考点30 微生物的利用-2022年高考生物一轮复习考点（浙江专用）

考点30微生物的利用

【重要考向】

一、培养基及其制备方法分析

二、无菌技术的操作

三、大肠杆菌的纯化方法及过程分析

四、选择培养基成分及配制方法的分析

五、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

培养基及其制备方法分析

培养基

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对

出、氧气以及特殊营养物质的耍求。

（3）种类：按照物理性质可分为液隹培养基和固体培养基。

培养基的配制原则

（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。

（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。

（3）pH要适宜：细菌为6.5〜7.5,放线菌为7.5〜8.5,真菌为5.0〜6.0,培养不同微生

物所需pH不同。

微生物对主要营养物质的需求特点

不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。

（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2,氮源可由

含氮无机盐提供。

（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源

也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

【典例】

1.下列有关大肠杆菌的培养与分离实验的操作，合理的是（

A.用无菌水配制LB培养基

B.培养基的pH值应调至中性偏碱

C.应加入饲养层细胞以支持生长

D.通常在培养基中加入抗生素来消灭杂菌

【答案】B

【分析】

培养大肠杆菌常用LB培养基，培养基的成分为蛋白陈、酵母膏、NaCI,加蒸储水溶解，调

节pH值至中性偏碱.

【详解】

A、配制LB培养基应用蒸储水，A错误；

B、因为大肠杆菌适宜在中性偏碱的环境中生存，故培养大肠杆菌的培养基，pH值应调至中

性偏碱，B正确；

C、大肠杆菌可直接利用培养基中的营养物质生长，不需要饲养层细胞，C错误：

D、在培养基中加入抗生素会杀死细菌，大肠杆菌也会被杀死，D错误。

故选B„

2.培养基是指供给微生物、植物或动物细胞（或组织）生长繁殖的，由不同物质组合配制

而成的营养基质。针对下表中的三组培养基，下列叙述错误的是（）

组别培养基成分

a蛋白陈、酵母提取物、甘露醇、水

b葡萄糖、尿素、NaCI、K2Hpe>4、酚红、琼脂糖

c矿质元素、蔗糖、维生素、甘氨酸、水、琼脂

A.a组培养基可用于醋化醋杆菌的扩大培养，该培养过程需用到磁力搅拌器和摇床

B.b组培养基可用于分离含胭酶的微生物，该实验中需用全营养LB固体培养基作对照

C.c组培养基可用于诱导植物愈伤组织再分化，添加的植物生长调节剂需事先过滤灭菌

D.上述培养基不仅要为相应的细胞提供营养物质还要为其生存和繁殖提供适宜的环境

【答案】C

【分析】

L培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。

2.常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

3.常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

4.筛选目的微生物时应该使用只有目的微生物能够生存，而其他微生物不能生存的选择培养

基。选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要

的种类在这种培养基上是不能生存的。

5.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌的实验流程：土壤取样3样品的稀释少将稀释液涂布到

以尿素为唯一氮源的培养基上好挑选能生长的菌落1鉴定。

6.分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的麻酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强.在以尿

素为唯一氮源的培养基中加入酚红。

【详解】

A、a组培养基可用于醋化醋杆菌的扩大培养，磁力搅拌器和摇床都是扩大菌落与其所需要

的营养物质的接触面积，利于菌落的培养，A正确；

B、b组培养基以尿素作为唯一氮源，含版酶的微生物在该培养基上能生长，其它微生物在

该培养基上因缺乏氮源而不能生长，可用于分离含胭醐的微生物，该实验中需用全营养LB

固体培养基作对照，通过对照可以判断选择培养基的选择作用，B正确；

C、c组培养基可以用来诱导植物愈伤组织再分化，添加的植物生长调节剂不能过滤灭菌，

易被分解，C错误；

D、上述培养基不仅要为相应的细胞提供营养物质，还要为其生存和繁殖提供适宜的环境，

D正确。

故选C.

3.下列有关分解尿素的细菌，说法正确的是（）

A.尿素固体培养基的平板中只有少量肉眼可见的菌体

B.筛选分解尿素的细菌时，培养基中唯一的营养物质是尿素

C.加有酚红的尿素培养基，兼有选择与鉴别目标菌种的功能

D.胭酶需要经过内质网和高尔基体的加工后才具有生物学活性

【答案】C

【分析】

培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源等。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚

