SN-T 5742-2023 鱼类及其制品中金枪鱼、鳕鱼和虹鳟鱼成分快速检测方法 PCR-试纸条法

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X  中华人民共和国出入境检验检疫行业标准  鱼类及其制品中金枪鱼、鳕鱼和虹鳟鱼成分 

 PCR

PCR

中华人民共和国海关总署 发 

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学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载前 

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学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载PCR—试纸条法1 

本文件描述了鱼类及其制品中金枪鱼成分、鳕鱼成分、虹鳟鱼成分检测的

鱼、鱼、鱼、鱼、鱼、大西

检测。下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件

分析实验室用水规格和试验方法

实验室质量控制规范

食品分子生物学检测

下列术语和定义适应于本文件。

Perciformes），Scombridae

见于世界暖水海域，与鲭、鲐、马鲛等近缘，通常同隶鲭科。常见被称为金枪鱼的商品鱼类有蓝鳍金枪鱼（Thunnus

thynnusThunnus

alalungaThunnus

albacaresThunnusobesus）。

Gadus注：

mykiss鲑形目鱼类，鲑科、太平洋鲑属的一种鲑鱼。注：

F

R

F

R

F

R

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57422023．ｂ兔ｗｗｗｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准学兔下载下列缩略语适应于本文件。

）。

）。

）。EDTA

）。FITC

）。

［Tris］。

-

检测用引物（对）序列及标记物详见表

1 

1 

Ex

）、）。

）。

异丙醇。学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载/T

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g

g

-EDTA

液：

g

解，

/

/

/

g

），

g

），

Tris-HCl

）：

g

HCL

）：

g

）的

K

K

-20 条：试纸条，可通过采购的原料试剂自行组装（见附录

A）或采用等效的商品化试纸条。

展开液：取

Tris-HCl

溶液，200

L

≥

），4±1

L

L

L

L

L）。

±1

核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。8 

鲜活成鱼宜取肌肉组织。如需非致死性取样，剪取部分鱼鳍条或者刮去部分皮肤后取皮下一

3mm~5

mm

脂肪组织。将固状待检样品研磨混匀，分装

份，其中

份为检样，另外

份为留存样品。盐、糖、等，作，过洗涤方式尽量去除样品中的盐、糖和色素等杂质。

m

Mg

L

L

L

L

ng/L）

L

mM

L

O

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mg

L

K

h

g

/

/

/

），

中，

匀，

h

匀，-20

弃上清，用

乙醇洗涤沉淀一次，12000

离心

min，弃上清，室温下晾干。加入

L

，-20

nm

nm

=

×

×

……………（1）式中：

g/L

nm

PCR

2 

PCR

2 

PCR

，PCR

照、照。照，用不

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3 

3 

PCR

LPCR

L

果。以下条件有一条不满足时，实验视为无效：

空白对照：质控线变红，检测线未变红。

阴性对照：质控线变红，检测线未变红。

阳性对照：质控线变红，检测线变红。

，PCR

）。

，PCR

XXX

XXX）成标物种）成分。

）。ｗｗ学兔兔ｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载/T

57422023ｗｗ学兔兔ｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载附 

录 

FITC

Anti-FITC

b

质控线上的二抗：依据上述兔多抗或鼠单抗方案可分别选择羊抗兔或者羊抗鼠抗体。

标引序号说明：1—吸水滤纸垫；

FITC

4—检测带，附有链亲和素；5—质控带，附有可结合兔源抗体的抗体；7—吸水垫。

（FITC

上的生物素结合。

向上部移动，在经过固定有链亲和素的检测线位置时，因带有生物素标记而被链亲和素捕获在该位置上，显示棕红色，过量的产物继续向上移动至固定有羊抗兔抗体的质控线位置，因其带有抗异硫氰酸盐的兔多克隆抗体而被捕获在质控线上，从而显示出两条色带。非特异性扩增的

产物因无生物素或异硫氰酸盐标记的缘故，不能与金标记的异硫氰酸盐抗体结合，且被链亲和素捕获，从而不能在检测线位置显示颜色，而未参与反应的

引物因带有异学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载/T

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载附 

录 

B

金枪鱼成分的基因扩增靶标参考序列（gennbank

号：X97337.1）TCAGCAGTGATAAACCTTAAGCTATAAGTGAAAACTTGACTTAGTTAAAGCTAAGAGGGCCGGTA

号：NC_002081.1）TCTAGGCCTTTGCTTAATTACTCAACTT