《乙醇酸甲酯的HPLC法测定》10000字

乙醇酸甲酯的HPLC法测定摘要：本研究通过实验探讨了对于乙醇酸甲酯的高效液相色谱研究方法，本次实验的液相色谱仪为安杰伦1260高效液相色谱仪,色谱柱为eliteHypersilODS25μm，流动相为乙腈和水配比，流速为1.30毫升每分钟，二十五摄氏度设置为柱温箱的温度，检测波长为二百二十纳米。结果表明，乙醇酸甲酯在百分之一到五十的浓度范围之间线性良好，R²=0.99991。检出混合溶液中乙醇酸甲酯平均含量为百分之四点六四，相对标准偏差为百分之一点六二。每次进样量为五微升，实验中通过尝试多种方案，不断地改进实验中所用到的方法，找到比较合适的方案，通过制作标准曲线对待测物质进行检测分析。最终得出的结果表明该方法简便、快捷、高效，适用于乙醇酸甲酯与乙醛酸等混合体系的分离测定。关键词：高效液相色谱法；乙醇酸甲酯；乙醛酸目录摘要……….………2目录……...…..…………….……..…31绪论…………..……..……….31.1乙醇酸甲酯..……………….31.2乙醇酸甲酯的性质……………..….31.3乙醇酸甲酯的合成方法………………...31.3.1乙二醛合成……………………...41.3.2甲醛甲醛羰化一酯化合成法………………...41.3.3甲缩醛和甲酸法……………...41.3.4偶联法…………...51.3.5氯乙酸法…………...53.课程研究的目的和意义……………….………….………….…..63.1课程研究的目的………….…63.2课程研究的意义………….…64.主要研究内容和方案…..…………………..….....64.1主要研究内容……………….64.2实验方法…………………….65.设计流程………….……………....76.主要参考文献………………….....71.绪论1.1乙醇酸甲酯乙醇酸乙二甲酯产品作为一种重要的有机化学合成中间体,具有广泛的市场经济性和用途,其主要组成分子结构组成及其结构相对特殊:它们可以具有与醇的h,羟基和酯的有机反应性基本能团,因此同时还可以具有与乙醇和酯的多种有机化学性质,并且在高温空气中乙醇可以直接与其发生水解反应,氧化缩合反应等,是重要的有机化工原料。乙醇酸乙二甲酯广泛应用于许多医学科研应用领域,包括生物化学,医药,农药,食品,日化工业和中间体。乙醇酸二苯甲酯易中和溶于酸性硝酸甲酯纤维素,乙酸甲酯纤维素和碱性聚乙酸乙烯酯。它们还含有许多不同种类的植物纤维素,胶,橡胶和其他材料的极佳溶剂。[5]将乙醇酸甲酯与其他醇类混合可以得到不同的酯。乙二醇不仅在许多领域都有广泛的应用,包括化学工业,医药和染料,而且更重要的是,它在有机合成中用作中间体。同时,它可用于合成某些抗载体添加剂,以增强润滑剂的耐压性和耐磨性。乙二醇是一种化学中间体,具有以下的用途:乙二醇的还原,水解乙醇酸。在对乙醇酸甲酯的广泛应用和研究开发中,它不仅能够表现出自己的特点和应用,而且更重要的一点是,它同时也是一种酯碱和其类似物的重要相互作用,可以被广泛地用作合成其他各种有机化合物的中间体。有很多产物产品都是来自于原材料乙醇酸甲酯,因此,乙醇酸甲酯有望扩大市场,因为目前在本地和海外都只能买到相对稀少的化学产品。这些种类繁多的产品很大程度上的了开拓了对于乙醇酸甲酯的科研方向。1.2乙醇酸甲酯的性质物理性质乙醇酸乙二甲酯溶液属于一种无色的油状液体,带有一种令人愉快的自然香味。熔点74,沸点150;密度D4=1.168。众所周知乙醇酸甲酯是一种水溶性的,因此它在任意一定比例下均可溶于乙醇和乙醚中。