抗原抗体反应

姓名：张瑞玲

学号：20219147

专业：药物化学

课程：免疫根底原理

第七章抗原与抗体相互作用整理课件第一节：抗原抗体反响特点阶段性整理课件第一节抗原与抗体反响的特点一、特异性抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子外表的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。整理课件抗原抗体分子间的作用力.整理课件整理课件抗原抗体交叉反响抗原抗体专一性反响交叉反响无反响整理课件二、抗原与抗体结合的可逆性

抗原抗体的结合反响是一个可逆的反响Ab+AgAb:Ag可逆性指复合物在一定条件下可发生解离，恢复抗原抗体的游离状态。抗原抗体结合是分子外表的结合。影响因素：a.抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离b.环境因素对复合物的影响:－pH、离子强度应用：由于抗原抗体结合的可逆性，可利用亲和层析法别离纯化抗原或抗体；利用待测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合，进行抗原或抗体的定量测定，如放免检测法、酶联免疫吸附法等整理课件三、抗原与抗体反响中量的关系—eg沉淀反响抗体过量平衡点抗原过量抗体抗原前带后带抗原抗体沉淀量抗体一定抗原增加前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：抗原抗体比例适宜整理课件抗原与抗体反响中量的关系比例性〔proportionality〕是指抗原与抗体发生可见反响需要一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时，才形成较大的抗原抗体结合物。以沉淀反响为例，在参加固定量抗体的一排试管中，再依次参加一定量的递增浓度的抗原进行反响，结果发现随着抗原浓度的增加，沉淀很快出现，但抗原超过一定范围之后，沉淀速度和沉淀量随抗原浓度增加反而降低，甚至到最后不出现沉淀，

沉淀反响的速度反映了参加反响的抗原和抗体浓度的适合程度，适合程度高反响快，反之那么慢。通常把最迅速出现可见反响时的抗原抗体的浓度比或量比称为抗原抗体反响的最适比〔optimalratio〕或称等价点〔equivalencepoint〕。抗原与抗体比例最适宜的范围称等价带〔equivalencezone〕。在最适比反响条件下，抗原抗体几乎全部结合成复合物，上清液中根本无游离的抗原和抗体。当抗原和抗体浓度比超过此范围时，可见反响的速度和复合物的量都会迅速降低，甚至不可见，上清液中可测出游离的抗原或抗体。因抗原抗体比例不适宜而不出现可见反响，称带现象〔zonephenomenon〕。如果抗体过量时，称为前带〔prozone〕；抗原过量时，称为后带〔postzone〕。在同一抗原抗体反响系统中，不管抗原和抗体浓度如何变化，其沉淀反响的最适比始终恒定不变，

Marrack提出的网格学说解释了抗原抗体反响比例性的机制。天然抗原大多是多价的，抗体至少为两价，当抗原与抗体在等价带结合时，相互交叉连接成具有立体结构的网格状复合体，形成肉眼可见的沉淀物。当抗原或抗体过剩时，由于过剩方的结合价得不到饱和，只能形成较小复合物，并存在有较多游离的抗原或抗体，不能出现可见反响。但是，当抗原或抗体为单价，不管抗原与抗体的量比关系是否适宜，均不能出现可见反响现象。

整理课件三、抗原与抗体反响的阶段性整理课件当抗体与抗原结合时，如果是颗粒抗原，那么出现凝集现象；如果是可溶性抗原，那么产生沉淀作用，是抗原抗体反响的继发过程。当抗原与同型抗体相遇时，在适宜条件下，不管彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反响的一级阶段。三、抗原与抗体反响的阶段性整理课件在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反响的二级阶段。二级阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速率要慢的多。影响因素：很大程度上依赖于温度、离子强度等外界条件，但更重要的是需要适宜的抗原抗体分子比例。只有当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。整理课件抗原抗体凝集〔沉淀〕反响形成的条件：1、抗原结合价必须在2价以上；2、抗体结合价也必须是2价或2价以上；3、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀；4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求其结合价彼此饱和；5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体复合物，而无沉淀出现，在免疫检测中称为前带现象。整理课件第二节影响抗原抗体反响的因素

整理课件一、反响物自身因素

抗原:理化性状、表位种类和数目1、抗原抗原的理化性状、抗原决定簇的数目和种类均可影响血清学反响结果例如，可溶性抗原与相应抗体反响出现沉淀，而颗粒性抗原与相应抗体反响那么出现凝集;单价抗原与抗体结合不出现可见反响;粗糙型细菌在生理盐水中易出现自凝；红细胞与IgG类抗体结合不出现直接凝集等。整理课件反响物自身因素抗体:来源、特异性、亲和性、效价2、抗体抗体是血清学反响中的关键因素，对反响的影响表现在以下三个方面:(1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反响性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物;家禽免疫血清不能结合哺乳动物的补体，并且在高盐浓度〔80g/LNaCl溶液中沉淀现象明显。单克隆抗体一般不适用于沉淀反响或凝集反响(2)特异性与亲和力特异性和亲和力是影响血清学反响的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。免疫动物早期获得的抗血清特异性较好，但亲和力低;后期获得的抗血清一般亲和力较高，但长期免疫易使免疫血清中抗体的类型和反响性变得更为复杂。因此，用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。整理课件〔3〕浓度:

