基于脑-肠互动理论初探百合知母皂苷治疗抑郁症伴IBS的作用机制

基于脑—肠互动理论初探百合知母皂苷治疗抑郁症伴IBS的作用机制目的：抑郁症与中医百合病有着密切的关联,肠道异常反应是百合病的病症之一,临床上抑郁症患者常伴有肠易激综合征(IBS)等胃肠道并发症或合并症,脑-肠互动理论揭示了抑郁症多伴有IBS的原因,但其科学理论尚未阐明。本研究基于脑-肠互动理论初步探讨百合皂苷、知母皂苷、百合知母皂苷对抑郁症伴IBS的治疗作用及其相关机制。方法：1、百合知母皂苷对抑郁症伴IBS模型大鼠外在指标的检测成年雄性SD大鼠,根据体重及open-field实验选择相近的大鼠,采用半随机的方法分为正常对照组(Normal)、抑郁症伴IBS模型组(Model)、百合皂苷组(Lily-SaponinLS)、知母皂苷组(TimosaponinTI)、百合知母皂苷组(Lily-TimosaponinLT)、抑郁症阳性药氟西汀组(FluoxetineHydrochlorideFLU)、IBS阳性药得舒特组(PinaveriumBromideDicetelPBD)。Normal不做任何处理,Model和其余五组大鼠,给予孤养、夹尾刺激、束缚刺激、慢性不可预见性温和应激刺激(CUMS)诱导建立模型,造模的同时给药,持续6周。检测不同实验阶段大鼠的体重、open-field实验评分、糖水消耗量、AWR评分及排便量的变化。2、百合知母皂苷对抑郁症伴IBS模型大鼠药效指标及其作用机制的初步探讨采用ELISA法检测各组大鼠血清中ACTH、DA、CGRP、VIP的含量变化,血浆中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量变化、脑组织及结肠组织中5-HT的含量变化；应用HE常规染色及醛品红-橙黄G特殊染色检测各组大鼠结肠组织MC的形态及数量变化；利用荧光定量PCR检测各组大鼠下丘脑组织CRFmRNA及其受体CRFR1mRNA、CRFR2mRNA的表达变化。3、抑郁症伴IBS模型大鼠差异表达基因的验证。采用基因芯片检测大鼠血液差异基因表达情况,比较Normal、Model、LS及LT之间的差异表达基因；筛选药物干预的显著性回调的两条基因Rgs19mRNA、Ormd13mRNA并查阅文献对差异基因的功能进行相关了解,利用实时荧光定量PCR技术验证大鼠的血液、下丘脑、结肠组织中Rgs19mRNA、Ormd13mRNA差异表达的可靠性。结果：1、造模给药6周后,与Normal相比,Model大鼠的体重、行为学、糖水消耗量及内脏敏感性有显著差异,表现为体重增长缓慢,行为学运动减少,糖水吸食量减少,排便数目增加,内脏敏感性显著增加。与Model比较,各皂苷组的外在指标都有明显的改善,其中百合知母皂苷的作用优于单味皂苷的疗效。2、与Normal比较,Model大鼠血清中ACTH、CGRP、VIP含量及血浆中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量明显升高(P<0.01),各皂苷组均能明显降低大鼠血清中ACTH、CGRP、VIP的含量及血浆中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量(P<0.05orP<0.01)；与Normal比较,Model大鼠血清中DA含量显著降低(P<0.01),各皂苷组均明显升高大鼠血清中DA含量(P<0.05)；与Normal相比,Model大鼠脑组织及结肠组织中5-HT的含量都有明显的异常变化,并且结肠组织中MC数目增加、脱颗粒明显；各皂苷治疗后能明显逆转5-HT及MC异常变化。通过荧光定量PCR检测结果表明,与Normal比较,Model大鼠下丘脑和结肠中CRFmRNA及其受体CRFR1mRNA表达明显升高(P<0.01),LT能明显降低其表达(P<0.01)；与Normal比较,Model大鼠下丘脑中CRFR2mRNA表达明显降低(P<0.05),各皂苷组与Model比较无统计学差异。3、本研究首次对抑郁症伴IBS动物模型运用基因芯片的方法筛选药物回调显著的差异表达基因,结果发现百合皂苷、百合知母皂苷共同回调差异倍数在1.50倍以上的基因有8条：血清类黏液蛋白1样蛋白3基因(Ormdl3)、G蛋白调节信号19(Rgs19)、蛋白酪氨酸磷酸酶受体N2(Ptprn2)、凝乳酶(Cym)、跨膜蛋白47(Tmem47)、核糖体蛋白L37(Rp137)、锌指CCHC型RNA结合序1(Zcrbl)、外生骨疣样糖基转移酶3(Extl3);本论文验证了Model与Normal相比差异倍数较高的两条基因Rgs19mRNA、Ormd13mRNA的表达结果与基因芯片的结果具有一致性。结论：采用夹尾刺激、束缚刺激、慢性不可预见性温和应激刺激结合孤养,可以成功诱导抑郁症伴肠易激综合征(IBS)大鼠模型,open-field实验、糖水偏好实验、AWR评分及排便量的变化可评价模型的有效性。百合皂苷、知母皂苷及百合知母皂苷治疗抑郁症伴IBS的机制可能与逆转脑-肠互动异常机制中HAP轴ACTH、CRF的含量、逆转单胺类神经递质DA、5-HT的含量、逆转神经免疫因子IL-1β、IL-6的含量、并能减少结肠组织中MC数目有关；同时其作用机制也可能与逆转相关脑-肠肽CGRP、VIP、SP、5-HT的含量变化和CRFmRNA及其受体CRFR1mRNA、CRFR2