《DNA重组技术的基本工具》-课件

《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件1.DNA的基本组成单位:脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸

胸腺嘧啶脱氧核苷酸脱氧核糖含氮碱基磷酸AGCT2.脱氧核苷酸的种类：知识重温：DNA分子的结构1.DNA的基本组成单位:脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤氢键平面结构立体结构ATGCTACG磷酸二酯键3.DNA分子的结构氢键平面结构立体结构ATGCTACG磷酸二酯键3.DNA分子《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件11限制酶的识别序列有何特点？11限制酶的识别序列有何特点？限制酶识别序列的特点中轴线两侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列如：GAA

TTC

CCC

GGGCTT

AAG

GGG

CCC中轴线限制酶识别序列的特点中轴线两侧的DNA上碱基呈反向对称，重复1、EcoRⅠ（大肠杆菌的一种限制酶）能识别GAATTC序列，并切割G和A之间的磷酸二酯键。2、SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并切割C和G之间的磷酸二酯键。常用的两种限制酶1、EcoRⅠ（大肠杆菌的一种限制酶）能识别GEcoRⅠ黏性末端黏性末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA的末端带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的末端叫黏性末端。什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开SmaⅠ平末端平末端SmaⅠ平末端平末端什么叫平末端？

当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA的末端是平整的，这样的末端叫平末端。平末端平末端什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。E·coliDNA连接T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“氢键TGCGATAC磷酸二酯键TACGTGCADNA聚合酶的作用：把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段末端。磷酸二酯键DNA连接酶的作用：将两个双链DNA片段连接起来。氢键TGCGATAC磷酸二酯键TACGTGCADNA《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件1.载体需要的条件：⑴有1~多个限制酶切点（便于外源基因的插入）⑵对受体细胞无害⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达⑷有某些标记基因，便于筛选⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？

⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？三、“分子运输车”

——基因进入受体细胞的载体1.载体需要的条件：⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。2、基因工程中常用的载体——质粒质粒是一种裸露的、结构简单独立于细菌拟核之外、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点标记基因将来可用在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。

⑴质粒⑵γ噬菌体的衍生物、某些动植物病毒等2、基因工程中常用的载体在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件一、基因工程的概念：二、DNA重组技术的基本工具：1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”

2.DNA连接酶——“分子缝合针”3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”课堂小结一、基因工程的概念：课堂小结《DNA重组技术的基本工具》--ppt课件《D