养有半固体培养，固体培养和液体培养3种培养方法。最常用的还是固体培养[9]，其中百合科植物美丽豹子花[10]、虎万年青[11]、延龄草[12]、虎尾兰[13]、长蕊万寿竹[14]等组织培养都采用固体培养基；谷祝平[15]等将百合未授粉子房放入改良MS和固体培养基中培养可以能获得完整的植株，蔡朝晖等[16]对暗紫贝母小鳞茎进行继代培养后发现固体培养比液体震荡培养要生的慢，用液体震荡培养生物碱的含量要高于固体培养。苏斌等[17]在进行麝香百合快速繁殖中可以发现，采用液体震荡培养要远比固体培养和半固体培养节省生产成本。罗丽萍[18]等认为，液体震荡培养对龙牙百合次生小鳞茎的增重效果明显优于固体培养。所在选择培养方式的时候要根据组培苗特性来选用适合的培养基1.2.2培养基是根据植物生长发育所需的营养而设计的。培养基通常包括大量元素、微量元素、糖类铁盐、有机复合物、和植物激素等。同植物种类、不同的培养目的，要求提供的物质也不一样。随着慢慢研究的深入，培养基的种类越来越复杂，其内部成分也越来越。在组织培养中，常用的培养基有MS、WPM、B5、White、N6和SH等。最为常用的培养基为MS培养基，但也有采用N6[19]、SH[20]作为本培养基的，但是效果不及MS培养基。孙必贤等[21]在对大蒜进行不定芽诱导时，发现B5效果也很好，卢其能[22]对MS、B5、和e3种培养基进行分化效果比对实验，实验结果表明，分化效果最好的培养基是MS培养基，其次是B5培养基，最差的是White杨柏云等[23]研究MS培养基、改良MS(将MS培养基中的NH4NO3去掉，KNO3加倍)和B5培养基对切花百合小鳞茎的增殖效果，发现MS基与改良的MS培养基对小鳞茎增殖效果比B5培养基好，但二者的作用没有明显差别1.3温度、光照强度、培养基的pH值和培养中室内环境都能影响组织培养的效果。在愈伤组织诱导和增殖过程中，一般选用光照弱或者暗的条件下培养效果比较好。在增加培育苗高度的情况下，Kozai[24]等研究了日平均气温20下的三个温度差，实验结果表明培随着温度差增大从而生长高度增加。谢从华等人认为在器官分化阶段，培养基培养要满足三个条件，即高强度的灯光照射、2030度范围及5.86.0的pH值范围[25]1.4宝草锦不定芽增殖所需植物激素的比激素种类、浓度及其配比对百合科植物组织的形态发生和形成速度有显著影响，杨炜茹等[26]在野生渥丹鳞片的不定芽增殖培养中用的激素是6-BA，徐凌飞等[27]、王芳等[28]在对兰州百合和玉簪芽进行增殖培养时也采用了相同的激素；而马永红[29]在野鳞茎增殖培养中采用了6-BA和2，4-D；田英翠等[30]单独使用IAA对郁金香芽进行增殖培养。而庞新霞等[31]通过对东方百合鳞茎4培芽增殖研究后，认为当NAA0.1mg/L时，6-BA或KT浓度在1.02.0mg/L之间会使芽增殖倍数高且生长健壮，但6-BA或KT浓度过低.0mg/L)或过高>2.0mg/L)时，培芽增殖研究后，认为当NAA0.1mg/L时，6-BA或KT浓度在1.02.0mg/L之间会使芽增殖倍数高且生长健壮，但6-BA或KT浓度过低.0mg/L)或过高>2.0mg/L)时，不利于芽增殖，芽的生长也缓慢。因此最适激素浓度配比对植物快速繁殖尤为重要[32]1.5宝草锦的概述和前宝草锦(Haworthiacymbiformisvar.triebnetpoelln)是宝草的斑叶变异品种，它是百合科(Liliaceae)十二卷属多年生肉质草植物，宝草锦叶片绿色兼有纵向黑色或白色的条纹，形成半透明的窗，总状花序，但较松散，小花白绿色，花期春末至夏季。宝草喜温暖，适合在阳光柔和，或半阴的环境栽培。耐干旱，较耐寒，忌高温、积水，怕烈日暴晒，也不宜过于荫蔽。无明显的休眠期生长适温为18-25摄氏度，冬季不低于5摄氏度。生长期可正常浇水，秋冬季节水量酌减。可用泥炭（腐叶土）、蛭石、珍珠岩的混土作介质，并掺入少量的骨粉等石灰质材料。其繁殖方式为分株繁殖近几年来，多肉市场尤为火爆。在一线城市中如北京、广东等，大多数多肉植物出现供不应求的局面。而宝草锦只能进行分株繁殖不能适应市场环境限制了其发展前景。所以快速繁殖体系的建立尤为重要。这样就能有效地缓解一线城市和发达地区供不应求的局，也能解决因物种稀少价格昂贵从而人们消费不起的情况1.6近年来，多肉植物由于种类繁多、体态清雅而奇特、花色艳丽而多姿和果实硕大而鲜艳等特点，越来越受到广大消费者的关注和爱，新一轮的多肉植物研究和开发利用高潮正在兴起[33]。由于多肉植物耐旱耐瘠薄的特性，在种植管理时相较于其他园林植物更节水节肥，正符合了我国可持续发展的战略思想，是值得大力推广的新型园林植物[34]。