化学性质1）四环碳酸盐氧化脱氢反应:四环乙醇酸基苯甲酯的四环碳酸盐氧化脱氢反应可以产生四环丙二酸基苯甲酯。丙二酸二苯甲酯与一个酸性阳离子交换的溶胶在70°c下直接进行酯化反应并经制备后可得到羟基丙二酸二甲酯,其中的酸性单酯离子转化酶效率大约为84.6%。在均相的Rh配合物和碘化物促进剂的存在下,乙醇酸甲酯催化碳化并生成乙酸甲酯和乙醛。该碳化反应可以用作生产丙二酸单甲酯的无氯方式。2）一种氨化加成反应:dl-氨基甘氨酸j通过其对乙醇酸和苯甲酯的一种氨化加成反应可以进行氨化生成。这样一个简单的复合氨基酸就已经可以让它使用得非常普遍。3）乙醇酸氢化反应:乙醇酸甲酯经过添加氢化合成乙二醇,一种重要的有机化学成分:该反应用于生产乙二醇,因为该酯易于分解。乙二醇的收率很难超过30%。近年来,随着氢化催化剂性能的不断提高,乙二醇的选择得到了极大的改善。4）水解反应:乙醇酸甲酯的水解产生乙醇酸和甲醇。乙醇酸是聚乙醇酸的自动抑制剂。聚乙醇酸是一种可生物降解的物质,是一种可以被人体吸收的药物。5）抗氧化和脱水:从乙醇酸甲酯到乙二酸甲酯抗氧化和脱水。当水中存在一定量的磷酸铜时,它会被分解为水形成乙醛酸。1.3乙醇酸甲酯的合成方法1.3.1乙二醛合成此方法使用的材料为乙二醛和甲醇,Al(NO3)9H2O用作催化剂。在一百六十度高温下进行反应。这个反应30分钟内，我们即可获得一种乙醇酸甲酯。达98%。乙醇酸甲酯约占97%。反应方程式:该法由于反应时的环境化学条件温和,反应分子转换过程速度快,选择性要求较高。然而,乙二醛和苯作为主要化学原料和高含量的有毒化学物质,会直接中毒刺激伤害人体面部皮肤和口腔黏膜,乙二醛40%中毒需要额外花费8000元左右,不利于企业进行大幅度规模化的工业化生产。1.3.2甲醛羰化一酯化合成法在温度高于七十点九兆帕和更高的环境条件下,首先可以形成一种甲醛的水溶液和碳氧基,在此基础上再通过诸如浓硫酸或三氟化硼之类的催化剂，经过相互作用后，产生了乙醇酸。而使用乙醇酸发生一种亲核取代最终可以获取乙醇酸甲酯。的反应方程式:或在主要甲酯催化剂的混合存在下,甲醇和乙酸碳氧基的反应可以形成透明的乙二甲基甲酯化合物,然后再通过使用泡沫酸乙二甲酯和乙基甲醛路易斯催化剂或离子交换剂在树脂等的混合存在下,形成新的乙醇酸乙基甲酯。1.3.3甲缩醛和甲酸法E.L.

yeakey等人首先采取了甲缩醛,甲酸为主要原料,条件是因为甲缩醛含有某种无机过氧化物,并于设定好的条件下，通过实验的方法来反应获得乙醇酸甲酯。例如,使用(ch3o)2ch2、多聚乙醇甲醛,还有(ch3)3cooc(ch3)3,以一个高温一百三十度的方式加热两个小时,然后把其温度调到一百五十度再继续加热一个小时,最终通过这个反应，我们获得了乙醇酸乙酯、还有乙二醇,不仅如此,还获得了乙醇酸甲酯。这些反应的产物它们都很容易被乙二醇溶解,并且因此这些反应产物分离十分困难。1.3.4偶联法根据描述,这种方法主要原料为甲酸甲酯,搭配乙醛或者聚甲醛,选取酸性条件下催化后合成乙醇酸甲酯。它的反应方程式为:1.3.5氯乙酸法该方法采用的是使用氯乙酸与苛性钠的溶液进行混合。在高温沸水洗涤浴中加热,在低温下进行蒸发,氯化钠过滤,在高温油浴中加热以获得稠的溶剂或液体,然后在其中添加甲硫酚和浓硫酸,可逆地获得乙醇酸甲酯,用碳酸钠中和,它的上升允许静置过夜的产品已经被减压后进行分馏,获得乙醇酸甲酯。反应方程式:1.3.6甲醛与氢氰酸加成法在硫酸的催化下,甲醛和氢氰酸进行另外的反应以获得羟基乙腈,然后将其水解以水解以获得百分之八十的收率的甲基乙酸甲酯。