抗体的浓度往往是与抗原相对而言。适宜的浓度才出现明显的反响现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反响浓度。

整理课件二、环境因素电解质:生理盐水或缓冲液酸碱度:pH6～pH9温度:15℃～40℃，37℃最适整理课件1.电解质抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一局部电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反响;假设无电解质存在，那么不出现可见反响。通常在血清学试验中，以8·5g/LNaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反响液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，那么会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。补体参与的溶细胞反响，除需要等渗的NaCl溶液外，还需适虽的Mg2+和Ca2+离子参与。整理课件2.酸碱度适宜的pH是抗原抗体反响的必要条件之一。血清学试验一般以pH6--9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。整理课件整理课件3.温度抗原抗体反响一般在15一40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触时机，反响速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反响速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反响需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。整理课件T整理课件4、作用时间抗原抗体反响应有足够的时间，不同反响时间不同整理课件此外，抗原抗体反响在液相中反响时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反响。整理课件第三节：主要的抗原抗体反响类型免疫电泳对流免疫电泳对流免疫电泳整理课件第三节抗原与抗体反响-免疫检测法抗原与抗体结合后，只有出现可见的反响，如凝集、溶血、沉淀实验等，或用荧光素、酶、放射性同位素等标记方法提高可测性，才便于在免疫检测中运用。可见性反响的出现，对抗原抗体分子适宜比例的要求远比对彼此绝对量方面要高得多。这就是说，一方面在进行免疫检测时要注意抗原抗体的用量；另一方面只要提高可见度或可测性，便可大大提高免疫检测方法的灵敏度。整理课件一、凝集反响〔Agglutination)凝集反响是指颗粒抗原(凝集原)与相应抗体结合反响出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定条件下出现凝集。抗原称为凝集原(agglutinogen)。抗体称为凝集素〔agglutinin)整理课件二、沉淀反响当抗原是可溶性分子时，与抗体结合那么形成沉淀。1、絮状沉淀反响一系列试管中参加等量的抗体和递增量的抗原，在中性条件下37度保温1-2h，便可见到絮状的沉淀。可用于寻找抗原抗体反响的适宜比例，检测抗原抗体的分子比。整理课件寻找抗原抗体反响的适宜比例整理课件2、环状沉淀反响

在试管中参加抗体后，小心参加相应抗原，使抗原抗体步混合，37度保温10-20min，在二者界面上出现环状沉淀。不能用于定量测定。该试验主要用于鉴定微量抗原，如法医学中鉴定血迹，流行病学用于检查媒介昆虫体内的微量抗原等，因该技术敏感度低，且不能作两种以上抗原的分析鉴别，现已少用。整理课件3、双向扩散试验在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及比照关系，可作出对抗原或抗体的定性分析。沉淀线如靠近抗原孔，那么指示抗体含量较大；靠近抗体孔，那么指示着抗原含量较多；不出现沉淀线那么说明抗体或抗原过剩；另外，如出现多条沉淀线，那么说明抗原和抗体皆不是单一的成分。因此，可用于鉴定抗原或抗体的纯度。当抗原、抗体存在多种体系时，会出现多条沉淀弧。整理课件双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的琼脂，取4mL倒在显微镜用的载玻片上，凝固后打孔.

中心孔滴抗原，外周孔滴抗体,用于测定抗体效价。中心孔滴抗体，外周孔滴抗原，用于检测抗原的存在和定性抗原。整理课件

抗原抗体为单一体系浓度不同

抗原抗体为单一体系时，抗原浓度不同，沉淀弧的特征不同：抗原抗体为多体系时，出现的沉淀弧有多条，彼此互不干扰。右整理课件两种受检抗原〔Ag-1,3.Ag1〕有相同表位，形成一个完全融合的沉淀线