我国是多肉植物原产地之一，但由于起晚，研究经费投入较少，资源开发力度不足，也没有形成规模化的生产，因此多肉植物的新品种主要靠国外进口[35]。因此，研究草锦快速高效的繁殖生长在我国具有非常不错的应用前景2材料与2.1主要实验材料、试剂和2.1.1宝草锦分化无污染的不定芽2.1.2(1(2)体积分数为75(3)体积分数为95(4)体积分数为0.1%的HgCl2(5)物质的量为1mol/L的HCl(6)物质的量为1mol/L的NaOH(7)MS培养基母液、、(8(9(10)浓度为1mg/L的6-BA溶液配制：准确称取100mg的6-BA，然后用少量的1mol/L的HCl溶液进行溶解，待溶解完毕，加蒸馏水至(11)浓度为1mg/L的NAA溶液配制：准确称取100mg的NAA，然后用少量的1mol/L的NaOH溶液进行溶解，待溶解完毕，加蒸馏水至(12)浓度为1mg/L的KT溶液配制：准确称取100mg的KT，然后用少量的1mol/L的NaOH溶液进行溶解，待溶解完毕后，加蒸馏水定至100ml2.1.3实验所用培养MS培养基：大量元素母液I（20倍）+微量元素母液II（100倍）+铁盐母液III（100倍）+有机物质母液IV（100倍）5宝草锦不定芽进行增殖所采用的培养基均是MS培养基，在此基础上，按照试验表添加不同浓度激素配比的6-BA和NAA，找出宝草锦不定芽进行增殖所采用的培养基均是MS培养基，在此基础上，按照试验表添加不同浓度激素配比的6-BA和NAA，找出最佳的素浓度配比组合注：上述培养基中还需要添加30g的蔗糖、7g的琼脂粉，先加热煮沸至透明后，在调整其pH值至5.86.02.1.4电子天平（FA2204N型）；电磁炉；高压蒸汽灭菌锅（LDZX-40型）；超净工作台（VS-1300L-U型）；冰箱（BCD-219BSV型）材料的选选取生长状态良好且没有被污染的宝草锦不定芽2.2.2培养基的配配置1L的培养基，首先分别量取所需要的母液50mL、母液20mL、母液20mL、母液20mL和KT然后按照实验表的需要添加NAA和6-BA。后用电子天平准确称量出7g琼脂粉、30g蔗糖。然后向陶瓷缸中加入蒸馏水定容至1000ml，将已经量好的各母液加入其中，放磁炉上，边加热边用玻璃棒搅拌，直至液体呈现出半透明状后将搪瓷缸取下，用精密pH试纸测培养基的pH值，用1mol/L的HCl溶液1mol/L的NaOH溶液来调节其pH值，直到培养基的pH值符合要求为止（5.86.0）。将已经配制好的培养基趁热分装到各个组培瓶每瓶50mL，并在组培瓶外壁贴上相应标签，放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，设置温度121，时间20min，灭菌完毕后将培养基放组培室储藏待其凝固。培养基放置时要尽量处于水平，否则培养基凝固时会出现倾斜的现象2.2.3宝草锦不定芽接先将超净工作台进行紫外灯照射20min，然后再进行接种。接种时要用酒精棉擦拭自己的双手，然后用镊子在锥形瓶中取出宝草锦不定芽，先用解剖刀慢慢剃去上面的愈伤组织，然后再用解剖刀把它们分离开，取出培养基把切好的不定芽接种到培养基上。每次种时，要将锥形瓶瓶口放在酒精灯火焰附近防止细菌污染。按照上述方法接种完毕后要将培养基放入组培室进行培养2.2.4将长势良好的宝草锦不定芽接种后，放入光照条件充足、室温25摄氏度左右且无菌的组培室中进行增殖培养，激素浓度配比见表1每天观察其生长的状况，查看并记下不定芽的增殖情况，汇总实验结果，制出图表，得出宝草锦不定芽增殖的最佳激素配方表1宝草锦继代培养基1L植物激素6-BA用量表（单位Table1Dosageformofplanthormone6-BA1LinsubculturemediumofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet组别6-BA10.521表2宝草锦继代培养基1L植物激素NAA用量表（单位Table2Dosageformofplanthormone6-BA1LinsubculturemediumofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet组别6-BA10.520.53结果与在添加不同浓度的6-BA和NAA的培养基中转接上宝草锦的不定芽，然后把培养基置于组培室光照条件下连续培养20天，统计实验结。