四氢姜黄素纳米乳的制备与体外质量评价

四氢姜黄素纳米乳的制备与体外质量评价【摘要】目的：筛选合适纳米乳处方并制备四氢姜黄素纳米乳，对制得的四氢姜黄素纳米乳进行体外质量评价。方法：比较四氢姜黄素在不同油相中溶解度筛选合适油相，运用转相法制备纳米乳并绘制伪三元相图拟定纳米乳处方，借助紫外分光光度法对所制纳米乳进行含量测定，并通过测量粒径、电位、体外释放度等对其进行体外质量评价。结果：实验测得溶解度最大的油相为MCT（3.33mg/mL），利用伪三元相图筛选出纳米乳的较佳处方为纯化水66.6%，MCT8.3%，吐温8016.1%，司盘803.8%，PEG4005.0%。所建立紫外分光光度法测得四氢姜黄素在320nm波长处吸光度最大，其标准曲线方程为y=0.0886x-0.0206，在3.192~8.512mg/mL范围内呈线性。所制得四氢姜黄素纳米乳澄清透明，为O/W型，粒径71.8nm，PDI为0.206，电位-4.30mV，pH值5.39，包封率96.78%，含量6.28mg/mL，24小时体外累积释放百分率83.18%，体外释放规律符合一级动力学方程，稳定性实验结果符合规定，稳定性常数KE1.97%。结论：本研究制备的四氢姜黄素纳米乳质量评价结果优良，制备方式简单可靠。【关键词】四氢姜黄素；伪三元相图；纳米乳；质量评价Preparationandinvitroqualityevaluationoftetrahydrocurcuminnanoemulsions[Abstract]Thepurposeofthisstudywastoscreensuitablenanoemulsionprescriptionsandpreparetetrahydrocurcuminnanoemulsions,andtoevaluatethequalityofthedrug-loadednanoemulsionsinvitro.Firstly,thesolubilityoftetrahydrocurcuminindifferentoilphaseswascomparedandtheappropriateoilphasewasselected.Then,thenanoemulsionwaspreparedbyphasetranspection,andapseudoternaryphasediagramwasdrawntocomparetheemulsionareasizeofdifferentprescriptionstoformulatethenanoemulsionprescription.Finally,theinvitroqualitywasevaluatedbymeasuringparticlesize,potential,invitrorelease,drugcontent,etc.TheoilphasewiththelargestsolubilitymeasuredbytheexperimentwasMCT(3.33mg/mL),andthebestprescriptionsforscreeningnanoemulsionbypseudoternaryphasediagramwerepurifiedwater66.6%,MCT8.3%,Tween8016.1%,Sipan803.8%,PEG4005.0%.Tetrahydrocurcuminhadthelargestabsorbanceatawavelengthof320nm.Thelinearregressionequationisy=0.0886x-0.0206,R2is0.9991,andthelinearrangeis3.192~8.512g/mL.Theaveragedosingrecoverywas100.43%,thestabilityRSD0.23%,theprecisionRSD0.23%,andtherepeatabilityRSD0.38%.Thetetrahydrocurcuminnanoemulsionwasclearandtransparent,withO/Wtype,particlesize71.8nm,PDIof0.206,potential-4.30mV,pHvalueof5.39,encapsulationrateof96.78%,contentof6.28mg/mL,24-hourcumulativereleasepercentageof83.18%,goodstability.Finally,itwasconcludedthatthequalityevaluationresultsoftetrahydrocurcuminnanoemulsionpreparedinthisstudywereexcellent.