ESI浓度型液相检测器使用综述

ESI的性质ESI通常为浓度型检测器

ESI的性质ESI通常为浓度型检测器12.1mmi.d.柱，流动相流速400mL/min,分流对信号的影响2.1mmi.d.柱，流动相流速400mL/min,分流2

对于上述表观浓度型现象的解释有两种假设。第一种是随着流速的降低，离子化效率增加，但是，随着流速的降低，进入喷雾器的质量流速也比例地降低，因此，信号保持恒定。

对于上述表观浓度型现象的解释有两种假设。第一种是随着流速3

ESI的浓度响应说明：内径较细的色谱柱具较高的绝对灵敏度对于一定量的样品，较低的流速意味着较长的信号采集时间柱后分流不导致明显的信号丢失ESI的浓度响应说明：4分流器的好处

可同时收集经色谱纯化的样品

可同时使用与质谱仪平行的另一检测器

以较低的流速通过离子源以增加离子化效率

因为只有一小部分样品进入离子源，因而有利于保持质谱仪清洁

分流器的好处可同时收集经色谱纯化的样品5灵敏度及线性范围灵敏度及线性范围6

ESI/MS的灵敏度取决于：柱内径、流速和溶剂组成待测成分的化学性质，尤其是其表面活性，因为ESI的机制假定为一种表面离子化技术，具表面活性的化合物（例如去污剂）用ESI时具最高的响应。这些化合物也是对其它表面活性较弱的分子的最有效的离子化抑制剂，因为它们占据了液滴表面

ESI/MS的灵敏度取决于：7分子能在溶液中生成离子也很重要，酸性化合物主要检测其负离子，碱性化合物检测其正离子。分子可通过多种途径取得电荷，如加合物（adduct）的形成（M+NH4+，M+K+，M+Na+，M+Ac-等）及在喷雾器的金属/液体表面氧化/还原。

分子能在溶液中生成离子也很重要，酸性化合物主要检测其负离子，8ESI/MS的线性范围约103至104，取决于样品的性质和溶液中的其它带电物质。当样品浓度约10-5moL/L时，样品离子信号达到上限，这是由于离子競争有限的微滴表面电之故。继续增加溶液中的样品浓度，不能使处样品离子在表面中继续增加。为了进一步扩大线性范围，主要是要设法降低检测限。

ESI/MS的线性范围约103至1049从LC转换至LC/MS

从LC转换至LC/MS10将现有的HPLC方法用于LC/MS时应注意：

硫酸盐、磷酸盐和硼酸盐等非挥发性缓冲剂,需用挥发性缓冲剂，如醋酸铵、甲酸铵、醋酸、三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）、氨水氢氧化四丁基铵（TBAH）等代替。注意离子强度是个重要参数。

将现有的HPLC方法用于LC/MS时应注意：硫酸盐、磷酸盐11pH值，当用挥发性酸、碱，如甲酸、乙酸、TFA和氨水等代替时，通常应保持不变。离子对试剂，应采用挥发性的，如HFBA，TBAH。但是，更换离子对试剂后，很难达到相同的保留时间。分子量较大的离子对试剂干扰较大。

pH值，当用挥发性酸、碱，如甲酸、乙酸、TFA和氨水等代替时12有机溶剂，大多数LC用的溶剂，尤其是反相色谱流动相，与LC/MS相匹配。非极性溶剂只能用于APCI。大多数色谱柱与LC/MS相匹配，但离子交换柱因用非挥发性流动相添加剂及高离子强度可能产生困难。疏水相互作用色谱需用盐浓度梯度洗脱生物分子，非挥发性盐与ESI/MS不相匹配。有机溶剂，大多数LC用的溶剂，尤其是反相色谱流动相，与LC/13柱后修饰：

调节pH值以优化正或负离子检测；

添加异丙醇以利于含水溶剂的去溶剂化和稀释缓冲盐以达到ESI/MS正常工作可接受的程度；

添加醋酸钠（约50

mol/L）以使缺乏或只有弱质子化位点的样品阳离子化（M+Na+）；

柱后修饰：调节pH值以优化正或负离子检测；14用“TFAFix”改善灵敏度；用“TFAFix”改善灵敏度；增加流速，以达到稳定的喷雾。如填充毛细管柱色谱或毛细管电泳，常需柱后添加适当溶剂（补足液流）以利工作；柱后分流，降低流速，这常在采用直径较大的色谱柱，流速较高时使用。柱后衍生化，以提高质谱响应。用“TFAFix”改善灵敏度；用“TFAFix”改善灵敏15TFAFix可在柱后添加丙酸或乙酸（20%酸，80%异丙醇，流速0.1mL/min）。由于沸点（bp）的差别：bp丙酸>乙酸>三氟乙酸

在ESI溶剂蒸发过程中，TFA为沸点较高而离子对作用弱的丙酸或乙酸所取代，因而易于生成[M+H]+，得到较强的质谱信号。

TFAFix可在柱后添加丙酸或乙酸（20%16CE/ESI/MS

CE/ESI/MS17CE/MS，在某种意义上，是近于理想的联用技术：CE分离分析离子基本上基于其质荷比及其在溶液中的不同淌度，而MS分离或分析离子基于其在气相中的质荷比的差异。但是，这两种方法是在两种完全不同的环境中研究离子的运动，CE采用中等电导的液体系统，而MS采用高真空条件。

CE/MS，在某种意义上，是近于理想的联18与LC/MS接口相比较，有其不同的要求，例如：CE流速很低，缓冲系统具中等电导，分析毛细管两端均需保持电接触以确定CE电场梯度，溶质区带的毛细管外展宽必须减低至最小以保持高分离效能等。

与LC/MS接口相比较，有其不同的要求，例如：C19CE/ESI/MS的同轴夾套液流接口（A）及液体汇合接口（B）

CE/ESI/MS的同轴夾套液流接口（A）及液体汇合接口（B20在夾套液流接口中的夹套液体通常为甲醇、甲氧基甲醇、乙腈并含10~20%甲酸、乙酸或水，在CE毛细管（约140~180

mo.d.）和熔融二氧化硅或不锈钢毛细管（约250

mi.d.）间流过。

对于ESI正离子操作方式，+2~5kV的电压加在夾套液体上，夾套液体的流速为2~5

L/min。

在夾套液流接口中的夹套液体通常为甲醇、甲氧基甲醇、21液体汇合接口中，毛细管末端的电接触可由贮槽液体建立（插入一电极），贮槽液环绕着分析毛细管和传输毛细管。两毛细管之间的间隙调整至10~20

m,以兼顾既要有足够的补足液体吸入传输毛细管，又要避免被分析成分扩散入贮槽导致损失。补足液体流是由重力驱动及高速雾化气流产生的吸力的综合作用产生的。

液体汇合接口中，毛细管末端的电接触可由贮槽液体建22ESI离子流取决于溶液的电导，通常为0.1~0.3

A，只有约20~200pA的总离子流通过质量分析器并被检测。为防止毛细管末端的放电晕需用电子清扫剂（electronscavenger），最常用的是六氟化硫（50~200mL/min），除了抑制电晕放电外，还可增加负离子ESI的稳定性。

ESI离子流取决于溶液的电导，通常为023CE分离有关问题

CE分离有关问题24缓冲液的浓度应尽可能低并采用挥发性缓冲盐，同时，其它非挥发的带电成分的浓度也应尽量低。与待测成分相互作用较强的缓冲剂将明显降低检测灵敏度，这是由于形成加合物的缘故。表面活性剂，如十二烷基磺酸钠（SDS），在正