肺炎支原体讲稿新-股份版课件

储迅涛博士肺炎支原体明胶颗粒凝集试验及其临床应用肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，Mp）是引起非典型性肺炎的常见病原体。支原体肺炎的发病率可占到所有肺炎病例的20~30%Mp主要的易感对象为儿童和年轻人，但近年来发现65岁以上老年人群发生的社区获得性肺炎中有15%是Mp引起的，且5岁以下的婴幼儿也可发生感染Mp感染可发生在一年中的任何季节，没有明显的季节流行特征。支原体肺炎同时具有地方性和周期流行性的特点，流行周期一般为3~7年，在流行的高峰时，其发病率可达到肺炎总发病率的70~80%Mp感染临床上主要表现为气管炎和上呼吸道感染症状。约15%的感染者没有临床症状，只有5~10%会发展成为肺炎。其主要特点是起病较慢，有头疼、发热、咽喉疼痛、不适以及最典型的干咳等症状。一般情况下，支原体肺炎的死亡率不高，但少见的肺外感染（累及神经、心脏、关节、红细胞等）却往往表现出更严重的症状肺炎支原体概况

可引起非典型肺炎的病原体很多，单凭临床症状和影象学检查不能明确区分Mp和其它病原体所引起的感染，因此实验室检测结果就显得尤为重要：一般实验检查

白细胞计数(25%升高)；血沉(30%升高)；痰液检查(无革兰阴性菌)；肝肾功能(可能出现一些非特异性的异常)培养

根据临床上的情况，咽拭子、痰液、胸水、肺活检组织等均可用于培养。应注意床边接种及使用运送培养基（SP4肉汤）。培养需要营养要求很高的专用选择性培养基，耗时长(3~5周)且敏感性一般血清学试验是目前实验室检测的主要方法抗原检测

使用抗原捕获酶免疫测定,据称可达到较高的敏感性和特异性。但该方法有被分子生物学方法取代的趋势分子生物学检测

近年来各种分子杂交和PCR检测方法在科研中的应用越来越多，今后有可能成为Mp实验室诊断的常规方法之一肺炎支原体的实验室检测人类对Mp无先天免疫性，尚无可实际应用的有效疫苗，感染后也不能产生完全的保护性免疫Mp特异性的IgM抗体在发病后不久即可出现升高，1~4周内达到峰值，然后在几个月内逐渐下降到没有临床意义的水平。急性感染后IgM的持续时间在不同个体中差异较大。儿童的IgM反应一般强于成人，约50%的成人患者无法在Mp感染后测到IgM的升高IgG的出现时间晚于IgM，5周左右达到峰值，上升速度较慢且在体内的持续时间较长（4年左右），但在感染数月后就会下降到较低水平。有些儿童无法测得明显的IgG反应特异性IgA的免疫反应与IgM类似，但其在成年人尤其是老年人中的反应水平更高肺炎支原体的免疫性冷凝集试验：冷凝集素是对Mp最早的体液反应，50%的病人在Mp感染第2周时的滴度可达到1:32以上，而6周内即降至感染前的水平。冷凝集试验虽然简便、快速，但它不是针对Mp的特异性试验，多种其他微生物感染（如EB病毒、巨细胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病时冷凝集素滴度均可升高。同时，该试验的敏感性也只有50~60%，对于12岁以下的儿童其敏感性则更差补体结合试验(CFT)：十几年前，CFT仍是Mp血清学试验的标准方法，但越来越多的研究表明该方法的敏感性和特异性都不够高。CFT所用的抗原为Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可与人类、细菌及植物的某些抗原表位发生交叉反应（如脑膜炎时，CFT滴度可明显升高）。CFT测定的主要是IgM，对IgG不很敏感，导致其整体敏感性偏低。

肺炎支原体的血清学试验（一）间接血凝试验(PHA)：将提纯的Mp抗原连接到红细胞（禽类或羊）上，与血清中的抗Mp抗体可发生凝集反应。该试验的敏感性和特异性均明显优于CFT。PHA不能区分抗体的类型，因此单份测定出现低滴度的抗体阳性结果并不能确定是既往感染还是新近感染。最好能间隔2~3周再采取第2份血样进行测定，观察抗体滴度是否有4倍以上的增加（血清转化）。单次测定出现高滴度抗体阳性（大于1:8）也有助于对Mp新近感染的判断明胶颗粒凝集试验(PA)：其原理与间接血凝试验基本相同，只是用人工合成的明胶颗粒取代了红细胞作为凝集试验的载体，从而使结果判定更清晰，静置稳定性更好，非特异性反应大大减少，检测的敏感性也有了进一步提高（对IgM和IgA更敏感）肺炎支原体的血清学试验（二）赛乐迪亚（Serodia）MYCOII肺炎支原体抗体明胶颗粒凝集试验凝集试验与ELISA的原理比较（一）ELISA