3.1植物激素6-BA对宝草锦不定芽的影表36-BA不同浓度配比对宝草锦不定芽增殖的影Table3Effectofdifferentconcentrationof6-BAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiavar.Triebnet6实验组接种数(个)出芽数(个)增殖率平均每个不定芽数（个NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.1mg/L302996.7%实验组接种数(个)出芽数(个)增殖率平均每个不定芽数（个NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.1mg/L302996.7%表46-BA不同浓度配比对宝草锦不定芽增殖的效Table4Effectofdifferentconcentrationof6-BAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiavar.Triebnet实验组愈伤组织的质地不定芽的颜色不定芽的大6-NAA0.1mg/L疏松不定芽为翠绿6-NAA0.1mg/L致密不定芽为翠绿BA的浓度对宝草锦不定芽增殖有着明显影响。由表3可知，当6-BA浓度由0.5mol/L增加为1mg/L时，出芽个数由28增加至29，增值由93.3%增加至96.7%，平均每个不定芽数由6.1增加至7。由表4可知，当6-BA浓度增加时，愈伤组织的质地由疏松变为致密(见图1、），但是不定芽也会随之由大变小。由此可见，6-BA浓度增加时，其出芽数、增殖率、平均每个不定芽数都增加，其愈伤组织的质也会由疏松变为致密。因此可以得出结论：宝草锦不定芽增殖的培养基中6-BA最佳浓度为1mg/L图16-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L宝草锦不定芽增殖培Figure16-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet图26-BA1mg/L+NAA0.1mg/L宝草锦不定芽增殖培养Figure26-BA1mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet3.2植物激素NAA对宝草锦不定芽的影表5NAA不同浓度配比对宝草锦不定芽增殖的影Table4EffectofdifferentconcentrationofNAAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiacymbiformisTriebnet实验组接种数(个)出芽数(个)增殖率平均每个不定芽数（个6-NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.15mg/L302480%表6当NAA不同浓度配比对宝草锦不定芽增殖的效Table6EffectofdifferentconcentrationofNAAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiacymbiformisTriebnet实验组愈伤组织的质地不定芽的颜色不定芽的大6-NAA0.1mg/L疏松不定芽为翠绿6-NAA0.15mg/L疏松不定芽为黄绿色+7NAA的浓度对宝草锦不定芽增殖有着明显影响。通过表5可知，实验组1中宝草锦不定芽增NAA的浓度对宝草锦不定芽增殖有着明显影响。通过表5可知，实验组1中宝草锦不定芽增殖要好于实验组2，其增殖率为93.3%，每个不定芽数为6.1。通过表6可知，实验组1中不定芽颜色呈现翠绿色(见图3)，要比实验组2中不定芽(见图4)的色泽鲜明，其不定发育要好于实验组2。由此可见，实验组1培养基进行宝草锦不定芽增殖要适于实验组2。由上述可以得知，宝草锦不定芽增殖的基中NAA最佳浓度为0.1mg/L图36-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L宝草锦不定芽增殖培Figure36-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet图46-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/L宝草锦不定芽增殖培Figure46-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.4根据以上实验结果分析可知：当NAA浓度一定时，宝草锦不定芽增殖最适6-BA浓度为1mg/L。当6-BA浓度一定时，宝草锦不定芽增殖适NAA浓度为0.1mg/L。