高考生物总复习现代生物科技专题第2讲细胞工程全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖课件

选修三当代生物科技专题选考内容第二讲细胞工程第1页考纲要求全国卷五年考题考点命题1.植物组织培养Ⅱ2．动物细胞培养与体细胞克隆Ⅱ3．细胞融合与单克隆抗体Ⅱ卷ⅢT38(3)卷ⅡT40卷ⅠT40卷ⅡT40(1)(3)本专题以工农业生产、畜牧业生产和医学实践中详细事例为命题背景考查本专题中相关知识第2页1考点一2考点二3考点三4课末总结第3页1．细胞工程概念了解(1)原理和方法细胞生物学和______________。(2)操作水平__________________________。(3)工程目标按照人意愿来改变__________________或取得细胞产品。考点一植物细胞工程分子生物学细胞整体水平或细胞器水平细胞内遗传物质第4页(4)依据操作对象不一样分类植物细胞工程和_______________。2．植物细胞工程(1)理论基础——_______________①概念：含有某种生物全部遗传信息任何一个细胞，都含有发育成____________潜能。②物质基础：细胞中含有本物种______________。③表示条件：含有完整细胞结构，处于__________状态，提供一定______________和其它适宜外界条件。动物细胞工程细胞全能性完整生物体全部遗传信息离体营养、激素第5页离体植物器官、组织、细胞完整植株愈伤组织第6页(3)植物体细胞杂交技术①概念：将__________植物体细胞，在一定条件下融合成__________，并把杂种细胞培育成______________技术。②操作流程不一样种杂种细胞新植物体第7页③流程分析a．过程a为去除__________取得含有活力原生质体，用到酶是__________________。b．过程b是原生质体融合，其原理是_________________________。c．诱导b融合两种方法物理法包含__________________等；化学法普通用________________作为诱导剂。d．过程c是原生质体融合后再生出__________。e．过程d是_______________技术，其原理是________________。④意义：_____________________________。细胞壁纤维素酶和果胶酶细胞膜含有一定流动性离心、振动、电激聚乙二醇(PEG)细胞壁植物组织培养细胞全能性克服了远缘杂交不亲和障碍第8页3．植物细胞工程实际应用(1)微型繁殖：优点是能够_____________________。(2)作物脱毒：利用____________等无毒组织进行微型繁殖。(3)培育__________：能够处理一些植物坚固率低、繁殖困难问题。(4)作物新品种培育保持亲本优良性状茎尖、根尖人工种子第9页植物组织培养第10页判断以下说法正误。(1)棉花根尖细胞经诱导形成幼苗能表达细胞全能性(