Color凝集试验凝集试验与ELISA的原理比较（二）ELISA凝集试验凝集试验与ELISA操作步骤的比较ELISA凝集试验加入样品和稀释液第一步反应洗涤洗涤第二步：酶反应显色第三步：加入底物结果判读孵育凝集图像反应温度对凝集试验及ELISA的影响凝集试验

102030反应温度（℃）反应ELISA不同类型样品对凝集试验及ELISA

检测结果的影响

X：假阳性O加热灭活

X：与底物有关O溶血O黄疸

O脂血

OO血浆

OO血清

ELISA凝集试验样品类型O：无影响：部分有影响X：有影响明胶颗粒的制备明胶阿拉伯胶醋酸染料/色素偏磷酸乙醇水Φ3.0µm表面电荷-0.760~-0.830明胶颗粒（电镜照片）明胶颗粒的致敏

5%明胶颗粒/0.15MPBS（pH7.2）5ppm丹宁酸/0.15MPBS（pH7.2）孵育（37℃，15min）生理盐水洗涤（2000rpm，5min）活化的明胶颗粒/0.15MPBS（pH5～9）抗原孵育（37℃，60min）生理盐水洗涤（2000rpm，5min）5%致敏明胶颗粒/悬浮液*冷冻干燥*

0.15MPBS（加入正常兔血清、明胶、阿拉伯胶等）SERODIA-MYCOII操作步骤SERODIA-MYCOII的结果判读最终稀释倍数非特异性反应滴度40801603206401280256051201024020480对照肺炎支原体（Mac株）++++++＋＋±－－－－－640人形支原体（PG21株）－－－－－－－－－－－<40唾液支原体－－－－－－－－－－－<40口腔支原体－－－－－－－－－－－<40口腔支原体II型－－－－－－－－－－－<40发酵支原体±－－－－－－－－－－<40咽支原体－－－－－－－－－－－<40SERODIA-MYCOII的特异性正常人肺炎支原体抗体滴度的分布MycoII测定的抗体滴度达到1:40：抗Mp抗体阳性MycoII测定的抗体滴度达到1:160：提示新近感染以p180免疫印迹法作为参考方法，用56份血清样品对5种Mp抗体商品化试验进行评估p180/其它方法血清份数CFTIFAELISAPALA＋／＋3333333333－／－2120192221＋／－00000－／＋23412总体一致率

96.4%94.6%92.8%98.2%96.4%敏感性

100%100%100%100%100%特异性

91.3%87.0%82.6%95.6%91.3%CFT：补体结合试验；

IFA：间接免疫荧光试验；ELISA：酶联免疫吸附试验；PA：明胶颗粒凝集试验；LA：乳胶凝集试验SERODIA-MYCOII与其它方法比较（一）p180免疫印迹图象出现显著变化的6对血清样品的血清检测结果患者号(性别/年龄)日期月/日p180印迹CFTIFAELISAPALAO.D.值比率1(男/3岁)1/081/250++<832<641280.010.2727401280－＋2(男/4岁)10/1612/170+++<832645120.210.412<405120＋++3(男/4岁)1/162/170+++<8128128>>2560.340.872.53202560＋++4(男/19岁)10/1611/030++<8102464>10240.310.31140>20480±＋5(男/12岁)3/193/31++++<864<6410240.390.942.44020480－＋6(女/26岁)1/061/19++++<864<642560.270.481.86401280±++CFT：补体结合试验；

IFA：间接免疫荧光试验；ELISA：酶联免疫吸附试验；PA：明胶颗粒凝集试验；LA：乳胶凝集试验SERODIA-MYCOII与其它方法比较（二）某市2003年就诊患者Mp抗体检测阳性率月份分布全年平均阳性率为：40.1%（5254/13094）SERODIA-MYCOII临床应用（一）诊断标准大于等于

1:160小于1:160总计检测阳性数

112

171

283出院确诊数

101

132

233诊断符合率

90.18%

77.19%

82.3%2004年1-3月某医院病房送检Mp结果与临床诊断符合率说明：在283例Mp阳性病例中，有50例的出院第一诊断为非Mp感染疾病，不排除同时有MP感染的可能。SERODIA-MYCOII临床应用（二）SERODIA-MYCOII临床应用结论SERODIA-

MYCOII凝集试验定量检测的是肺