[Keywords]TetrahydrocurcuminPseudoternaryphasediagramNanoemulsionQualityevaluation目录1前言 [4]；通过抑制黑色素生成相关转录因子（MITF）的表达，减少黑色素生成，从而使皮肤变得白皙REF_Ref16213\r\h[5，REF_Ref16219\r\h6]；通过抑制氧化应激，改善皮肤光老化现象REF_Ref16324\r\h[7]；其β双酮结构还可起到抗炎作用REF_Ref16360\r\h[8]。此外，四氢姜黄素还具有抗肿瘤REF_Ref127645058\r\h[9，REF_Ref16412\r\h10]、血管保护REF_Ref17274\r\h[11REF_Ref16595\r\h，12]、改善更年期症状REF_Ref16663\r\h[13]、治疗眼部疾病REF_Ref16781\r\h[14]、抗菌REF_Ref16817\r\h[15]、改善肾损伤REF_Ref17372\r\h[16]等多种药理活性。1.1.2理化性质四氢姜黄素作为一种天然化合物，在水中的溶解度较小，不利于皮肤的吸收利用。THC不仅水溶性差，而且在多种护肤品常用油脂中溶解度较低，阻碍了其在护肤品中的实际运用。THC还具有２个羰基、２个酚羟基和多个双键，这些活泼基团易被空气氧化，从而导致THC的活性下降。上述理化性质影响着THC的生物利用度，导致其在实际应用中无法达到预期效果。故通过减少理化性质带来的不利影响，从而进一步提高生物利用度成为其开发利用的一大突破口REF_Ref14204\n\h[17]。1.1.3剂型研究进展四氢姜黄素作为新兴的天然化合物，目前对其新型制剂的研究相对较少。KomalSaini等通过微乳化法制备THC脂质纳米颗粒凝胶，并证实其有利于治疗皮肤炎症REF_Ref25556\n\h[18]。何鹏等制备了THC聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米颗粒，并对其促进创面愈合能力进行评估REF_Ref22068\n\h[19]。赵仕芝制备了四氢姜黄素脂质纳米粒，并对其美白能力进行评价REF_Ref14354\n\h[20]。赵军宁等制备了THC固体分散体,通过体内外实验证明其对四氢姜黄素生物利用度的提升有积极作用REF_Ref25723\n\h[21]。上述实验研究结果均表明采用新型递药系统作为载体可提高THC的生物利用度并改善药物稳定性。1.2纳米乳纳米乳属于纳米递药系统之一，其外观为透明或半透明状，流动性好，粒径10nm-100nm，属于热力学稳定系统。可大致分为O/W型（水包油）、W/O型（油包水）、双连续型三大类，其类型受组成成分的用量和种类影响REF_Ref22672\n\h[22]。1.2.1组成成分（１）油相通常来说，油相的分子量越小，与表面活性剂的嵌合能力就越强，在纳米乳制备中优势越大，故纳米乳的制备常选择中短链油相。除分子量大小外，油相对药物的溶解度也对纳米乳的形成有一定影响，制备时需选择对药物溶解度较高的油相。表面活性剂表面活性剂在纳米乳中的含量较大，可达20%-30%，它通过降低油水两相之间的表面张力从而形成纳米乳，还可对药物起到增溶作用。其HLB值与油相越相近，越有利于形成纳米乳REF_Ref127645211\r\h[23]。此外，离子型表面活性剂的毒性比非离子型更大，考虑到其毒性对制剂安全性的影响，在实际制备中通常选用非离子型表面活性剂。助表面活性剂助表面活性剂可以协助降低油水两相的界面张力，改善界面膜的稳定性，是必不可少的辅助性成分。