陈道埙等人以百分之三十七的工业甲醛氢氰酸反应,得到百分之四十到五十的羟乙腈浓度。在百分之六十到九十八浓度的硫酸存在下,温度为一百一十五到一百三十度,水解反应四到七个小时,将所得乙醇酸从溶液中萃取并在低压下蒸馏,得到约百分之四十五浓度的乙醇酸。羟乙腈约为百分之九十八。硫酸甲酯的硫酸甲酯产率约为百分之九十七,以催化羟基乙腈在七十摄氏度下水解反应两个小时,以及与甲醇在九十度下酯化反应两个小时。但是该过程相对复杂,因此不符合大量工业生产的需求。原料氢氰酸具有剧毒,因此也不符合绿色无害的宗旨。1.3.7甲缩醛与CH₂O自由基加成法反应式该反应在酸性气体的催化下,辅以过氧化物(CH3)3COOC(CH3)3,可以促进甲缩醛配合甲醛,引发自由基加成,但是它的生成物种类比较繁杂,而且选择性比起其他方法较低,乙醇酸甲酯的回收率只有百分之十三。1.3.8草酸二甲酯加氢还原该反应反应的温度为一百八十度。氢气为十三点二兆帕,收率非常高,达到百分之百。本实验主要采用某种金属有机催化剂作为反应所需要的催化剂,它不仅十分温和,乙醇酸甲酯的吸收率更是可以达到百分之九十五。这种方法所要采取的几种类型的催化剂都是属于有机物质和贵金属,它们所需要制备的催化剂和工艺比较繁杂、并且在价格方面比较昂贵,想要回收更是难上加难。日本公司采用了负载型铜并且在其中搭配了银作为催化剂,以这种方式合成的草酸二甲酯能够实现转化率可以达到百分之九十,乙醇酸甲酯收收率可以达到百分之六十八。以纳米铜反应而产生的银作为催化剂,研究了利用草酸二甲酯一步氧化或者加氢反应方法,压力条件为四点五兆帕,此方法选择性可达百分之八十九,收率在百分之六十八以上。这种制备方法的最大优势是草酸二甲酯只需要一步便可轻松地获得乙醇酸甲酯,并且选择性很高,收率也在可接受范围只内,这种设计路线对于工业生产来说是比较有利的.1.4乙醇酸甲酯的研究现状与分析方法1.4.1乙醇酸甲酯的研究现状在我们国家,煤制乙二醇这种工艺发展蓬勃,已经逐渐走向成熟,实现了从研发阶段到工业使用阶段的跨越。随着煤制乙二醇工艺的不断改进,对于它的衍生产物乙醇酸甲酯,人们逐渐开始重视它的研究与利用。乙醇酸甲酯的优势在于,不仅它的操作环境比较安全,而且造成的污染较少,有利于环境的保护。这些优势都说明它是一条十分具有发展潜力的绿色合成路线。对于乙醇酸甲酯更加合理、规范的使用不仅能够为煤制乙二醇工艺带来巨大的效益改变,而且能够大大降低乙醛酸的生产所需成本。1.4.2乙醇酸甲酯的分析方法目前,对于活性乙醇酸的色谱分析方法,主要技术包括:溶液颜色比较法、GC法、高效率的液相色谱法、NMR法、IC法、高效毛细管电泳。其中,比色法(spectrophotography)主要依据浓硫酸和萘酚还有羟基乙酸之间的显色反应,但是众所周知,有许多物质在浓硫酸与萘酚同时使用的条件下都可以显色,因此这种法在定量分析中没有足够的准确度。乙醇酸这种物质具有热不稳定性,不仅如此,它还具有活泼性羟基,化学性质十分活泼,想要使用此方法（GC）,必须要通过硅烷化后,获得衍生物再对其含量进行分析。但是如果使用这种方法进行处理,分析后结果的重现性会明显下降,并且此种方法成本明显升高。实验表明,将高效液相色谱法应用乙醇酸甲酯水解反应中,不仅操作简洁方便,还具有高效和准确的优势,测定的契合度很高。1.4.3乙醇酸的研究现状乙醇酸的分析方法目前主要有:GC法、高效液相色谱法、分子发光光谱分析法、IC法、高效毛细管电泳法和NMR法等。