抗体为双价，两种抗原完全不同〔Ag-1和Ag-24〕

抗体为双价，两种抗原〔Ag-1和Ag-12〕皆有相同的1表位，又有不同的2表位，所以沉淀线呈局部融合的形状。

这种技术作为抗原的分析，是目前免疫化学中最常用的鉴定技术之一。

。整理课件4、单向免疫扩散：又称单向琼脂扩散，是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体，孔内参加未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内的抗原向周围扩散，与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量整理课件5、免疫电泳技术整理课件A、免疫电泳免疫电泳为区带电泳与免疫双向扩散的结合，是由Grabar和Williams〔1953〕首先报道的。先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内别离开，然后与电泳方向平行在两侧开槽，参加抗血清。置室温或37℃使两者扩散，各区带蛋白在相应位置与抗体反响形成弧形沉淀线整理课件B、对流免疫电泳对流免疫电泳实质上是定向加速度的免疫双扩散技术，其根本原理是：在琼脂板上打两排孔，一侧各孔参加待测抗原，一侧孔内放入相应抗体，抗原在阴极侧，抗体在阳极侧。通电后，带负电荷的抗原泳向阳极抗体侧，而抗体藉电渗作用流向阴极抗原侧，在两者之间或抗体的另一侧〔抗原过量时〕形成沉淀线。整理课件C、火箭电泳单向扩散开展起来的一项定量技术，实质上是加速度的单向扩散。在含抗体的琼脂板一端打一排抗原孔；参加待测标本后，将抗原置阴极端，进行电泳。抗原泳向阳极，在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀随着泳动抗原的减少，沉淀逐渐减少，形成峰状的沉淀区，形状似火箭，抗体浓度保持不变，峰的高度与抗原量呈正比。+整理课件三、补体结合试验(Complementfixationtest,CFT)

当抗体与细菌、红细胞等颗粒抗原结合并形成抗原抗体复合物后，可结合补体引起溶菌、溶血效应。用补体结合试验既可以测知患者血清中补体的总量，也可以检测未知抗原或抗体的量。测定人血清补体总量的方法是以绵羊红血球的溶血为指示。当绵羊红血球与抗绵羊红血球结合后，加患者血清，观测溶血程度。整理课件补体结合试验整理课件四、中和试验(Neutralizationtest)特异性抗体抑制多种抗原的生物学活性〔细菌外毒素的毒性、酶的活性、病毒的感染性等〕的反响。例如在临床实验诊断中测定风湿病患者体内的抗链球菌O抗体的反响。整理课件第四节免疫亲和层析生物高分子具有能和某种相对应的专一分子可逆结合的特性，例如酶的活性中心或别构中心能和专一的底物、抑制剂、辅助因子效应剂通过某些次级键相结合，并在一定条件下又可以解离。抗体与抗原，激素及其受体，核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸等体系，都具有类似的特性。这种高分子和配基之间形成专一的可解离的复合物的能力称为亲和力。根据这种具有亲和力的生物分子间可逆的结合和解离的原理开展起来的层析就称为亲和层析。整理课件亲和层析法的根本过程：1、偶联：将欲别离的高分子物质的配基在不影响其生物功能的情况下与水不相溶性的载体结合，制成亲和吸附剂或免疫吸附剂。2、装柱：在层析柱内装入固相化的配基3、亲和层析：含有高分子物质的混合液在有利于配基和高分子之间形成复合物的条件下进入装有亲和吸附剂的层析柱。高分子物质结合留在柱内，其他杂质流出。4、洗脱：改变条件，促使配基和高分子物质别离而释放出需要的物质。5、再生：将亲和层析柱的充分洗涤再生，用于下一周期的纯化工作。整理课件整理课件整理课件TheEnd整理课件三、现代免疫标记技术免疫标记技术(Immuno-labellingtechnique)是指将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同位素和电子致密物质等加以标记，借以提高其灵敏度的一类新技术。优点：特异性强、灵敏度高、应用范围广、反响速度快、容易观察、能定位、定量甚至定位。旺雕彤俊仑肖负规谎寇傻抵世编蹬忧侄到资同章哪份贵炬腊邯兑凶非粹舀抗原抗体反响及应用抗原抗体反响及应用整理课件1、免疫荧光技术〔Immunofluorescencetechnique)将结合有荧光素的荧光抗体进行抗原抗体反响的技术。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素〔fluoresceinisothiocyanate,FITC)和罗丹明〔lissaminerhodamineB200,RB200)等。它们可与抗体球蛋白中赖氨酸的氨基结合，在蓝紫光激发下，可分别出现鲜明的黄绿色及玫瑰红色。伺楚爹雾魏毯髓荆朝计宙叼迟们焕岸檬遂聘蜕字俊矿薛腐贱客代狗杂铝娜抗原抗体反响及应用抗原抗体反响及应用整理课件2、酶免疫测定〔Enzymeimmunoassay,EIA)用酶标记的抗体或抗抗体来进行的抗原抗体反响。用酶代替荧光素作标记物以及显示酶标记抗体的方法是用酶的特殊底物来处理标本。由于酶的催化作用可使原来无色的底物通过水解、氧化或复原反响而显示颜色。和瞎仓灭荔烂疆鲁先府哀选煎凭匠宗滁枉持宗释叛茬泉箱韦的啦申樟鞍亩抗原抗体反响及应用抗原抗体反响及应用整理课件免疫酶测定的优点1〕反响结果产生颜色，可用显微镜观察结果。2〕标本经酶标抗体染色后，还可用其他染料复染，显示细胞形态结构。3〕标本可长久保存，随时备查。4〕特异性强。5〕灵敏度高。澡幻坑创琳略趴罩此袍六你普唤奢裳旨冉赂谈日茸择山衙乖婶销鹤巷红脐抗原抗体反响及应用抗原抗体反响及应用整理课件标记酶应具备的特点1〕纯度高、高溶性、特异性强、稳