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第六章：分子生物学研究方法（下）

－基因功能研究技术一、基因表达研究技术二、基因敲除技术三、蛋白质与RNA、DNA相互作用一、基因表达研究技术1.基因表达系列分析技术（SerialAnalysisofGeneExpression，SAGE）是以DNA序列测定为基础分析全基因组表达模式的技术。方法:以9~11bp作为标签（tag）＝49＝262144组合串联tag并通过两端接头PCR扩增扩增产物进行测序每个tag通过Genebank或EST数据库进行比对确认tag代表的基因表达情况2.RNA的选择性剪接技术RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构体的过程。常用RT-PCR法研究某个基因是否存在选择性剪切。3.原位杂交技术(InSituHybridization，ISH)

用标记的核酸探针，在组织、细胞上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。探针标记用同位素或地高辛、生物素荧光标记等。地高辛标记同位素标记染色体原位杂交人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交

4.基因定点突变技术通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，用于研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质结构功能的影响。二、基因敲除技术基因敲除（geneknock-out）又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造。三、蛋白质与RNA、DNA相互作用1.酵母单杂交系统将待测转录因子cDNA与表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够与顺式作用元件相结合，就能激活启动子，使报告基因得到表达。是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，表达产物非常容易被鉴定。

2008年的诺贝尔化学奖授予了日本下村修、美国马丁•查尔菲，以及美国华裔钱永健。他们三人在发现和研究绿色荧光蛋白(GFP)方面有突出成就。

2.凝胶阻滞试验是用于研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。当DNA与蛋白质结合时，在电泳中会受到阻滞，说明可能与某种特殊蛋白结合了。3.DNAase足迹试验

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