)(2)植物每个细胞在植物体内和体外都能表现出细胞全能性(

)(3)在诱导离体菊花茎段形成幼苗过程中，不会发生细胞增殖和分化(

)√××第11页(4)愈伤组织是外植体经过脱分化和再分化后形成(

)(5)利用物理法或化学法，能够直接将两个植物细胞进行诱导融合(

)(6)再生出细胞壁是原生质体融合成功标志。(

)(7)在愈伤组织培养中加入细胞融合诱导剂，可取得染色体加倍细胞(

)(8)培育脱毒苗所采取主要技术是细胞杂交(

)××√××第12页1．研究人员研究了马铃薯茎尖外植体大小对幼苗成苗率和脱毒率影响，试验结果以下列图，请思索：(1)试验结果表明，茎尖大小与脱毒率、成苗率关系怎样？(2)马铃薯脱毒培养中茎尖外植体适宜大小为多少mm?第13页第14页[提醒](1)a表示去除细胞壁取得含有活力原生质体，因为细胞壁主要成份是纤维素和果胶，所以使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。(2)b表示原生质体融合，其原理是细胞膜含有一定流动性。(3)物理法和化学法。物理法包含离心、振动、电激等；化学法普通用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。(4)能够克服远缘杂交不亲和障碍。第15页1．植物组织培养和植物体细胞杂交比较名称植物组织培养植物体细胞杂交原理细胞全能性细胞膜含有一定流动性和细胞全能性第16页第17页名称植物组织培养植物体细胞杂交选材选取根尖、茎尖、形成层部位最轻易诱导脱分化不一样植物细胞技术操作脱分化、再分化等除脱分化、再分化外，还要用酶解法去除细胞壁，用一定方法诱导细胞融合关系植物组织培养是植物体细胞杂交基础，植物体细胞杂交所用技术更复杂第18页2.脱分化和再分化比较内容脱分化再分化过程外植体→愈伤组织愈伤组织→胚状体形成体特点排列疏松、无规则、高度液泡化薄壁细胞有根、芽条件a.离体b．适宜营养c．生长素/细胞分裂素百分比适中d．不需要光照a.离体b．适宜营养c．生长素和细胞分裂素d．光照第19页3.激素百分比与分化关系适当提升生长素与细胞分裂素百分比轻易生根，适当提升细胞分裂素与生长素百分比轻易生芽，百分比适中诱导产生愈伤组织。(如图所表示)：4．植物体细胞杂交过程中杂种细胞类型及检测方法(1)诱导产物(假设用于杂交两种植物细胞分别为A、B)：①未融合细胞：A和B。②两两融合细胞：AA、BB和AB。③多细胞融合体。第20页(2)检测方法：对诱导产物中细胞进行植物组织培养，然后依据得到植物性状进行判断。①若只表现出一个植物性状，说明是未融合细胞。②若得到是含有两种亲本性状植物，说明是杂种植株。③若得到是含有两种亲本性状植物，且一个植物性状得到加强，则是多细胞融合体。④若只表现出一个植物性状且效果得到加强，则是同种细胞融合结果。第21页5．单倍体育种和突变体利用不一样点项目原理优点结果单倍体育种染色体变异显著缩短育种年限单育1号烟草品种，中花8号、11号水稻和京花1号小麦品种等突变体利用基因突变产生新基因，大幅度改良一些性状抗花叶病毒甘蔗、抗盐碱野生烟草等第22页[高考警示]相关细胞全能性及细胞培养四个注意点(1)含有全能性≠表达(实现)全能性①含有全能性：理论上，活细胞都含有全能性。②表达全能性：只有发育成完整个体，才能说明实现了细胞全能性。(2)细胞全能性大小比较①植物细胞>动物细胞。②受精卵>生殖细胞>体细胞。③分化程度低细胞>分化程度高细胞；幼嫩细胞>衰老细胞；分裂能力强细胞>分裂能力低细胞。第23页(1)若利用传统有性杂交(即用番茄、马铃薯杂交)能否得到可育杂种植株？为何？__________________________________。不能。不一样种植物存在生殖隔离第24页(2)在利用杂种细胞培育杂种植株过程中，利用技术伎俩是______________，依据原理是____________________。其中过程②称为______________技术，与过程③亲密相关含有单层膜结构细胞器为__________，过程④相当于__________，过程⑤包括细胞分裂方式为__________。(3)已知番茄、马铃薯分别为四倍体、二倍体，则“番茄—马铃薯”属于______倍体植株。(4)柴油树种子含有柴油是植物细胞代谢产物，可用植物组织培养来实现柴油工业化生产。若利用此技术，将柴油树细胞培养进行到______(填字母编号)阶段即可。植物组织培养植物细胞全能性原生质体融合高尔基体脱分化有丝分裂六e第25页[解析]

(1)番茄和马铃薯属于两种植物，存在生殖隔离，不能经过有性杂交产生后代。(2)过程②是把a、b两个原生质体融合在一起，所以称为原生质体融合。过程③是在融合原生质体外再生一层细胞壁，而细胞壁形成与高尔基体相关。过程④结果是形成了愈伤组织，所以④为脱分化。(3)“番茄—马铃薯”属于异源多倍体中异源六倍体。(4)柴油是植物细胞代谢产物，要实现其工业化生产需将柴油树细胞培养到愈伤组织，然后进行提取。第26页〔变式训练〕D第27页C．若①是人参细胞，对②进行扩大培养可提升细胞产物人参皂甙产量D．若①是含有杂种优势农作物细胞，则用③进行繁育会发生性状分离[解析]

农作物细胞用③繁育属无性繁殖，不会发生性状分离。第28页(1)要促进细胞分裂生长，培养基中应有营养物质和激素。营养物质包含__________和小分子有机物，激素包含细胞分裂素和__________两类植物激素。无机物生长素第29页(2)此过程依据原理是______________________。A和B阶段主要进行分裂方式是__________，B阶段除了细胞分裂外，还进行细胞__________等。(3)此过程要无菌操作，主要是指对__________进行灭菌。B阶段需要光照，原因是__________________________________________________。(4)试管苗根细胞没有叶绿素，而叶肉细胞含有叶绿素，这是基因______________结果。植物细胞全能性有丝分裂分化培养基芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素合成需要光照条件选择性表示第30页[解析]

(1)要促进细胞分裂生长，培养基中应有营养物质和激素。营养物质包含无机物和小分子有机物，激素包含细胞分裂素和生长素两类植物激素。(2)植物组织培养过程依据原理是植物细胞全能性。A是脱分化过程，B是再分化过程，二者均进行有丝分裂，B阶段除了细胞分裂外，还进行细胞分化等。(3)植物组织培养过程需要无菌操作，主要是指对培养基进行灭菌，对外植体等进行消毒。再分化阶段需要光照，原因是在此过程中芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素合成需要光照条件。(4)试管苗根细胞没有叶绿素，而叶肉细胞含有叶绿素，这是基因选择性表示结果。第31页1．动物细胞培养——动物细胞工程技术基础(1)原理：__________。(2)培养条件①无菌、无毒环境：对__________和全部培养用具进行无菌处理，添加__________，定时更换培养液以去除__________。②营养：除正常有机和无机营养外，加入____________等一些天然成份。考点二动物细胞培养与体细胞克隆细胞增殖培养液抗生素代谢产物血清、血浆第32页③适宜温度和pH：温度为____________(哺乳动物)，pH为__________。④气体环境：含95%空气加__________混合气体，其中后者作用是__________________。(3)动物细胞培养过程(4)应用生物制品生产、检测__________、医学研究。36.5±0.5℃7.2～7.45%CO2维持培养液pH有毒物质第33页2．动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)原理：_________________________。(2)动物体细胞核移植技术过程动物体细胞核含有全能性第34页(3)结果：______________。(4)应用①加速家畜__________进程，促进优良畜群繁育。②保护__________。③生产医用蛋白。④作为异种移植__________。⑤用于组织器官__________。产生新个体遗传改良濒危物种供体移植第35页判断以下说法正误。(1)连续细胞系细胞大多含有二倍体核型(