所以宝草锦不定芽快速增殖的最合适培养基为MS+6BA1mg/L+NAA0.1mg/L肖哲丽,柳金凤.植物组织培养的研究进展及新技术应用[J].宁夏农林科技,2011,51(01):13-陈菁瑛,蓝贺胜,陈雄鹰.兰花组织培养与快速繁殖技术[M].北京2004:刘庆昌,吴国良.植物细胞组织培养[J].中国农林大学出版社,2002,尹颖.《植物组织培养技术》课程教学改革的探索与实践[J].铜仁学院学报,2014,7(16):45-梁芳,蒋素华,王洁琼,等.树兰组织培养外植体消毒方法初探[J].植物生理学通讯,2003,39(5):那淑芝,张东豪,甄占轩.库拉索芦荟的组织培养和植株的快速生根[J].植物生理学通讯,2003,39(5):赵娟,王玉国,尹美强,等.植物激素对褐斑伽蓝叶片分化的影响[J].激光生物学报.2009,18(2):200-宋扬.冰灯玉露的组织培养与快速繁殖技术的研究[J].现代农科技,2014(18):164-ChenJY,WenPF,KongWF,etal.Effectofsalicylicacidonphenylpropanoidsphenylalanineammonialyaseharvestestedgrapeberries[J].PostharvestBiologyandTechology,2006,40(1):64-吴丽芳,张艺萍,崔光芬,等.美丽豹子花的离体快繁和瓶内结球[J].植物生理学通讯,2009,45(1):43-尹东,黄柏渠.虎眼万年青的快速繁殖[J].植物生理学通讯,1995(4):胡天印,钱丽华,刘汉卿.濒危植物延龄草愈伤组织诱导研究[J].浙江师范大学学报,2006,29(3):326-刘云国,王晓云.虎尾兰叶片的离体再生不定芽[J].北方园艺,2002(2):蒋天怡,石大兴,王米力.长蕊万寿竹的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯,2006,42(4):谷祝平,郑国锡.百合未授粉子房的培养及其胚胎学观察[J].植物学报,1983,25(1):24-蔡朝辉,高山林,徐德然,等.不同培养条件及方法对组培暗紫贝母生长的影响[J].中国药科大学学报,1992,23(6):367-苏斌,苗世林,竺礼珍.麝香百合的组织培养技术初探[J].甘肃农业科技,1994,7:罗丽萍,蔡奇英,杨柏云,等.龙牙百合茎尖培养及小鳞茎增殖条件的研究[A].中国科学技术出版社,2001,150-谷祝平,郑国锡.百合未授粉子房的培养及胚胎学观察[J].植物学报,1983,25(1):24-罗凤霞,徐桂华,金丽丽,等.新铁炮百合微繁的研究[J].沈阳农业大学学报,2000,31(3):254-孙必贤,朴成贤,赵海峰,等.大蒜脱毒与快繁技术[J].吉林蔬菜,2008(3):卢其能.龙牙百合的组织培养和快速繁殖研究[J].江西农业学报,2002,14(4):43-杨柏云,罗丽萍,蔡奇英.切花百合组织培养的研究[J].南昌大学学报,2000,24(4):323-KOZAIT,KUASHIHASHIS.Effectsofthedifferentbetweenphotoperiodandphotosyntheticphotofluxdensityon8shootlengthandgrowthofpotatoplantletsinvitro[J].JJapSocHortSci,1992,61(1):93-谢从华,柳俊.植物细胞shootlengthandgrowthofpotatoplantletsinvitro[J].JJapSocHortSci,1992,61(1):93-谢从华,柳俊.植物细胞工程[M].北京:高等教育出版社,2004:杨杨,姜虹,傅华龙,等.风信子组织培养研究进展[J].江苏农业科学,2009(5):69-徐凌飞,庞勇,周连霞,等.兰州百合微繁的研究[J].中国农学通报,2005,21(5):113-王芳,沈岚,朱红芬,等.玉簪组培规模化快繁技术研究[J].中国农业信息,2008(5):30-马永红.野生山丹组培快繁的研究[J].园林科技,2007,7:11-田翠英,袁雄强.郁金香组织快繁研究[J].安徽农业科学,2006,34(2):227,庞新霞,岑秀芬,陈建国,等.不同激素组合对东方百合鳞茎组培芽增殖的影响[J].广西园艺,2008,19(2):3-5,ThorpeTrevorA.Historyofplanttissueculture[J].Mol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