其中，分子发光光谱分析法基于显色反应，然而多种化学物质在H2SO4与萘酚同时存在时会产生反应，所以此法定量分析的准确性不高。1.5乙醛酸的研究现状乙醛酸,它的化学成分在其化学分子中主要就是具有二乙醛基和羧基这两种化学官能性基团,它也就是一种化学结构最为简单的二乙醛酸,不仅在高温空气中不仅能够与醋酸乙醛脱氢发生缩合加成反应,还在高温空气中能与醋酸乙醛脱氢发生酯化缩合反应,它的这些化学特征,使其被各种化工香料、医学、地质学、皮肤病的生产、纸张的生产研制以及医药生产、食品化学添加剂等各个化学行业广泛研究采用。对于酸性乙醛酸,最为典型的氧化合成乙酸方法主要有:醋酸香兰素氧化合成、制造尿囊素以及苯乙酮产品的生产。在最近的几年里,工业生产对于乙醛酸的使用需求逐渐增加,具有非常可观的市场需求。因此,对于乙醛酸精确定量的制造具有非常重要的价值和意义,对于相关产品行业的市场需求也是极为迫切的。1.6乙醛酸的分析手段查找各种文献发现,在目前条件下,对于乙醛酸的测试方法有很多种,它们是光谱学,potentiometrictitration,毛细管电泳和高效液相色谱。光谱法确定了羟胺盐酸盐和醛加成产物的紫外线吸收特性。但是该方法对于各方面条件的需求较高,比较难以使用。醛基无法准确地区分不同的分子模型在滴定过程中的有效性,potentiometrictitration是一种采用酸碱中性反应原理,通过添加二甲基乙酰胺溶剂而可以获得滴定突变,从这个反应方法我们可以准确地区分出强酸和弱化的酸。但是,该种方法暂时还无法区分具有类似于乙醛酸的电离常数和其他较弱的强碱。已经有一些文献表明使用了高效毛细管电泳和毛细管带电泳等方法来检验草酸、乙醛酸。但是,电泳分离重现性差的关键技术障碍尚未能够为工业提供一个令人感到满意的解决办法。其中有两种检测方式可以使用具有高效液相色谱的二甲基乙醛酸。第一类是将hplc离子作为反应物或者是外标间的离子抑制剂。接方法结合使用来直接测定。[4]但是,在该过程中对乙醛酸的保留期比较短并且其灵敏性降低。但是当样本的背景非常复杂,很难有效地区分乙醛酸与复杂的基质。另一种高性能液相色谱法是乙醛酸产氢,并用2,4-二硝基苯肼(dnph)以使用这种氢气来制备该种氢气,以确定其在紫外-可见光下的强特性吸收。已在文献中使用已经报道乙醛酸发生反应方法。但是,本文中并未提及乙醛酸在dnph衍生物的过程中所产生的羟基异构体。同时,通过研究衍生过程中的一系列条件,建立了一种快速,准确的HPLC检测糖基酸的方法。1.7乙醛酸的合成方法硝酸氧化法曾舟华等开发了一种硝酸空气氧化工艺法来制备乙醛酸的釜液再次循环。在反应釜上方新增设一套釜液循环吸收柱、泵、变频器组合而成。不必再需要随意地改变原来的生产工艺车间及其设备的布局,就可以能直接地利用原来的反应釜,将硝酸氢甲基氧化乙二醛反应过程中生成的no,用空气中的氧化物转换为no2,noz进入吸收柱,被冷釜液吸收后再重新返回到反应釜,与乙二醛反应时失去的氧又转换为no。不仅大大减少了对硝酸的消耗量和nox尾气的排放,还大大提高了产品对乙醛酸的吸收。鲍应元等人和研究人员开发了一种合成乙二醛-硝酸酯的氧化反应法和有机合成一种乙醛酸的氧化反应液的热处理工艺技术及其生产设备。将二次减压反应配制所得的天然乙醛酸中选用含量一定浓度为10%~25%的乙醛浓缩液为反应液,经过一级减压浓缩机和蒸发器二次加热减压分离浓缩,除去大多数低温高沸点的乙醛酸性原料杂质,再经二次减压结晶处理加热减压分离,除去部分剩余乙醛副产物乙乙草酸,然后经过二次减压浓缩进行减压分离浓缩,除去其它部分酸性原料杂质.