通常使用中短链醇或一些具有增稳、增稠作用的高分子材料，如乙醇、甘油、聚乙二醇等REF_Ref12260\r\h[24]。表面活性剂和助表面活性剂的比值称为Km值，其变化对纳米乳的外观和伪三元相图成乳面积均产生影响，故选择合适的Km值可以改善纳米乳的外观和成乳面积，从而筛选出更稳定的处方。（４）水相通常使用去离子水或双蒸水，也可根据实际需要使用适宜pH值的缓冲液。1.2.2制备方法纳米乳常用制备方法如表1所示。表1常用制备方法方法原理优点缺点高能乳化法使用功率较高的设备，通过机械力作用形成纳米乳，常用高压均质法、剪切法粒径较小，分散均一，体系稳定耗能较大，对设备要求高，可能造成药物破坏低能乳化法利用转相点时体系的性质形成纳米乳，常用转相法、相变温度法成本低，过程温和，不易破坏药物粒径较大，多分散系数较高自乳化法体系中各组成成分以一定比例混合时可以自发形成纳米乳无需外界做功，成本低，操作简单各组分的种类、用量难以确定本研究运用转相法制备纳米乳，该方法操作简单，耗能较少。相转变法首先将乳化剂、助乳化剂与油相混合均匀，在适宜条件下逐滴滴入水相，此时形成W/O微乳液。不断的滴入水相，使水在体系中百分含量增加，此时表面活性剂的曲率会自发的增大，由负值增加到零。继续滴加水相至越过转相点，此时表面活性剂的亲水亲油值达到平衡，曲率由零到正值，则形成O/W纳米乳液REF_Ref17979\n\h[25]。1.2.3作为护肤品的应用纳米乳制剂作为护肤品优点众多，如体系的稳定性良好，在生产、运输、储存过程中不易产生絮状沉淀；生物利用度高，具有较小的粒径和较大的表面积，可通过多种促渗机制增加活性物质在皮肤表面的透过；保护不稳定药物，延缓药物的氧化、水解等反应；增加亲脂性药物的溶解度，也有助于掩盖护肤品常用油脂产生的不良气味；黏性小，流动性良好，方便消费者实际使用REF_Ref22741\n\h[26]。基于上述优点，纳米乳护肤品的应用前景十分可观，目前已经有许多针对天然化合物纳米乳护肤品的研究，如葵花籽油纳米乳防晒霜、具有防晒潜力的维生素E纳米乳，但是纳米乳作为经皮递药体系的应用也存在一定的局限性,如生产成本较高、运用大量表面活性剂导致毒性上升等，目前国内外尚无纳米乳经皮制剂上市。因此，对于纳米乳护肤品的研究仍会在较长时间内持续发展。2仪器与试药2.1仪器表2实验仪器仪器名称型号厂家紫外分光光度计UV-2700岛津仪器（苏州）有限公司超声波清洗器KQ-100型昆山市超声仪器有限公司电子天平SOP赛多利斯科学仪器有限公司送风定温恒温箱DKN612C广州科朋科学仪器有限公司冰箱BCD-535W青岛海尔股份有限公司磁力恒温搅拌器HJ-6B常州维度仪器制造有限公司移液枪20-200μlDRAGONLAB纳米粒度ZETA电位分析仪DelsaNanocBECKMANCOULTER恒温振荡器IS-RSV3CRYSTAL2.2药品与试剂表3实验试剂名称批号厂家四氢姜黄素QHSW20221225西安秋禾生物科技有限公司吐温-80T104866阿拉丁司盘-80S110846阿拉丁PEG400P103737阿拉丁中链甘油三酯182831GATTEFOSSESAS大豆油S110245阿拉丁1，2-丙二醇20200701大茂DAMAO无水乙醇20220301致远化学试剂有限公司甘油20210402五邑炎威医疗科技有限公司IPM21100510STEARINERIEDUBOISRH4003765397V0DBASFHS1521126675L0DBASFCC497183805GATTEFOSSESASLabrafil178968GATTEFOSSESAS橄榄油O815211MACKLIN核桃光生物科技集团股份有限公司3实验方法3.1四氢姜黄素分析方法的建立3.1.1溶液的制备①纳米乳供试液精密吸取适量四氢姜黄素纳米乳液，置容量瓶中，加入少量无水乙醇，超声5min，充分破乳。用无水乙醇定容至一定浓度，制得供试品溶液。②空白纳米乳供试液精密吸取适量不加四氢姜黄素的空白纳米乳，按“纳米乳供试液”方法制备。③对照品储备液精密称取四氢姜黄素5mg置50mL的容量瓶中，无水乙醇定容，超声10min，充分溶解，制得0.1mg/mL的储备液。