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文档简介

关于重组的基本步骤重组DNA的基本步骤获得目的基因DNA分子的体外重组重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定第2页,共17页，2024年2月25日，星期天第3页,共17页，2024年2月25日，星期天获得目的基因的途径限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段人工合成DNA反转录酶酶促合成法聚合酶链(式)反应扩增特定的基因片段第4页,共17页，2024年2月25日，星期天第5页,共17页，2024年2月25日，星期天第6页,共17页，2024年2月25日，星期天这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小的基因组来说，可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法，对于比较大的基因组，可以先制作基因文库，然后钓取所需要的带有目的基因的片段。

第7页,共17页，2024年2月25日，星期天限制性内切酶对DNA的切割方式有两种，一种切割方式是完全酶切，另一种方式为部分酶切。

第8页,共17页，2024年2月25日，星期天第9页,共17页，2024年2月25日，星期天体外重组连接常用的方法

1黏性末端连接法

2平齐末端连接发第10页,共17页，2024年2月25日，星期天第11页,共17页，2024年2月25日，星期天平齐末端连接法：

用化学合成法、逆转录酶酶促合成法获得的DNA片段或cDNA片段，以及某些限制酶酶切产生的DNA片段，称为平齐末端。固然平齐末端可用T4DNA连接酶连接，所需底物的浓度高，效率低。因此通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造的方法是加人工接头或结尾第12页,共17页，2024年2月25日，星期天第13页,共17页，2024年2月25日，星期天这一过程分为两个步骤

1重组DNA引入宿主细胞

2重组体克隆的筛选与鉴定第14页,共17页，2024年2月25日，星期天第15页,共17页，2024年2月25日，星期天第16页,共17页，2024年2

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