红指示剂，培养某种细菌后，若PH升高，指示剂将变红；胭酶能够将尿素分解成氨和C02。

【详解】

A、尿素固体培养基的平板中会形成一些肉眼可见的菌落，A错误；

B、筛选分解尿素的细菌时，尿素是唯一氮源，但不是培养基中唯一的营养物质，B错误；

C、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高指示

剂将变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素，所以加有酚红的尿素培养基，兼有选择与

鉴别目标菌种的功能，C正确；

D、胭能是细菌合成分泌的，不需要经过内质网和高尔基体的加工就具有生物学活性，D错

误。

故选C。

4.下列关于多种培养基的叙述，错误的是（）

A.用于"菊花组织培养”的发芽培养基与生根培养基浓度有差异

B.尿素固体培养基是将尿素涂布到固体平面培养基上制成的

C.醋化醋杆菌扩大培养液中甘露醇的主要作用是提供碳源

D.LB培养基中的蛋白陈和牛肉膏既作碳源，又作氮源

【答案】B

【分析】

1.植物组织培养程序植物组织培养的一般程序是：

⑴配制含有适当营养物质和植物生长调节剂的含0.7%~1%琼脂的培养基，倒在灭菌试管中

凝固成半固体；

（2）从消毒的根、茎或叶上切取一些小组织块；

⑶将组织块放在固体培养基上进行培养，获得愈伤组织；

⑷以适当配比的营养物质和生长调节剂诱导愈伤组织，直到再生出新植株。

通过调节营养物质和生长调节剂的适当配比，可以从这种愈伤组织诱导出芽和根的顶端分生

组织，并可由此再生出新的植株。

2.在100mL三角瓶中配制好25ml尿素固体培养基（0.025g葡萄糖,0.12g,NaCI,0.12gK2Hpe）4,

0.25mg酚红和0.5g琼脂糖，水15mL）加上封口膜后灭菌，待冷却至60®时，加入通过G6

玻璃漏斗过滤（使之无菌）的10mL尿素溶液摇动、混合均匀后待用。

【详解】

A、由分析可知，用于“菊花组织培养”的发芽培养基与生根培养基浓度有差异，A正确；

B、由分析可知，配制尿素固体培养基时，在对培养基灭菌后将经过灭菌的尿素溶液倒入其

中，经过混合均匀后，再进行倒平板操作，B错误；

C、醋化醋杆菌扩大培养液中甘露醇的主要作用是提供碳源，而且也可以调节培养基的渗透

压，C正确；

D、由于蛋白陈和牛肉膏既含有碳元素，也含有氮元素，故LB培养基中的蛋白陈和牛肉膏

既作碳源，又作氮源，D正确。

故选Bo

5.培养微生物必须进行无菌操作。下列叙述正确的是（）

A.分离葡萄表面的微生物时，可用无菌水浸泡葡萄后涂布分离

B.玻璃刮刀从70%酒精取出，待酒精挥发后进行涂布操作

C.琼脂糖加热会被破坏，可用G6玻璃砂漏斗过滤除菌

D.G6玻璃砂漏斗使用前需用盐酸浸泡法进行灭菌

【答案】A

【分析】

微生物培养时的无菌操作中灭菌方法的选择：1、高压蒸汽灭菌：通常用于培养基和许多器

具的灭菌。如果培养基中含葡萄糖，为避免其碳化，应当采用500g/cm2压力（90团以上）高

压蒸汽灭菌30min。若培养基中有不能加热的物质，如尿素等，则该培养基其他成分正常高

压蒸汽灭菌，而尿素等过滤除菌后加入。2、干热灭菌：用于玻璃器皿的灭菌。3、灼烧灭菌：

用于剪刀、镶子、解剖刀、接种环等的灭菌。4、过滤除菌：常用玻璃砂芯抽滤除菌，用于

不能加热的成分的灭菌。

【详解】

A、分离葡萄表面的微生物时，可用无菌水浸泡葡萄后收集微生物并采用涂布分离法获取单

-菌体，A正确；

B、将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭后使用，B错误；

C、尿素加热会分解所以只能用G6玻璃砂漏斗过滤除菌，而琼脂糖常用高压蒸汽灭菌，C错

误：

D、G6玻璃砂漏斗使用前需用高压蒸汽灭菌法灭菌，使用后需用lmol/L的HCI浸泡，并抽滤

去酸，再用蒸储水洗至洗出液呈中性，D错误。

故选A。

无菌技术的操作

无菌技术

（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）关键：防止外来杂眉员的入侵。

（3）不同对象的无菌操子E方法（连线）

方法类型1对象

a冽烧灭菌\/I.接种针（环）

汗热灭菌⑦消

d

>5</\X/n.培养皿

d）巴氏消毒，灭菌冬

3）紫外线///\\in.操作者的

uizw力•%//\衣着和手

G）化学药物//\

（§）高压蒸汽灭菌w.水源地

消毒和灭菌的辨析

项目条件结果常用方法应用范围

煮沸消毒法日常用品

较为温和的仅杀死物体表面或

巴氏消毒法不耐高温的液体