3.1.2专属性考察取对照品储备液适量，无水乙醇稀释制得对照品供试液，另取“3.1.1溶液的制备”项下制得的空白、四氢姜黄素纳米乳供试液，分别在200~800nm内使用紫外分光光度计进行全波长测定。3.1.3标准曲线的绘制精密吸取对照品储备液适量，以无水乙醇为溶剂，配制成浓度分别为3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00mg/mL的四氢姜黄素标准溶液，在320nm处测定各浓度标准溶液的吸光度，连续测定3次，取平均值。以浓度为x轴，吸光度为y轴，绘制标准曲线。3.1.4精密度精密吸取适量对照品储备液，以无水乙醇为溶剂，将储备液稀释至低、中、高三个浓度（4.0mg/mL、5.0mg/mL、6.0mg/mL）。设置紫外分光光度计的吸收波长为320nm，分别测定不同浓度对照品供试液的紫外吸收，连续测定5次，求精密度。3.1.5稳定性取同一份四氢姜黄素纳米乳供试液，用无水乙醇稀释至一定浓度，室温下放置12h，分别于0、1、2、4、6、8、12h，在320nm处测定不同时间点的吸光度值，计算RSD。3.1.6重复性取四氢姜黄素纳米乳6份，制备供试液，用无水乙醇稀释至一定浓度，设置吸收波长为320nm，分别测定6份供试液的吸光度，计算RSD。3.1.7回收率精密吸取等量空白纳米乳9份置于容量瓶中，分别加入适量的四氢姜黄素对照品溶液，用无水乙醇稀释至高、中、低三个浓度（6.0mg/mL、5.0mg/mL、4.0mg/mL），每个浓度三份，紫外分光光度法测定实际含药量，计算回收率。3.2纳米乳的处方筛选3.2.1油相的筛选取中链甘油三酯、大豆油、IPM、橄榄油、核桃油适量，分别置于离心管中，少量多次的加入四氢姜黄素原料药至稍过量，室温下超声2h，充分溶解，37℃恒温水浴24h后取出，冷却至室温。经3000r/min超速离心10min后取上清液，置于容量瓶中，适量无水乙醇稀释，设置吸收波长为320nm，测定各油相供试液的紫外吸收，比较四氢姜黄素在各油相中的溶解度大小，筛选出合适的油相。3.2.2表面活性剂的筛选取吐温80、RH40、HS15、CC497、Labrafil适量，置于离心管中，按“2.2.1油相的筛选”选择最适表面活性剂。将备选乳化剂（不同HLB值的吐温80/司盘80复配）与助乳化剂PEG400按Km4：1的比例混合，置于西林瓶中，常温下磁力搅拌1min，得混合表面活性剂（Smix），记录Smix的质量。按1：9-9：1（Oil：Smix）的比例精密称量油相MCT（Oil），加入装有Smix的西林瓶中，混合均匀，记录加入MCT的质量。在恒温水浴30℃、磁力搅拌转速700r/min的条件下，向西林瓶中逐滴加入蒸馏水至刚好形成纳米乳，记录此时滴加蒸馏水的质量。在滴加蒸馏水前，体系为流动性良好的淡黄色油状液体；在滴加的过程中，流动性随着水相百分含量增加而变差，呈透明黏稠膏状；继续滴加蒸馏水，流动性恢复良好，此时体系呈透明或半透明，以此来判断纳米乳的形成。以Oil、Smix、蒸馏水在恰好形成纳米乳时的百分含量作为x、y、z轴绘制伪三元相图，相图中阴影部分为纳米乳区，计算阴影部分的面积，面积越大，越有利于纳米乳的形成。3.2.3助表面活性剂的筛选以PEG400、乙醇、1，2－丙二醇、甘油为备选助乳化剂，HLB13的Tween80/Span80为乳化剂，MCT为油相，Km值为4：1。按“3.2.2”项下方法选择最佳助表面活性剂。3.2.4Km值的筛选油相为中链甘油三酯，乳化剂为HLB13的Tween80/Span80，助乳化剂为PEG400，选择1：1-9：1作为备选Km值。按“3.2.2”项下方法，比较各Km值的伪三元相图选择最佳Km值。3.3四氢姜黄素纳米乳质量评价3.3.1四氢姜黄素纳米乳的制备室温下，精密称量四氢姜黄素原料药置于西林瓶，加入处方量的中链甘油三酯（MCT）、吐温80、司盘80、PEG400，室温下磁力搅拌1h使药物充分溶解。在恒温30℃、磁力搅拌转速700r的条件下向西林瓶中逐滴加入处方量纯化水，搅拌10min，形成澄清的带有淡蓝色乳光的纳米乳，流动性良好，即制得四氢姜黄素纳米乳。3.3.2外观考察将制得四氢姜黄素纳米乳置于洁净实验台，通过肉眼观察的方式考察纳米乳的外观，主要考察是否出现破乳、絮凝、分层等不良现象。