实验六果蝇唾腺染色体观察

实验6果蝇唾腺染色体观察一、原理

唾腺染色体（Salivaryglandchromosome)是一类存在与双翅目昆虫，如果蝇、摇蚊幼虫唾腺细胞中的巨大染色体。双翅目昆虫的唾腺细胞发育到一定阶段后就不再进行有丝分裂，而永久停留在分裂间期。但随着幼虫的生长，唾腺染色体仍不断的进行自我复制而且不分开，经过多次的复制形成约1000-4000拷贝的染色体丝，合起来直径达5μm，长度达400μm，比普通细胞中期染色体约大100-150倍，所以又称为多线染色体（polytenechromosome)或巨大染色体（giantchromosome)。

另一特点是体细胞中同源染色体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝结合在一起，紧密盘绕。所以细胞中染色体呈单倍数。二、目的学习果蝇唾腺染色体的制片技术，观察其大小、形态、横纹等特征。了解其与染色体结构畸变的关系。三、材料黑腹果蝇（黑檀体）的三龄幼虫四、步骤1、选取行动迟缓，身体肥大的三龄幼虫，先在载玻片上滴3-4滴0.7%的生理盐水依次刷洗身体，再转入另一张载片1滴0.7%的生理盐水中，左手持一支解剖针按住幼虫尾部1/3处，右手持另一支解剖针按住幼虫头部口器部位稍后（唾液腺基部位置处）并往外拉，将头部从身体拉开，此时一对透明的棒状腺体-唾液腺随之而出。2、用解剖针剥离唾液腺上附着的白色（或灰色）脂肪体，先小心吸去生理盐水，再加入1滴0.1NHCl处理30秒，小心吸去HCl，用ddH2O浸洗２次，小心吸去水分。３、加入１－２滴改良的苯酚品红，染色１０分左右，当腺体被染上色后，即可加盖片，然后在盖片上覆一小块吸水纸，用解剖针柄端轻轻敲打压片（或用拇指轻轻横向揉压压片），压片时勿使盖片与载片间发生相对滑动。４、先在低倍镜下观察唾液腺染色体的整体形态，找到分散良好的唾液腺染色体后，转高倍镜观察。五作业绘出所观察到的唾液腺染色体图象。注意事项:1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。2.将脂肪组织清除干净3.水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃4.染色时间不可过长，否则背景也着色5.压片时用力要均匀6.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片7.吸水时勿将唾腺一起吸走Supplementaldata果蝇唾腺染色体特点：巨大，是多线染色体；正常：间期DNA复制两条染色单体着丝点裂开子染色体核分裂胞质分裂果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，DNA不断自我复制，着丝点不裂开同源染色体紧密配对：体细胞联会，所以染色体只呈现单倍数；形成染色中心，从染色体中心处伸出5条长臂，1条短臂；染色后，出现一系列宽窄不同、染色深浅不一的横纹；果蝇唾腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线多达500～1000条，其长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。

由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。

利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，还可以结合遗传实验结果进行基因定位。此外，由于其体细胞同源染色体的配对，故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。

唾腺的剥离：1.2试剂(1)0.7%的生理盐水(2)0.2mol/LHCL(3)蒸馏水(4)染色液:改良苯酚品红染液

1.1实验材料的选择及培养选取强壮的长翅果蝇和黑檀体果蝇培养三龄幼虫,并进行低温处理。即24℃培养,待有大量幼虫出现后,再转入13℃下处理24h,再转入22℃培养箱内培养,使幼虫充分发育。1.3a操作步骤(1)在载玻片上先加一滴生理盐水,取肥大的果蝇三龄幼虫置于其中,分清幼虫的头和尾。左手持镊子,右手持解剖针,用镊子夹住虫体中部稍后处,不使其移动,右手持解剖针按在幼虫的口器即黑色小点处,水平往前移,唾腺即随之拉出。这时可看到一对透明而微白的长形小囊即唾腺,常在一侧附一条白色脂肪。在拖取唾液腺时必须将幼虫浸在滴有一滴生理盐水的载玻片上,否则唾液腺即使完整脱出来,但由于缺少水分,唾液腺会因为干燥粘在玻片上而被破坏掉。(2)杂质的剥离:滴一滴0.2mol/L的HCL于果蝇唾腺上,解离1～2min,用解剖针轻轻拨动,脂肪等杂质便会和唾腺自动分离。(3)冲洗:用吸水纸小心吸去HCL液,倾斜载玻片,滴2～3滴蒸馏水冲洗。(4)染色:滴上染色液染色20min。(5)在低倍镜下观察,可见腺体细胞核中清晰的染色体,立即盖上盖玻片,覆上吸水纸,用左手食指和中指按住吸水纸边缘,右手大母指垂直适度下压,以唾腺细胞破裂,染色体伸展但不断裂为好。1.3b取培养好的果蝇三龄幼虫放到载玻片上,加一滴生理盐水,将载玻片放到解剖镜下,用解剖针压住虫体的两端向外拉,即可拉出果蝇唾腺.于载玻片上滴加一滴1mol盐酸,软化果蝇唾腺上的脂肪组织,用解剖针将其清除掉,再将盐酸及脂肪用蒸溜水冲洗干净后,用吸水纸将水吸去.将背景净化液滴加到载玻片上,用镊子夹持载玻片,在酒精灯上微烤.用冲洗液将背景净化液冲洗掉.滴染液于载玻片上5min~10min后,用蓝化液将其冲洗,盖上盖片,指头适度用力按压,使细胞中染色体分散开.将标本片经冰箱冰冻取出后,立即用手术刀片将盖玻片轻轻揭下,材料可能留在载片或盖片上,经过脱水和透明,用中性树脂胶封固.Nikon显微镜下观察、摄影.a.果蝇有四对染色体,其唾液腺染色体每对呈联会状态,其中两对着丝点在中间,形成v字状;一对着丝粒在端部呈棒状;一对是点状染色体.它们的着丝点聚在一起,染色较深,称为染色中心.一个完整细胞而分散良好的唾腺染色体,在显微镜下能看到从染色中心伸出五个染色体头.(两对联会的v形染色体共形成四个头,一对棒形染色体形成一个头,一对点状染色体紧靠染色中心,平常看不见).(见图1)b.在唾腺染色体上还可看到染色很深的带以及不着色的区域,在不同种的果蝇中,横纹的宽窄是不一样的,形态和位置也是不一样的.

幼虫的培养1）良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。2）培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16-20ºC范围内，低温下生长的果蝇个体较大。

剖取唾腺

首先将幼虫的头尾分清。果蝇的头部有一黑点（口器），头部作不断伸缩状。解剖时，双手各持一个解剖针，一针先压在幼虫身体的前1/3处，另一针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明微白的囊状体即为唾腺。在唾腺的前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。果蝇的唾腺由单层细胞构成的，因此在解剖镜下可以看到细胞界限。如果唾腺没有被拉出来，可以用解剖针轻压虫体的断开处，把唾腺挤压出来。操作时解剖针一定要轻轻拨动，切不可将肠管、神经管等全部戳断从而影响视线。由于果蝇唾腺几乎透明，但是其上带的脂肪体是乳白色还是很容易辨认的。

唾腺染色体形成时，染色体着丝粒和近着丝粒的异染色质区域聚于一起形成一个染色中心（chromo-center),所以在光学显微镜下可见从染色中心处伸出