消毒物理或化学内部的部分对人体

化学药剂消用酒精擦拭双手，用

方法有害的微生物

毒法氯气消毒水源

灼烧灭菌法接种工具

杀死物体内外所有

强烈的理化干热灭菌法玻璃器皿、金属工具

灭菌的微生物，包括芽

因素高压蒸汽灭

狗和抱子培养基及容器的灭菌

菌法

【典例】

6.下列关于无菌操作的叙述，正确的是（）

A.外植体用次氯酸钠消毒后接种到培养基中

B.动物细胞培养和植物组织培养都需无菌操作

C.在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风

D.在制作果酒和果醋时必须进行无菌操作

【答案】B

【分析】

实验室常用的灭菌方法：

（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯

火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易

被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。

（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属

用具等，可以采用这种方法灭菌。

（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭

菌效果，一般在压力为lOOkPa,温度为121团的条件下，维持15〜30min。

【详解】

A、外植体用次氯酸钠消毒后需要再用无菌水冲洗3~5次才能接种到培养基中，A错误；

B、动物细胞培养和植物组织培养都需要无菌操作，防止杂菌污染，B正确；

C、在超净台操作时需关闭紫外灯，避免对外植体造成影响，同时也避免对操作者造成伤害，

且需要打开过滤风，C错误；

D、在制作果酒和果醋时为了防止菌种受到伤害，不需要进行无菌操作，D错误。

故选B。

7.为了调查湖水中细菌的污染情况，某小组同学进行了相关实验，其中包括制备培养基、

灭菌、接种、培养及菌落观察计数。下列叙述错误的是（）

A.LB培养基中的蛋白陈可为细菌提供碳源和氮源

B.配制好的培养基，分装到锥形瓶，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌

C.培养接种无菌水的平板作为对照，可检验培养基的灭菌是否合格

D.若实验组平板上出现形态和颜色不同的菌落，说明湖水遭受严重污染

【答案】D

【分析】

1、微生物的培养基一般都要含有水、碳源、氮源、无机盐，如蛋白豚在培养基中主要作为

氮源，淀粉在培养基中主要作为碳源。

2、实验室的灭菌方法一般有灼烧灭菌（适合于接种工具的灭菌）、干热灭菌（适合于耐高温

的、需要保持干燥的物品的灭菌）、高压蒸汽灭菌（适合于培养基等物体的灭菌）。

【详解】

A、LB培养基是细菌培养基，其中的蛋白陈可为细菌提供碳源、氮源和维生素，A正确；

B、配制好的培养基，分装到锥形瓶，加上棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，放入高压蒸汽

灭菌锅灭菌，B正确：

C、要使该实验所得结果可靠，需要在平板上接种无菌水作为对照进行实验，可检验培养基

的灭菌是否合格，若有菌落产生，则说明灭菌不合格，C正确；

D、若实验组平板上出现形态和颜色不同的菌落，说明湖水中存在不同种类的微生物，但不

能判断是否遭受严重污染，D错误。

故选D。

8.下列关于无菌操作的叙述，正确的是（）

A.制备培养基时，灭菌后需调节pH

B.加入培养基中的指示剂不需要灭菌

C.在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风

D.对动物培养基中的血清进行过滤除菌

【答案】D

【分析】

1,常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

2、具体操作:

（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。

（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

【详解】

A、制备培养基时，先调节pH再灭菌，A错误；

B、指示剂可能混有微生物，故加入培养基前需要灭菌，B错误；

C、在超净台操作前需要打开紫外灯，但在超净台操作时不能打开紫外灯，C错误；

D、避免灭菌的强烈的理化手段破坏培养液中血清等物质的活性，所以对动物培养基中的血

清进行过滤除菌，D正确。

故选D»