3.3.3结构类型鉴别取2mL四氢姜黄素纳米乳2份，置于10mL离心管中，分别向2支离心管加入等量的苏丹红和亚甲蓝粉末，同时观察现象。3.3.4粒径和电位的测定取1mL待测四氢姜黄素纳米乳于10mL离心管中，用适量蒸馏水稀释制备供试液，室温条件下使用粒径仪对供试液进行测定，取平均值。同法制备供试液，用电位分析仪测定四氢姜黄素纳米乳的Zeta电位，求得平均值。3.3.5pH值的测定使用pH计于室温下测定四氢姜黄素纳米乳的pH值，连续测定三次，取平均值。3.3.6稳定性试验离心法取2mL四氢姜黄素纳米乳置于离心管中，使用高速离心机，以6000r/min的转速离心20min，观察其外观变化。放置法将制备的纳米乳均分成两份，一份放入4℃的冰箱中，一份置于室温下，分别于0、5、10、20天肉眼观察纳米乳外观。稀释法吸取四氢姜黄素纳米乳1mL三份，分别置于5、10、50mL的容量瓶中，加入蒸馏水定容，分别稀释5、10、50倍，振摇，观察稀释后的纳米乳是否发生破乳现象。3.3.7稳定性常数KE的测定稳定性常数表示纳米乳在离心前和离心后吸光度值发生的变化，是评价纳米乳稳定性的指标之一。计算公式为KE=A取三份不同浓度的四氢姜黄素纳米乳，用无水乙醇稀释至适宜浓度，在320nm最大吸收波长处测定A0，将上述三份不同浓度纳米乳置于高速离心机中离心20min，转速3000r/min。取上清液，用相同溶剂稀释至相同浓度，测定A。用稳定性常数计算公式求得KE，KE值越小，纳米乳的稳定性越高。3.3.8含量测定取适量四氢姜黄素纳米乳，按“２.１.１”方法制备供试液，于320nm处测定吸光度，通过标准曲线计算四氢姜黄素含量。3.3.9包封率测定包封率的计算公式为EE=W总-W游W总×100%，其中W总为四氢姜黄素总量，W游为未被包封的THC量。精密量取4003.3.10体外释放实验本研究采用透析袋法测定四氢姜黄素纳米乳的体外释放度，将装有待测纳米乳的透析袋置于满足漏槽条件的释放介质中，通过恒温振荡模拟体内环境，由于透析袋内外存在浓度差，药物将自发向释放介质扩散，通过测定不同时间点释放介质中的药物浓度，可求得累积释药百分率。取四氢姜黄素纳米乳适量，无水乙醇稀释至一定浓度，按“2.3.7含量测定”方法测得其实际含量，用于计算累计释放百分率。精密吸取3mL同一份纳米乳，置于活化透析袋中，用扎带将透析袋两端密封，将透析袋放入装有150mL30%乙醇-PBS（pH5.8）的烧杯中，将烧杯置于温度37℃，转速100r/min的恒温摇床。于0.5、1、…、24h时在烧杯中取出5mL的释放介质，立即补充5mL等温介质。通过紫外分光光度法测量各个时间点样品中包含THC的量，绘制累积释放曲线，并使用origin软件对曲线进行数学模型拟合。4结果与分析4.1四氢姜黄素分析方法建立4.1.1专属性考察如图2所示，由三组紫外吸收曲线图可知对照品（a）与供试品（b）在320nm波长处均有最大吸收，空白组（c）在320nm处无吸收，可知在此波长处空白纳米乳对测定不产生干扰，故选择最大吸收波长320nm进行含量测定，实验结果表明专属性符合要求。（a）对照品（b）供试品（c）空白纳米乳图2紫外吸收曲线图4.1.2标准曲线的绘制测得不同浓度标准溶液吸光度平均值如表4所示，标准曲线如图3所示，回归方程y=0.0886x-0.0206，R2为0.9991。表4线性实验结果（n=6）浓度C（μg/mL）吸光度A3.1920.2574.2560.3625.3200.4476.3840.5527.4480.6408.5120.729图3标准曲线图4.1.3精密度如表5所示，连续测定5次不同浓度对照品供试液的吸光度值，精密度RSD平均值为0.20%。结果表明该方法符合要求。表5精密度（n=5）浓度吸光度ARSD4.0μg/mL0.3250.3240.3250.3250.3230.28%5.0μg/mL0.3980.3990.3980.3990.3990.14%6.0μg/mL0.4800.4800.4790.4810.4810.17%4.1.4稳定性如表6所示，实验测得RSD为0.23%，符合稳定性试验规定（RSD＜2%），实验结果表明四氢姜黄素纳米乳供试液在室温放置12h内吸光度无明显变化，稳定性良好，该方法可用于含量测定。