将配制所得的乙醛浓缩液用少量人工纯化乙醇水溶液进行减压稀释,配制可以生产和合成一定含量浓度的天然乙醛和草酸类原料产品,从而达到可以充分达到二次减压分离和人工提纯生产乙醛酸的重要意义和应用目的。所述浓缩设备主要装置包括一级稀释浓缩液的蒸发器、结晶稀释分离浓缩装置、二级稀释浓缩分离装置和一级浓缩液的三级稀释分离装置。叶龙等将100份有机亚硝酸水和钠质量的溶液浓度分别为40%的有机乙二醛硝酸水溶液、10~20份有机亚硝酸水和钠质量的溶液浓度分别平均为30%的有机盐酸氢钠溶液和10~25份有机亚硝酸水质量浓度分别为5%~20%的有机亚硝酸水和钠溶液,然后依次加入搅拌到所述相应的快速搅拌机和容器中,升温至45~55℃,加入0.12~0.62份有机亚硝酸钠,即可迅速获得有机引发的开发性化学体系;然后在55~65℃、常压和快速连续搅拌的加热条件下,用有机气泡或沸石向所述各个引发发性体系中依次通入适量的有机氧气,同时向所述各个引发发性体系均匀地依次滴入添加30~40份有机含氧水和浓度为30%~45%的浓亚硝酸;在采用高温快速搅拌的加热条件下,升温至75~85℃,保温1~2h;再依次继续加入1~4份浓度相当于氨水质量的浓亚硝酸,浓度作用范围分别为30%~45%,继续保温1~2h,制得一份乙醛酸。这种生产方法主要是一种同时具有使用硝酸剂的实际使用量相对较少、氮氧化物大气排放影响较小、产率高、有利于企业实现原料工业化生产等多大优势的生产方法。乙二醛空气或氧气氧化法刘春秀等其他人将一种利用化学沉积-有机沉淀法和有机溶液相对性还原法联合生产的金属烯系列羟基乙醛酸合物作为有机催化剂,以有机氧气形式进行羟基乙二醛的有机氧化而得以合成羟基乙醛酸。结果表明,与目前传统的乙醛沉积-溶液沉淀法制取反应设备相比,采用乙醛溶液相变性还原反应法制取设备的乙醛催化剂金的实际催化负载稳定能力要求相对于传统催化剂金的实际稳定性能力要求更高,表现是因为乙醛具有较高的催化活性,当反应溶液浓度ph=7.7,反应进行过程溶液中的催化温度大约为25°℃时,乙醛酸收率最高可以直接达到6.2%。苏琳琳等通过利用晶种化学物质还原和利用晶种化学传播媒体两种生长反应方式的先进工艺技术制备了不同颗粒大小和各种尺寸的金属碳纳米塑料颗粒,将其原料作为化学负载物质并放置在化学活性炭上以迅速获得原料au/c作为催化剂,应用于液相化学催化制备氧化羟基乙二醛和液相制备羟基乙醛酸的化学反应。实验研究结果显示,金黄铜纳米粒与催化剂之间仍然存在着明显的主要大小粒度尺寸改变效应,其中金黄铜纳米催化颗粒的主要大小尺寸是由3.5nm³在负载下所改变形成的1%au/c使该催化剂的催化活性最高。其他方法鲍应元等[17]领导研究人员开发了一种对聚苯乙醛酸的有机复合反应氧化和合成聚苯丙烯的有机合成应用工艺。将活性乙二醛乙酯水溶液与活性盐酸乙酯水溶液进行混合后于40~7o℃下,在其他引发诱导催化剂上进行加入其他诱导催化剂而停止引起的水解反应;于50~7o℃下,分别在活性乙醛酸水解溶液和活性过氧化氢水解溶液中进行加热,再将其中的温度控制系数调节至70~85°℃,保温0.5~3h,得到活性乙醛酸水解反应液。将羟基乙醛酸脱水反应液经过高温减压、浓缩、结晶处理分离为乙草酸,得到本次实验产品。该复合氧化吸收工艺主要采用的是硝酸-过渡二氧化氢酸的复合吸附氧化反应体系,提高了部分乙二醛在复合氧化化学反应过程中的化学选择性,抑制了其他物质生成氨和草酸的化学副作用,提高了部分乙二醛在工业空气环境中的复合转化吸收效果,同时它也大大降低了工业生产物中生成乙二醛和生成草酸等有机化学金属杂质的大量排放,改善了工业生产物的空气质量,提高了部分乙醛酸在工业空气环境中的复合吸附氧化效果;以硝酸过氧化氢代替取代部分生成硝酸,减少了部分硝酸的合理使用量和工业废气的大量产生,有利于环保。