9.下列关于实验材料及用法的叙述，正确的是（）

A.提取菠菜叶光合色素时，需加入少许二氧化硅、碳酸钙和50%乙醇

B.观察花生子叶细胞的脂肪颗粒时，需用50%乙醇洗去多余的苏丹包染液

C.涂布法分离细菌时，要将保存在50%乙醇中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧

D.植物组培中，外植体可先后放入90%乙醇、5%次氯酸钠和无菌水中消毒

【答案】B

【分析】

1、绿叶中的色素溶于有机溶剂而不溶于水；

2、玻璃刮刀要放在盛有70%乙醇中；

3、镜检花生子叶细胞的脂肪颗粒时，需用50%乙醉，洗去多余的染料。

【详解】

A、提取菠菜叶光合色素时，需加入少许二氧化硅、碳酸钙和95%乙醇，而不是50%的乙醇，

A错误；

B、观察花生子叶细胞的脂肪颗粒时，需用50%乙醉洗去多余的苏丹回染液，苏丹回染液能使

细胞中的油脂呈橙黄色，B正确；

C、涂布法分离细菌时，要将保存在70%乙醇中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，而不是

50%乙醇，C错误；

D、植物组培中，外植体可先后放入体积分数为70%乙醵、体积分数为20%次氯酸钠和无菌

水中消毒，D错误。

故选Bo

10.溶血性尿毒症综合征（HUS）是一类急性血管内溶血（即红细胞破裂）性贫血伴肾功能

衰竭的综合征，表现为微血管病性溶血性贫血、血小板减少和急性肾衰竭三联征，引起该病

的病因尚不明确，细菌中的大肠杆菌、痢疾杆菌的感染、系统性红斑狼疮都可引起该病的发

生。下列关于此病的说法错误的是（）

A.HUS患儿血浆中会含有血红蛋白

B.大肠杆菌可能会引发HUS,该病原体在实验室培养时需用到活的动物细胞

C.HUS的特征之一为急性肾衰竭，可能会导致患者细胞外液渗透压改变

D.HUS患者发生肾衰竭后，内环境稳态会被破坏，患者的正常生存会受到影响

【答案】B

【分析】

HUS患者体内血浆中因红细胞破裂会出现血红蛋白；急性肾衰竭使肾小球滤过率下降，引起

氮质废物体内储留，水、电解质和酸碱平衡紊乱，患者内环境被破坏。

【详解】

A、HUS患者会出现血管内溶血，表现为红细胞破裂，红细胞破裂后内含的血红蛋白会进入

血浆中，A正确；

B、使人患出血性肠炎的大肠杆菌具有细胞结构，能独立生存，培养时无需用活的动物细胞，

B错误；

C、HUS的特征之一为急性肾衰竭，急性肾衰竭可能会引发少尿或无尿，内环境中多余的水

分和无机盐无法通过尿液正常排出到体外，细胞外液渗透压会发生改变，C正确；

D、内环境的稳态是机体进行正常生命活动的必要条件，需要多系统的共同调节，若发生肾

哀竭，机体水盐平衡调节功能会被破坏，进而造成内环境稳态被破坏，D正确。

故选Bo

大肠杆菌的纯化方法及过程分析

大肠杆菌的纯化培养

（1）制备牛肉膏蛋白陈固体培养基

①操作步骤

[gg-^[W]->1倒平板I

②倒平板的方法及注意事项

a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙T乙T甲T丁。

b.甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

C.丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

（2）纯化大肠杆菌的方法

①纯化培养原理:想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落,

即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。

③常用的微生物接种方法有两种

a.平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集

的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b.稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌

液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作（如图所示）：

涂布平板操作（如图所示）:

4^2"^/

取少量菌液（不yn

超过0.1mL）,滴爪―"