表6稳定性（n=7）时间（h）01246812吸光度0.6150.6150.6170.6180.6140.6160.617RSD0.23%4.1.5重复性实验结果表7所示，RSD为0.42%，符合要求。表7重复性（n=6）组别123456吸光度0.5630.5620.5660.5670.5640.568RSD0.42%4.1.6回收率由表8可知平均回收率为100.43%，可用于四氢姜黄素的含量测定。表8回收率（n=9）组别对照品浓度（μg/mL）吸光度实测值（μg/mL）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）低浓度3.930.3263.9199.49100.430.633.930.3273.9299.743.930.3293.94100.25中浓度4.920.4194.96100.814.920.4235.00101.624.920.4194.96100.81高浓度5.900.5055.93100.515.900.5055.93100.515.900.5035.91100.174.2纳米乳的处方筛选4.2.1油相的筛选实验测得四氢姜黄素在各油相中溶解度如图4所示，溶解度大小为MCT＞核桃油＞橄榄油＞IPM＞大豆油。采用溶解度较大的油相形成的纳米乳体系载药量更高，载药后成乳较稳定，故本研究选择MCT为油相。图4各油相溶解度对比图4.2.2表面活性剂的筛选实验测得四氢姜黄素在各表面活性剂中溶解度如图5所示，溶解度大小为吐温80＞HS15＞RH40＞CC497＞Labrafil，故初步选择吐温80作为表面活性剂。图5各表面活性剂溶解度对比图实验结果表明，当吐温80与司盘80复配的HLB值为11、12时，Oil：Smix在1：9-9：1比例内均呈乳白色，不形成纳米乳；当HLB值为13、14、15时，Oil：Smix在1：9-3：7比例内可形成纳米乳。使用Origin软件绘制伪三元相图，比较乳化面积大小，结果如图6所示：吐温80+司盘80（HLB13）＞吐温80（HLB15）＞吐温80+司盘80（HLB14）。乳区面积越大，越利于形成纳米乳，故选择HLB13的吐温80/司盘80作为乳化剂。（a）吐温80+司盘80（HLB13）（b）吐温80（HLB15）（c）吐温80+司盘80（HLB14）图6不同表面活性剂的伪三元相图4.2.3助表面活性剂的筛选实验结果表明，当不使用助表面活性剂时，Oil：Smix在1：9-9：1范围内形成胶状物质，无法成乳，故纳米乳的形成需要助乳化剂辅助；当使用乙醇、1，2-丙二醇为助表面活性剂时，Oil：Smix在1：9-9：1范围内均呈浑浊的白色乳状液，不形成纳米乳，故不宜选用。使用甘油和PEG400作为助乳化剂时可形成纳米乳，绘制伪三元相图结果如图7所示：PEG400＞甘油。故选择PEG400作为助表面活性剂。（a）PEG400（b）甘油图7不同助表面活性剂伪三元相图4.2.4Km值的筛选实验结果表明，当Km为3：1时，Oil：Smix在1：9-2：8范围内可成纳米乳，外观澄清透明。当Km为4：1、5：1、6：1时，Oil：Smix在1：9-3：7范围内形成纳米乳。伪三元相图绘制如图8所示：4：1＞5：1＞6：1＞3：1，故选择Km=4：1。（a）Km3：1（b）Km4：1（c）Km5：1（d）Km6：1图8不同Km值伪三元相图4.3四氢姜黄素纳米乳质量评价4.3.1外观考察所制纳米乳外观澄清透明，带淡蓝色乳光，流动性良好，无分层、破乳等不良现象。图9外观考察4.3.2结构类型鉴定由图10可知，亚甲蓝迅速溶解，扩散速度较快，故本研究制备的四氢姜黄素纳米乳为水包油型。图10染色法4.3.3粒径和电位的测定合格纳米乳的粒径应小于100nm，PDI应小于0.300；电位表示纳米乳表面所带电荷量，适量的电荷可防止微粒发生聚集，从而提高体系稳定性。实验测得四氢姜黄素纳米乳的平均粒径为71.8nm，PDI为0.206，电位值为-4.3mV，所制纳米乳符合相关规定。