马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育技术规程

1培养基，MS培养基和植物生长调节剂母液的配制，脱毒技术，试管苗扩繁和试管凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所NY/T401脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程NY/T2678马铃薯6种病毒NY/T2744马铃薯纺锤块茎类病毒检测技术核酸斑点杂交法2PVX：马铃薯X病毒（PotatoviPVY：马铃薯Y病毒（PotatoviPVS：马铃薯S病毒（PotatovirusPVM：马铃薯M病毒（PotatovirPVA：马铃薯A病毒（PotatoviPLRV：马铃薯卷叶病毒（Potatoleafrollvirus）PSTVd：马铃薯纺锤块茎类病毒（PotatospindletuDAS-ELISA：双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DoubleR：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ReturnPolyacrylamideRT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（ReverseTranscriptioNASH：核酸斑点杂交（NucleicMS：MS培养基（Murashige&Skoog(IBA：吲哚丁酸（Indole-3-BuIAA：吲哚乙酸（Indole-3-AcetAR：分析纯（AnalyticalRe35.2仪器设备配置5.2.1更衣室：紫外线灯、更衣柜、消毒柜、洗手池、工作服、接种服、工作帽、口罩、5.2.2洗涤室：紫外线灯、试验台、洗涤池、洗瓶机、晾瓶架、蒸馏水器、洗涤用机、紫外线灯、烧杯、量筒、移液管、玻璃搅拌棒、容量5.2.4灭菌室：鼓风干燥箱、压力蒸汽灭菌器、微波炉5.2.5仪器室：光照培养箱、人工气5.2.6接种室：臭氧消毒机、移动式空气自净器、空调、超净工作台、体视显微镜（双筒解剖镜）、弯尖手术剪、手持喷雾器、过滤灭菌器、紫外线灯或5.2.8检测室：酶标仪、高速冷冻离心机、电泳仪、电泳槽、PCR仪、5.4培养基试管苗扩繁选用MS培养基（Murashige&Sk色试剂瓶。各母液均放置在冰箱中于4℃条件下保存，使用时再根据需要浓度配成MS培养基，pH值用8.3ml/L的HCl和4.0g/L的NaANH4NO3KNO3KH2PO44B5Na2-EDTAC1H3BO3DVB1EVB6FGH注1：A为大量元素；B为铁盐；C为微量元素；D～H为有机成分；注2：化学试剂规格选用AR。于棕色试剂瓶中，置于4℃冰箱中保存。B9与CCC可以不配制母液，用时生产推广选用通过国家农作物品种审定委员会或山西省农作物品种审定委员会审定的适宜本区域在通过GB7331检疫的产地选择脱毒材5从块茎上切取2cm左右的芽若干个放入烧杯，用纱布封口，在自来水下冲移到超净工作台上，先用75%乙醇浸润10s～30s，在漂白粉饱和上清液或5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min，或在0.1%的HgCl2溶液中浸泡5min～10min，之后用无菌水冲洗4～5次，再用无菌7.3.2使用过的培养容器要立即清除残留物，放在加入洗洁剂的热水中浸泡茎尖组织培养基可选用MS（其中蔗糖20g/L，琼脂6g/L）+IAA1mg/L～30mg/L+KT0.05mg/L~尘，开启空气自净器，使空气净化率达到97.5.2.1操作所用的镊子、解剖刀、解剖针、培养皿均需用纱布包裹后，经67.5.2.2接种服、工作帽、口罩、拖鞋在消毒柜中消毒或用紫上冷却后待用，之后在每次操作中多套工具交替使用切取带1～2个叶原基(0.1mm～0.3mm)的生长点，用接种针将生长点移至试管或三角瓶内培养，每个光照强度2000Lx～3000Lx、光照时间16h/d，一般培养30～40d看到茎尖明显伸长且呈绿色，有小叶发生时将小茎芽转入装有普通MS培养基的试管内进行培养，继续生长并形成根系，经4～5个月可发育成4～5个叶片的小植株。随后将茎尖苗按单节切段，用MS7选用MS培养基。按5.1配方将配制好的MS培养基分装于培养瓶中，220mL的培养瓶可装入20mL,采用透气盖时可适当增量，然后按6.4的要扩繁定植苗时，可采用不含琼脂的MS液体培养基，用量较固体培养基适当减少，瓶内放入方形滤操作环境净化消毒及器械灭菌按6.5的方法进行，无菌操作按6.6的规定执行。操作前，将基础苗瓶瓶外壁上注明品种、日期及其它信息。将培养瓶放置于光照培养架上，培养条件按6.8执行，培养20~9.1生产条件9.2壮苗培养9.3试管薯诱导用MS液体培养基（其中蔗糖80g/L）+6-BA5ml/L+CCC500mg/L+活性炭5g/L，220mL培养瓶可装入30mL培养基，置于温度