加到培养基表面⑷&用涂布器将菌

将涂布器浸液均匀地涂布

在盛有酒精将沾有少最酒精在培养基表面

的烧杯中的涂布器在火焰涂布时可转动

上引燃,待酒精燃培养皿,使菌

尽后,冷却8~10s液涂布均匀

（3）菌种的保存方法

①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用苴螳邀的方法。

两种纯化细菌方法的比较

项目优点缺点适用范围

可以观察菌落特征，

平板划线法不能计数适用于好氧菌

对混合菌进行分离

吸收量较少，较

可以计数，可以观察麻烦，平板不干适用于厌氧菌和兼性

稀释涂布平板法

菌落特征燥效果不好，容厌氧菌

易蔓延

【典例】

11.研究人员将1个含14N-DNA的大肠杆菌转移到以15NH4a为唯一氮源的培养液中，培

养24h后提取子代大肠杆菌的DNA。将DNA解开双螺旋，变成单链；然后进行密度梯度离

心，试管中出现两种条带（如图）。下列说法错误的是（）

密度低

条带1-条带l=j

条带2・

密度高1

01/87/8

DNA单琏的含量

A.由结果可推知DNA在24h内连续分裂3次

B.解开DNA双螺旋的实质是破坏核甘酸之间的氢键

C.根据条带的数目和位置可以确定DNA的复制方式为全保留复制

D.若直接将子代DNA进行密度梯度离心能得到中带和重带

【答案】C

【分析】

DNA的复制是半保留复制，即以亲代DNA分子的每条链为模板，合成相应的子链，子链与

对应的母链形成新的DNA分子，这样一个DNA分子经复制形成两个子代DNA分子，且每个

子代DNA分子都含有一条母链。根据题意和图示分析可知：将DNA被"N标记的大肠杆菌

移到15|\|培养基中培养，因合成DNA的原料中含15N,所以新合成的DNA链均含15火根据

半保留复制的特点，第一代的2个DNA分子都应一条链含15N,一条链含“N。

【详解】

A、由于i&N单链：15N单链=1：7,说明DNA复制了3次，可推知该细菌的细胞周期大约为

24+3=8h,A正确；

B、DNA复制的第一步是在解旋前的作用下使两条双链打开，连接两条链的化学键是氢键,

所以解开DNA双螺旋的实质是破坏核甘酸之间的氢键，B正确；

C、由于DNA经过热变性后解开了双螺旋，变成单链，所以根据条带的数目和位置只能判断

DNA单链的标记情况，但无法判断DNA的复制方式，C错误；

D、经过分析可知，DNA复制3次，有2个DNA链是皈和"N,在中带；有6个DNA链都

是15N的，在重带，D正确。

故选C。

12.下列关于大肠杆菌的纯化实验的有关叙述中，正确的是（）

A.使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不再灭菌

B.打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞

C.将沾有菌种的接种环通过酒精灯火焰后迅速仰入平板内，划线即可

D.最后将平板倒置，放在培养箱中培养

【答案】D

【分析】

平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分

散到培养基表面，其操作步骤是：①将接种环在酒精灯火焰上灼烧宜至烧红；②在酒精灯

火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞：③将菌种试管口通过火焰达到消

灭试管口杂菌的目的；④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种；⑤将菌种试管口再

次通过火焰后塞上棉塞；⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环仰入平板内划3〜5条平行线,

盖上皿盖，不要划破培养基；⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内

划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线，注意不要将第五区的划线与第一区划线

相连；⑧将平板倒置放在培养箱中培养。

【详解】

A、平板划线过程中，接种环在每次划线之前和之后均需要灼烧灭菌，A错误；

B、打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后还需通过火焰灭菌，再塞上棉塞，B错

误；

C、将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，连续划三至五条平行线，然后盖上培养皿盖，注

意不要划破培养基，C错误；

D、划线操作结束后，将平板倒置，放入恒温培养箱中培养，D正确。

故选D。

13.下列关于微生物培养基的叙述正确的是（）

A.在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入伊红-美蓝染液可以鉴别纤维素分解菌

B.酚红指示剂可以用来鉴别大肠杆菌

C.在无氮培养基中可以筛选自养微生物

D.在以尿素为唯一氮源的培养基中可以分离出分解尿素的细菌

【答案】D

【分析】

1、分离微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。

2、配制培养基时可根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或除去某些

营养物质抑制其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在

培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物，这种培养基叫做选择培养基。

【详解】

A、刚果红染液可以与纤维素反应呈红色，纤维素分解菌能够将纤维素分解而出现无色的透

明圈，说明该细菌能分解纤维素，A错误；

B、伊红美蓝指示剂能够专一鉴别大肠杆菌菌落，其菌落呈蓝紫色或黑色且具有金属光泽，

B错误：

C、无氮培养基可筛选出能自身固氮的微生物，如圆褐固氮菌，C错误；

D、将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养，分

解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而不能利用尿素的微生物则不能生长繁殖，故在

以尿素为唯一氮源的培养基中可以分离出分解尿素的细菌，D正确。

故选D。

14.椰毒假单胞菌是一种耐温性极强的细菌，对人体的肝、肾等器官会造成较大危害，下列

相关叙述正确的是（）

A.可通过在液体培养基中培养获得椰毒假单胞菌的单菌落

B.利用豆芽汁配制的天然培养基是培养椰毒假单胞菌最适宜的培养基

C.培养椰毒假单胞菌时可将接种好的培养皿倒置于4团冰箱中

D.利用涂布分离法测定椰毒假单胞菌的密度较实际值低

【答案】D

【分析】

涂布分离法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单

个菌落。

【详解】

A、在液体培养基中培养无法获得椰毒假单胞菌的单菌落，A错误；

B、利用豆芽汁配制的天然培养基是培养霉菌最理想的培养基，椰毒假单胞菌属于细菌，B

错误；

C、培养椰毒假单胞菌时可将接种好的培养皿倒置于恒温培养箱中,4回冰箱常用于菌种保存，

C错误；

D、当两个或两个以上的细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，故利用涂布分离法测

定椰毒假单胞菌的密度时，所得数据较实际值低，D正确。

故选D»

15.培养不同类型的细胞需要不同的培养基，下列叙述错误的是（)