图11粒径分布图图12电位分布图4.3.4pH值测定室温下测得四氢姜黄素纳米乳的pH值为5.39，人体正常皮肤pH值一般在5-7，纳米乳经皮给药需接触皮肤，若pH值过大或过小可能改变皮肤正常酸碱度，造成不适感甚至损害皮肤，本研究制得纳米乳pH值与人体皮肤相近，可用于皮肤给药。4.3.5稳定性实验离心法四氢姜黄素纳米乳经高速离心后外观仍澄清透明，带淡蓝色乳光，无分层、破乳、析药等不良现象，证明其离心稳定性良好。放置法四氢姜黄素纳米乳在室温及4℃条件下放置20天，外观无明显变化，实验表明此纳米乳储存稳定性良好。稀释法结果四氢姜黄素纳米乳稀释后仍可观察到淡蓝色，表明不发生破乳，稳定性良好。4.3.6稳定性常数KE的测定纳米乳离心前后吸光度值如表9所示，实验结果表明该纳米乳稳定性常数KE值较低（KE＜5%），离心前后吸光度值变化较小，体系中的纳米乳滴在离心力的作用下不出现显著的上浮或下沉行为，稳定性良好。表9稳定性常数KE值测定组别A0AKE平均值10.5850.5761.54%1.97%20.4720.4622.12%30.5350.5232.24%4.3.7含量测定四氢姜黄素纳米乳用无水乙醇稀释1000倍制成供试液，在320nm处吸光度平均值为0.535，带入标准曲线求得供试液浓度为6.28mg/mL，计算可知四氢姜黄素纳米乳中药物含量为6.28mg/mL。4.3.8包封率测定包封率是评价纳米乳载药能力的一个重要指标，一个良好的递药系统需要较高的包封率。实验测得本纳米乳包封率为96.78%，证明纳米乳中大部分药物被包裹，此纳米乳具有较优的载药能力。4.3.9体外释放实验体外释放实验结果如表10、图13所示，在0-3h内，释药速率较快，前3小时内累积释放48.20%；在3-10h内，药物释放速率减慢，在10h时累积释放药物79.10%；10-24h内，药物释放趋于平稳，在24h末累积释放百分率为83.18%。对体外释放实验结果进行数学模型拟合，可进一步分析和预测递药体系的动力学行为，有利于掌握药物释放规律。本研究对累积释放曲线进行了拟合，结果如表11、图14所示。R2为相关系数，用于表示数学模型与释放曲线的相关性，R2值越接近1则相关程度越大。由表11可知，零级动力学方程R2=0.5982、Higuchi方程R2=0.8222，拟合程度较差，不可用于解释本纳米乳的体外释放行为；一级动力学方程R2=0.9971，表明其与THC纳米乳的体外释放规律相符合。表10体外释放结果时间t（h）累计释药量（mg）累计释放百分比Q（%）0.52.6313.2614.0120.9126.5733.0839.5748.20411.2656.68512.3562.20613.4767.84814.4872.931015.7079.101216.0180.632416.5183.18表11累积释放曲线数学模型拟合模型回归方程R2零级动力学Q=2.80t+0.370.5982一级动力学Q=83.35（1-e-0.28t）0.9971HiguchiQ=18.39t1/2+0.130.8222图13累积释放曲线图14一级动力学模型拟合

5结论本研究得出的主要结论如下：①本实验测得四氢姜黄素在各油相溶解度为MCT（3.33mg/mL）＞核桃油（1.62mg/mL）＞橄榄油（1.60mg/mL）＞IPM（1.28mg/mL）＞大豆油（0.72mg/mL）。THC在不同表面活性剂中溶解度为吐温80（80.65mg/mL）＞HS15（40.00mg/mL）＞RH40（25.49mg/mL）＞CC497（9.86mg/mL）＞Labrafil（6.42mg/mL），筛选得出的处方为中链甘油三酯（MCT）8.3%，吐温8016.1%，司盘803.8%，PEG4005.0%，纯化水66.6%。②本研究建立了紫外分光光度法对四氢姜黄素纳米乳进行含量测定，实验结果显示THC在320nm波长处吸光度最大，且该波长下的吸光度值不受到空白纳米乳的干扰，标准曲线为y=0.0886x-0.0206（R2=0.9991），浓度范围3.192~8.512mg/mL，实验结果表明所建立方法符合要求，可用于含量测定。③本研究制得纳米乳为水包油型，带有淡蓝色乳光，透明且澄清，具有较好的流动性。其平均粒径为71.8nm（＜100nm），PDI为0.206（＜0.3），电位为-4.3mV。