项目三 3.3分光光度法测定苯甲酸钠含量

仪器分析

生物工程学院项目四——分光光度仪的分析使用——检测饮料中苯甲酸钠分光光度法的原理

分光光度计的结构和使用

分光光度法测定苯甲酸钠含量分光光度计的维护和保养

4123教学目标能力目标知识目标素质目标

（1）会待测样品预处理方法；（2）掌握分光光度计的操作步骤；（3）会用分光光度计测定样品；（4）掌握日常保养和维护方法。

（1）了解分光光度法的原理，理解郎伯比尔定律各符号的含义；（2）理解偏离郎伯比尔定律的原因；（4）掌握分光光度法定量分析的方法。

（1）培养学生良好的职业道德；（2）培养学生严谨的工作作风和安全意识；

（3）培养学生精益求精、实事求是、一丝不苟的职业素质；

（4）团队协作能力。“案例”教学法。“行动导向”教学法。“演示性”教学法。“引导-自主学习”教学法。24教学方法13重点难点：（1）正确操作分光光度计（2）正确对样品进行测定（3）准确书写数据分析报告重点难点分光光度法测定苯甲酸钠含量

任务3：导入3仪器操作与应用苯甲酸钠是一种常用的防腐剂，适量添加能够延长食品的保质期。但过量使用会危及人的身体健康。

学生利用已有的知识讨论完成任务讨论思考1教师讲解示范1溶液的配制准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准溶液10.00mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100.0ug/mL）。再分别准确移取0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ug/mL）。2吸收曲线的绘制选取6.00ug/mL的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200～300nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（227nm附近）。3标准曲线的绘制上述一系列不同浓度的标准溶液（0～10.00ug/mL），于最大吸收波长处分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。4样品测定准确移取10.00mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处测定吸光度。从标准曲线上查得未知液的浓度。

学生分组练习，配制标准溶液；配制标准系列；测定最大吸收，并用标准曲线法进行苯甲酸含量的测定，教师巡回指导。同时对每个学生进行过程考核和结果考核。

学生练习任务33仪器操作与应用归纳总结教师引导学生总结主要知识点和操作关键。43仪器操作与应用分光光度计的维护和保养如何延长仪器设备的使用周期？

任务四

教师讲解演示1.坚持标准溶液现用现配，不使用过期标准液。使用仪器之前，一般要校正仪器，看看空白时透光率是否是100%。2.比色皿应该保持清洁，干燥。如有污物，可用稀盐酸清洗后，再用1：1的酒精与乙醚清洗凉干。禁止用硬物碰或擦透明表面。或者建议使用10%的盐酸溶液浸泡，然后用无水乙醇冲洗2~3次。比色皿具有方向性，使用时要注意，仔细观察比色皿上方应该有一个箭头标志的，代表入射光方向。注入和倒出溶液时，应该选择非透光面。最好使用配对的比色皿。

4设备维护和保养3.防止仪器振动，影响光学系统。4.在开机状态，不测量时，应该打开样品池门，否则，影响光电传感器寿命。5.样品集中测量，避免开机次数，可延长光源寿命。

5.仪器工作稳定性差，漂移大时，应该考虑更换光源或光电元件。

6.一般分光仪主要有光源部分、光路部分、检测器三的部分，光路有的情况是稳压电源问题，钨灯问题及钨灯位置与光路不一致等问题。光路部分主要有比色皿不干净，灯光与比色皿位置不合适（在正常情况下，比色皿位置放一张白纸，可以清楚看到光斑形状呈显矩形，属于正常情况。对于检测器大多数是正常的，但是光敏管或者光电管有时侯也会出现问题。7.若峰出现很多“毛刺”，可能是扫描速度过快，浓度过高或者狭缝过小；

8.紫外分光光度计用来测紫外光时,石英皿用来调零时不稳定,是由那些原因？

首先确定是否用成玻璃比色皿,判断方法在紫外区任一波长下用空气调零测比色皿的吸光度如果超过1ABS则比色皿用错.再次用空气调零看零点是否稳定,如不稳则是仪器问题,如空气稳定而放入石英皿后不稳定,则检查是否空白溶液吸光度太高,是否空白溶液药品过期,或者空白溶液透明范围不适合此波长测量比如甲醇在210NM以下吸光度很大无法调零。

9.仪器狭缝宽度的选择

狭缝的宽度会直接影响到测定的灵敏度和校准曲线的线性范围。狭缝宽度过大时，入射光的单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必要提高仪器的增益，随之而来的是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度的方法是：测量吸光度随狭缝宽度的变化。狭缝的宽度在一个范围内，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。因此，在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，即是所欲选取的合适的狭缝宽度。

注意事项：(1).仪器调零后跳动大的话那可能是仪器有问题.(2).调零稳定的话,看样品浓度是否过高,最好控制在0-1个吸光度之间.(3).浓度合适的话,看是否比色皿没擦干净,一般可用蒸馏水冲洗一下,擦干后用镜头纸擦干净.(4).检查样品是否稳定,如果零点不变而放上样品变化,那么是样品有变化,检查样品是否有问题.仪器维护

（1）.仪器工作电源一般为220V,允许10%的电压波动.（2）.为了延长光源使用寿命,在不使时不要开光源灯.（3）.单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换蛋色器盒干燥剂.(4).必须正确使用吸收池,保护吸收池光学面.(5).光电转换元件不能长时间暴