A.细菌培养基通常加入氯化钠以维持一定的渗透压

B.MS培养基可以先配置成高浓度的母液，用时再稀释

C.动物细胞培养基中通常加入血清、激素等以提高细胞克隆形成率

D.各种培养基在使用前都需要经过高压蒸汽灭菌处理

【答案】D

【分析】

1、微生物培养基的营养构成:①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮

源和无机盐；②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

2、动物细胞培养的条件：（1）无菌无毒的环境，可以进行灭菌处理和加入一定量的抗生素，

定期更换培养液，避免代谢产物的积累乂2）营养条件:添加糖、氨基酸、促生长因子、无机

盐和微量元素等，除外一般还需要添加血清、血浆等；（3）温度和pH值；（4）气体环境:95%的

空气和5%的二氧化碳。

【详解】

A、细菌培养的培养基中要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压，A正确；

B、在配制MS培养基时，常先配成高浓度的母液后用时稀释，这样在配制培养基时可以减

小加入微量物质时出现的误差，B正确；

C、为了提高动物成纤维细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基、添加牛血清、以滋养细

胞支持生长等措施，C正确；

D、有些培养基（不耐温的）只需要进行消毒处理，以避免破坏培养基中的营养物质，D错

误。

故选D。

@选择培养基成分及配制方法的分析

选择培养基的制作方法

（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，

在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培

养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，

从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从

而分离得到酵母菌和霉菌。

（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自

生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存：培养基中若缺乏有机碳源

则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。

（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利

用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染

的微生物。

（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时

易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因

酶失活而无法生存。

【典例】

16.植物基因工程可以改造农作物性状，使农作物变得更加高产。如图是培育良种水稻的有

关原理和步骤，有关叙述错误的是（）

抗除草剂基因

转基因植株

抗虫基因

A.图中表达载体中的T-DNA插入外源基因后将失去作用

B.图中②过程需要在无菌环境下用Ca2+处理土壤农杆菌

C.需要用除草剂检测转基因植株是否具有抗除草剂性状

D.该过程需要用到固体和液体培养基

【答案】A

【分析】

1、基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子和终止子。标记基因的作用是为了鉴别

受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

2、将目的基因导入微生物体内，常采用的方法是用一定浓度CaCL溶液处理微生物，提高细

胞摄取外源治理DNA的能力，该方法为感受态细胞法。

3、图中①代表构建基因表达载体，②代表将含有目的基因的Ti质粒转入农杆菌，③代表

用农杆菌侵染植物愈伤组织细胞，④代表再分化，⑤代表植物生长发育为植株的过程。

【详解】

A、T-DNA可将T-DNA之间的DNA序列转移并整合至受体细胞的染色体DNA上，使目的基

因能够稳定遗传，故T-DNA插入外源基因后不会失去作用，A错误；

B、用Ca2+处理农杆菌，使农杆菌处于感受态，利于农杆菌吸收目的基因完成转化过程，故

图中②将载体导入农杆菌过程需要在无菌环境卜用Ca2+处理土壤农杆菌，B正确；

C、为从个体水平上检测图中植株是否具有抗除草剂性状，可采用的方法是用相应除草剂喷

洒待测植株，C正确；

D、筛选含重组质粒的农杆菌时用的是固体培养基，扩大培养时应该用液体培养基，故该过

程需要用到固体和液体培养基，D正确。

故选Ao

17.将甲、乙、丙和丁四种细菌分别接种到A、B、C、D四种培养液中，经培养后分别测得

它们繁殖一代所需的时间，结果如下表所示：

繁殖一代所需时间（分钟）

培养液组别培养液成分

甲乙丙T

葡萄糖、、、—

ANaCIP04%MgSO443100—

葡萄糖、、3

NaCIPO4\MgSOc8

B2840

种氨基酸

葡萄糖、、

NaCIP0?\MgSO4>19

C252580—

种氨基酸

3

DNaCLMgSOcN03\PO4"———80

注：一表示细菌没有生长

下列相关分析正确的是（）

A.甲乙相比，均能生长在A培养基，且乙增长较快

B.甲、乙、丙和丁四种细菌，丁代谢类型与蓝细菌相似

C.四种培养基均需要通过121团高压蒸汽灭菌15min

D.氨基酸是甲、乙、丙、丁四种细菌生长的限制条件

【答案】B

【分析】

分析表格可知，在A培养液中，可以生长的细菌是甲、乙，其中甲繁殖一代所需时间短，

繁殖较快：比较A、B、C、D四种培养基，其中D培养基无有机碳源，在上面能生长繁殖的

细菌丁属于自养菌。分析表格可知，细菌的生长繁殖与氨基酸种类有关的只有细菌丙，所以

氨基酸是丙细菌生长繁殖的限制因素。

【详解】

A、由以上分析可知，甲乙相比，均能生长在A培养基，且甲增长较快，A错误；

B、甲、乙、丙和丁四种细菌，丁在没有葡萄糖和氨基酸的培养基中生长，属于自养型细菌，

代谢类型与蓝细菌相似，B正确；

C、培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力（90S以上）灭菌30min,

C错误；

D、由以上分析可知，氨基酸是丙细菌生长的限制条件，D错误。

故选Bo

18.为了筛选能产生阿拉伯胶（一种多糖）降解酶的菌株SM0L应选用以下表中哪种培养

基（）

（单位：g/L）

阿拉伯胶

培养基阿拉伯胶牛肉膏

NaNO3MgSO4KCIFeSO4

酶

甲25--310.50.01

乙2510-6--10.50.01

丙--3310.50.01

T25-3-10.50.01

A.甲B.乙C.丙D.T

【答案】D

【分析】

从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：第一种是可利用该分离对象对某一营养物

质有，，嗜好，，的原理，专门在培养基中加入或不加该营养物质，从而使它成为一种选择培养基;