1.5高效液相色谱法简介又叫高效液相色谱法或超快液相色谱法。采用高压下的液体作为流动相柱色谱法。液相色谱中各种溶质的扩散系数应该为气相色谱的10-5~10-4;所用流动相的黏度比空气相色谱大约100倍左右;液体流动相的构造对柱内吸附分配平衡的重要性影响非常大,往往会成为我们在选择分离时进行最优化条件时的主要考虑因素,而气相色谱中的流动相对分离时进行的影响通常是完全可以被忽略的。按照固定相与流动相之间的一个相对极性的尺寸来分类,高压液相色谱一般可以细分为正相色谱和逆向色谱。正相色谱以硅胶或其他极性键合相为主要填料,以非极性溶剂为主要冲洗材料;一般来说,流动相的极性要远远小于固定相。逆向相色谱以极性较小的化学物质为基础来做固定相,流动性反应则极性更强。反相冲洗色谱常见的固定相主要应用指的也就是以烷基硅胶为主要基质的各种烷基组成键的联合相,如十八烷基键的联合相;而水冲洗性溶剂色谱大部分都是采用烷基乙腈-液的水或烷基甲醇-液的水冲洗体系,能够有效促进存在分子量和化学极性之间密度相差较大的各类色谱样品不同成份的各组分之间进行反相冲洗和化学分离。高压柱的液相色谱分析法主要特点具有以下几个优点:①柱在高压柱的流动相比柱在低温高压下的工作流速快,大大缩短了液相色谱的工作分析量和工作持续时间;②柱在低温高压下也完全可以直接选择使用惰性微粒(一般30~40μm,最低值一般可达10μm)高效固定相,使柱的分析工作效率可以得到很大幅度提高,柱的色谱分辨率可以得到很大很小幅度地显著改善;③柱的灵敏度很高可自由选择,灵敏度高,能连续测定组分的检测器。由于HPLC法适用于热稳定性差,高沸点试样的分析,而可克服GC的不足,被认为是与GC互补的两大现代分离分析技术。2.1.6高效液相色谱法的主要类型吸附色谱(AdsorptionChromatography)分配色谱(PartitionChromatography)离子色谱(IonChromatography)体积排阻色谱(SizeExclusionChromatography)亲和色谱(AffinityChromatography)2.试验部分2.1仪器与试剂乙腈，分析纯，阿达玛斯试剂公司；乙醇酸甲酯，98%，阿达玛斯试剂公司；乙醛酸水溶液；水，去离子水；Agilent1260Infinity型高效液相色谱仪；色谱柱HypersilODS2（4.6mm×250mm，5μm）；检测器，可变波长扫描紫外检测器（VWD）超声波清洗机。流动相的配制：流动相A（水）先经过微孔滤膜真空过滤后，超声脱气备用，流动相B（乙腈）为色谱纯，直接备用。2.2试验方法2.2.1样品处理取待测样品1.5ml加入注射器中，安装0.22μm过滤膜，经过滤膜过滤后加入样品瓶中，震荡摇匀。2.2.2实验操作将样品置于自动化进样器的一个样品盘中,在联机工作站中设置好每次进样的位置,进样量为5.0μl,按照各种色谱条件的不同,使用多种色谱条件连续地进样多次,根据资料优化和分析的条件,找到最合理的色谱条件,在最适应的条件下将配制好的标准溶液,通过外标方法作出它的色谱标准曲线,采用峰面积增量法与峰保留比较法对来进行定性、定量的分析。3.