应用pH计测得其pH值为5.39，与人体正常皮肤pH值接近。无分层、破乳、絮凝等现象，稳定性常数KE平均值为1.97%（＜5%），证明其稳定性良好。测得所制纳米乳中药物含量为6.28mg/mL，离心超滤法测得包封率为96.78%。透析袋法体外释放24小时的累积释放百分率为83.18%，累计释放曲线与一级动力学方程拟合程度较高（R2=0.9971）。本研究提供一种制备四氢姜黄素纳米乳的处方，采用转相法制备了质量评价结果优良的载药纳米乳，但由于时间限制，本研究有待后续完善：应考察高温、强光、长期放置等不同条件对纳米乳的稳定性影响；应考察纳米乳制备过程中温度、转速、离子强度等条件对所制纳米乳外观与粒径的影响，进一步优化处方；应对四氢姜黄素的最佳载药量进行系统的考察；本纳米乳期望用于经皮递药，但本研究仅进行体外释放实验，应进一步开展体外透皮实验，考察所制THC纳米乳的经皮渗透行为；应进行皮肤刺激性考察等实验对其安全性进行考察；本研究未进行纳米乳的黏度、电导率、形态考察，应在后续工作中补充。参考文献李芳华,王菁,高淑婷,等.植物成分在护肤型化妆品中的功效研究进展[J].应用化工,2020,49(03):735-740.翟丹,吴娟,刘强.纳米技术在植物化妆品中的应用[J].中国化妆品,2022,No.440(07):90-93.罗绍强,唐青涛,吴志韻.纳米透皮技术在化妆品中的应用[J].日用化学品科学,2011,34(09):22-26.杜淑霞,单旺,徐丽,等.合成四氢姜黄素结构表征及体外抗氧化性[J].食品与机械,2021,37(09):168-172+210.刘俐,曾安琪,张敏,等.四氢姜黄素抗氧化、抑制黑色素生成及其作用机制[J].中国药理学通报,2022,38(05):698-704.TrivediMahendraKumar,GangwarMayank,MondalSambhuCharan,etal.Protectiveeffectsoftetrahydrocurcumin(THC)onfibroblastandmelanomacelllinesinvitro:it'simplicationforwoundhealing[J].Journaloffoodscienceandtechnology,2017,54(5):1137-1145.熊倩薇,唐雪,李悦,等.四氢姜黄素对光老化小鼠皮肤的修复作用[J].中药药理与临床,2021,37(01):97-101.KimJungEun,KimHyeRan,KimJinCheol,etal.TetrahydrocurcuminAmelioratesSkinInflammationbyModulatingAutophagyinHigh-FatDiet-InducedObeseMice[J].BioMedResearchInternational,2021:6621027.张强,曹世杰,康宁.四氢姜黄素增强姜黄素抗乳腺癌作用机制初探[J].中国药理学与毒理学杂志,2019,33(09):730.赖思思,何志昌,潘明.四氢姜黄素的癌症化学预防和治疗潜力.生物分子.2020,10(6):831.ZhangLi,LiChanghu,WangSicheng,etal.Tetrahydrocurcumin-RelatedVascularProtection:AnOverviewoftheFindingsfromAnimalDiseaseModels[J].Molecules,2022,27(16):5100.KaifengLi,MengenZhai,LiqingJiang,etal.TetrahydrocurcuminAmelioratesDiabeticCardiomyopathybyAttenuatingHighGlucose-InducedOxidativeStressandFibrosisviaActivatingtheSIRT1Pathway[J].OxidativeMedicineandCellularLongevity,2019:6746907.ParkSunmin,LeeLaRa,SeoJiHyun,etal.Curcuminandtetrahydrocu