或根据分离对象对pH、温度和氧气浓度的喜好，改变培养环境的理化性质，使环境条件最

适宜该微生物的生存，从而达到分离的目的。

【详解】

A、根据题意可知，需要"筛选能产生阿拉伯胶（一种多糖）降解酶的菌株SM01”,需要以阿

拉伯胶作为唯一碳源，甲中牛肉膏也属于碳源，因此排除甲培养基，A不符合题意；

B、由于该菌株能够产生阿拉伯胶的降解酶，因此培养基中不能添加阿拉伯胶酶，故排除乙

培养基，B不符合题意；

C、丙培养基无阿拉伯胶做碳源，选择牛肉膏做碳源，C不符合题意；

D、丁培养基以阿拉伯胶作为唯一碳源符合要求，即利用培养基丁培养基可以筛选该菌株，

D符合题意。

故选D。

19.在实验"分离以尿素为氮源的微生物”的无菌操作中，叙述错误的是（）

A.对土样进行梯度稀释过程需在无菌条件下进行

B.加入尿素后的培养基需用G6玻璃砂漏斗灭菌

C.接种时需使用无菌玻璃刮刀在酒精灯火焰旁涂布

D.涂布菌液后的固体平板需要倒置在恒温箱培养

【答案】B

【分析】

稀释涂布平板法回①常用来统计样品中活菌的数目;②统计的菌落数往往比活菌的实际数

目低;③样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目，通常选用菌落数在30〜300、

适用于计数的平板进行计数，菌落太少或太多都会使计数准确性变差。

【详解】

A、对土样进行梯度稀释过程需使用无菌水在无菌条件下进行，防止杂菌污染干扰，A正确；

B、尿素加热会分解，因此配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用高压蒸汽灭菌方法灭菌，

冷却后加入用G6玻璃纱漏斗过滤尿素溶液，B错误；

C、接种时必须保证无菌操作，故接种时需使用无菌玻璃刮刀在酒精灯火焰旁涂布，C正确；

D、当水蒸气累积到一定的程度会聚成水滴，倒流到培养中的细菌中，冲散菌体，不利于培

养观察，D正确。

故选Bo

20.下列有关微生物培养的叙述，错误的是()

A.噬菌体可在豆芽汁培养基中不断增殖

B.厌氧环境下，泡菜汁中乳酸菌产生乳酸抑制其他菌生长

C.稀释涂布培养可将菌体分散在固体培养基平面，以获得单菌落

D.在添加酚红指示剂的尿素固体培养基中，有服酶的细菌菌落周围出现红色环带

【答案】A

【分析】

1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后

可形成单个菌落。

2、细菌合成的胭酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培

养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。

【详解】

A、噬菌体是病毒，必须寄生在活细胞内，因而无法在豆芽汁的培养基中繁殖，A错误；

B、乳酸是乳酸菌的代谢产物，呈酸性，能够抑制其他微生物的生长，B正确；

C、单菌落的分离，可以采用稀释涂布法和平板划线法，C正确；

D、胭酶能够催化尿素分解成氨，氨是碱性的，能够使酚红指示剂变红，因而会在含胭酶的

菌落周围出现红色环带，D正确。

故选A。

培养基及其制备方法分析

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成胭酶,这种物质在

把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

(3)实验流程：土壤取样T样品的稀释T微生物的培养与观察T细菌的计数。

稀释涂布平板法计数微生物的注意问题

用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30〜300的平板进行计数。解题时易出

现以下误解：

(1)只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，

易受到偶发因素的影响。

(2)得到3个或3个以上菌落数在30〜300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：

①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240,虽然菌落数

均在“30〜300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实

验找出原因。

②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。

可见，并不是只要得到3个“菌落数在30〜300的平板”即可，而应该是涂布的同一

稀释度的平板均符合“菌落数在30〜300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格,

才能按照计算公式进行计算。

【典例】

21.如图是利用划线分离法在培养基上获得微生物单菌落实验操作，下列叙述错误的是()

A.该接种过程一般需灼烧接种环5次

B.划线结束可看到划线末端出现不连续单菌落

C.如果培养的是尿素分解菌，可加入酚红指示剂鉴定

D.该接种方法常用来纯化该种微生物但不能准确计数

【答案】B

【分析】

(1)划线分离大肠杆菌：在酒精灯火焰上灼烧接种环，将摇床上培养12h的菌液打开，接

种环部分深入到菌液中。然后，在固体培养基的平板上连续划线。接种环只在菌液中蘸菌液

一次，划线后盖好培养皿。最后，将培养皿倒置(盖在下面)，放在37回恒温培养箱中培养12~

24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。

(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的胭酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH

升高，酚红指示剂将变红。

【详解】

A、为了防止杂菌污染，每一次的划线之前和划线操作结束后都需要将接种环灼烧灭菌，图

示中共有4个划线区域，因此该接种过程一般需灼烧接种环5次，A正确；

B、划线结束后，将培养皿倒置放在一定温度的恒温培养箱中培养一定时间后，可看到划线

末端出现不连续单菌落，B错误；

C、若培养的是尿素分解菌，因该菌合成的胭酶可将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升

高，酚红指示剂将变红，所以可加入酚红指示剂来鉴定，C正确：

D、该接种方法（划线分离法）不易分离出单个菌落，不能准确计数培养液中微生物数量，

D正确。

故选B.