结果与讨论3.1检测波长的确定根据相关文献[3]所述,乙醇酸乙苯甲酯在202nm波长处应具有最大的分子吸收峰,在这里考虑到其中的分子流动相关性是基于乙腈和乙醇水溶液,检测的吸收波长范围可以重新设定大约为220nm。3.2色谱条件的建立3.2.1色谱柱的选择实验中所采用的流动相是一种水-乙腈体系,需要一款质量高并能够经受热冲洗的色谱柱,否则当流动相反复冲洗时,色谱柱就会因为自身的碳链相互作用而逐步坍塌,导致其流动相和固定相之间的摩擦力日益降低和减弱,从而可以使得色谱柱的质量和寿命大大缩短。在通过分析和对比一些常用的色谱柱后,发现hypersilods2c18色谱柱的峰型以及分离效果较好,并且经过多次的进样后发现了该物质的分离过程中,峰型与分离度未发生明显变化,因此,选择HypersilODS2C18色谱柱为实验所用色谱柱。3.2.2流动相的选择分别用水、甲醇-水、乙腈-水作为流动相研究分离结果，试验得出：使用纯水作为流动相，柱效较低；使用甲醇-水作为流动相，甲醇的会有强的本底吸收，对检测器结果的干扰较大；用乙腈-水作为流动相，两组分的分离效果较好，得到的峰型比较窄且对称。3.2.3流速的选择通过对0.5ml/min-1.5ml/min之间的各个流速进行测试,发现随着各个流速的下降和减小,各个组分的峰值保留时间逐步增加,样品之间的分离度逐步增大。综合地考虑各个组分的水平和分离程度以及进入出峰期的时间,选用一般为1.3ml/min较为适宜,流速过大会导致各组分峰相互干扰,而流速过小会造成柱压过小,峰型拖尾并且不对称。3.2.4流动相组成比例的选择流动相A与流动相B的比例对于乙醇酸甲酯和乙醛酸的分离效果影响较大。试验尝试的A与B混合比例分别为100：0、90：10、80：20、70：30、60：40、50：50和30：70的流动相。试验发现：随着乙腈含量越来越大，峰的分离度明显降低，保留时间缩短，综合考虑保留时间与分离效果，选定70：30作为流动相配比为较好选择。3.2.5柱温的选择对比20℃、25℃、30℃这三个柱温箱温度下的乙醇酸甲酯峰型与分离度，发现基本没有变化，考虑适度提升柱温箱的温度可以减少仪器静电而产生的干扰，还可以减少由于室温变化的不确定性产生的重复性误差，从而使方法更加准确可信。因此，综上考虑，选择25℃为实验温度较为适宜。3.3线性实验精密移取100%乙醇酸甲酯5，2，0.5，0.2，0.1mL于10ml容量瓶中，以流动相稀释定容之后，制得50%，20%，5%，2%，1%五个浓度不同的标准溶液，用这些溶液分别进样，以标准溶液的浓度为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制出标准曲线，见图1.

图1乙醇酸甲酯标准曲线由图1可知，乙醇酸甲酯浓度在1%-50%的范围之间，线性良好。3.4精密度实验精密吸取5%乙醇酸甲酯标准溶液1ml，加入样品瓶中，按照设定好的色谱条件，连续进样5针，测得结果相对标准偏差为1.36%，说明该检测方法精密度较好。3.5重复性实验取待测样品，经过0.22μm滤膜后制备5份样品待测溶液，分别移取100μL进样测定，通过外标法标准曲线进行定量，5份样品中的平均含量为4.64%，相对标准偏差为1.62%，由此可见此方法重复性良好。4.结论用高效液相色谱法测定乙醇酸甲酯和乙醛酸混合溶液，各组分之间分离效果较好，方法简便，分离检测速度较快，精密度和重复性良好，可以用于乙醇酸甲酯反应体系中乙醇酸甲酯与乙醛酸的定性定量分析

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