22.为筛选能分泌胭酶的细菌，所配制的培养基中不能含有的成分是（）

A.尿素B.甘露醵C.葡萄糖D.琼脂

【答案】D

【分析】

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：

（1）实验室中目的菌株的筛选：

①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度。pH等），同时抑制或阻

止其他微生物生长。培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合

成胭酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏服酶的微生物由于不能分解尿素，缺

乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物;

②方法：能合成胭酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的

细菌就是能分解尿素的细菌。

（2）分解尿素的细菌的鉴定：细菌合成的版酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌

能够分解尿素。

【详解】

A、由分析可知，为筛选能分泌胭酶的细菌，所配制的培养基中需要加入尿素作为唯一氮源，

A不符合题意；

BC、甘露醇、葡萄糖都可以作为碳源，且甘露醇还能维持细胞的形态，BC不符合题意；

D、因为琼脂含有一定量的含氮化合物，故不能加入琼脂，但需要加入琼脂糖，D符合题意。

故选Do

23.在"分离以尿素为氮源的微生物”实验中，下列叙述正确的是（）

A.若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置未接种的LB培养基作对照

B.在尿素培养基上长出的菌落一定是尿素分解菌

C.尿素可以作细菌的碳源和氮源

D.如指示剂变红就能准确地认定该菌能分解尿素

【答案】D

【分析】

1、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成胭酶的微生物

才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏胭酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生

长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

2、方法：能合成服酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的

细菌就是能分解尿素的细菌。

【详解】

A、若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种了的牛肉膏蛋白陈培养基作对照,

若牛肉膏蛋白陈培养基培养基上的菌落种类数目多于选择培养基上的菌落类型，则说明起到

了选择作用，A错误；

B、以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，也有可能是自生固氮菌，B错

误；

C、分离分解尿素的细菌用的培养基属于固体培养基，除含碳源、氮源、水、无机盐外，还

应含有琼脂，其中尿素可以作细菌的氮源，C错误；

D、尿素分解菌可以产生胭酶将尿素分解分解为氨，使pH升高，培养基中进入酚红指示剂

后，氨可以使指示剂呈红色，据此可以用酚红指示剂鉴别尿素分解菌，如指示剂变红就能准

确地认定该菌能分解尿素，D正确。

故选D。

24.下列关于"分离以尿素为氮源的微生物”实验的叙述，错误的是（）

A.土样应从有哺乳动物排泄物的地方取

B.在尿素固体培养基上生长的细菌，都是以尿素为氮源的

C.将实验组和对照组平板倒置，37回恒温培养24-48h

D.取IO1105的土壤稀释液0.1ml,分别涂布于尿素固体培养基上

【答案】B

【分析】

"分离土壤中以尿素为氮源的微生物”实验的原理：在以尿素为唯一氮源的培养基上，能分解

尿素的微生物能以尿素为氮源生.长，其他不能利用尿素的微生物由于缺乏氮源无法生长。选

择培养基是否起到选择作用，要有对照，对照组是全营养的培养基。

【详解】

A、哺乳动物排泄物中含有尿素，故土样应从有哺乳动物排泄物的地方取，A正确；

B、在尿素固体培养基上生长的细菌，不一定都是以尿素为氮源的，可能利用空气中的氮气，

B错误：

C、将实验组和对照组平板倒置，37回恒温培养24~48h,C正确；

D、测定土壤中分解尿素的细菌总数，利用稀释涂布平板法，即取IO，、105倍的土壤稀释液

各0.1mL,分别涂布于尿素固体培养基上，D正确。

故选Bo

25.下列关于生物技术实践的叙述，正确的是（）

A.用糯米酿酒，先由酒曲中的黑根霉或黑曲霉中的淀粉能完成糖化

B.植物组织培养时，菊花茎段在生根培养基上培养可以得到丛状苗

C.在分离以尿素为氮源的微生物时，有麻酶的细菌菌落周围会出现透明圈

D.测定样品中亚硝酸盐含量时，将水放入比色杯中，直接测其0D值，作为空白对照

【答案】A

【分析】

1、进行酒精发酵前要对糯米进行糖化，此时应在有氧、较高温度进行，该过程主要在酒曲

中的黑曲霉、黑根霉分泌产生的淀粉酶作用下进行。

2、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的胭酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在

以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示