)(2)制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理(

)(3)肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%CO2刺激细胞呼吸(

)(4)与“多利”羊等克隆哺乳动物相关技术有胚胎移植、细胞培养和核移植(

)(5)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶作用相同(

)×××√×第36页如图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况改变曲线，图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析：第37页(1)原代培养和传代培养分界点是哪个？(2)AB和DE段繁殖速度迟缓原因是什么？(3)E点后细胞大多数含有异倍体核型，这么细胞有什么特点？[提醒](1)B点之前培养称为原代培养，之后培养称为传代培养。(2)发生了接触抑制。(3)E点后细胞属于细胞系，能无限增殖。第38页1．植物组织培养与动物细胞培养比较第39页第40页技术内容项目植物组织培养动物细胞培养培养结果能够取得植株，也能够取得大量细胞只能取得大量细胞，不能得到生物个体应用①植物快速繁殖与脱毒植物培养②生产细胞产品③制造人工种子④用于转基因植物培育①生产蛋白质生物制品②培养皮肤移植材料③检测有毒物质④用于生理、病理、药理等研究相同点①都需人工条件无菌操作②都是合成培养基③都需适宜温度、pH等条件第41页2.动物细胞培养与动物体细胞核移植比较项目动物细胞培养动物体细胞核移植原理细胞增殖动物细胞核全能性过程结果取得细胞群取得与供体遗传物质基本相同个体第42页3.核移植时应注意几个问题(1)核移植时应选MⅡ中期卵母细胞原因①这类细胞体积大，易于操作；②卵黄多，营养物质丰富，可为发育提供充分营养；③卵母细胞细胞质中存在激发细胞核全能性表示物质。(2)克隆动物是由重组细胞经培养而来，该重组细胞细胞质基因起源于受体细胞，细胞核基因起源于提供细胞核亲本，其遗传物质来自2个亲本。(3)核移植中供体动物、提供卵母细胞动物、代孕动物和克隆动物之间关系：克隆动物绝大部分性状与供体动物相同，少数性状与提供卵母细胞动物相同，与代孕动物性状无遗传关系。(4)动物体细胞核移植技术(克隆)从生殖方式角度看属无性生殖，重组细胞相当于受精卵，需要动物细胞培养和胚胎工程技术支持。第43页[高考警示](1)原代培养和传代培养①原代培养：可有两种表述：a.细胞悬液第一次在瓶中培养，没有分瓶培养之前细胞培养；b.第1代细胞培养与传10代以内细胞培养统称为原代培养。两种表述没有本质区分。②传代培养：一样有两种表述：a.细胞悬液培养一段时间后，分瓶再进行细胞培养；b.传10代以后细胞培养，统称为传代培养。第44页(2)细胞株和细胞系①细胞株：原代培养细胞普通传至10代左右会出现生长停滞，衰老死亡，少数度过“危机”细胞能传50代左右，形成细胞株。细胞株遗传物质并没有发生改变。②细胞系：细胞株传至50代以后，会出现第二次危机，少数度过第二次危机细胞能够无限传代下去，形成细胞系。细胞系遗传物质发生了改变，带有癌变细胞特点。第45页B第46页A．形成动物①②过程分别属于有性生殖和无性生殖B．产生动物②过程中可发生基因突变、基因重组等C．动物②产生表明动物细胞细胞核含有全能性D．a、b、c细胞形成过程，仅c细胞为有丝分裂[解析]

动物①经过受精作用形成，属于有性生殖，动物②经过细胞核移植技术形成，利用原理是动物细胞细胞核含有全能性，形成动物②过程属于无性生殖，A、C正确；a、b细胞分别由精原细胞和卵原细胞经过减数分裂形成，c细胞是体细胞，经过有丝分裂形成，D正确；产生动物②过程中并没有发生基因重组，故B错误。第47页3．(·东城模拟)以下相关细胞工程说法正确是(

)A．在愈伤组织形成过程中，除适宜温度、pH和无菌条件外，还需要有植物激素进行调整B．植物体细胞杂交前需要用酶去除细胞壁取得原生质体，然后再用灭活病毒促进融合C．利用动物体细胞核移植方法得到克隆动物是培育新物种一个方式D．动物细胞应在含5%CO2恒温箱中培养，CO2作用是为细胞提供碳源〔变式训练〕A第48页[解析]

在愈伤组织形成过程中，需添加生长素和细胞分裂素等植物激素进行调整；灭活病毒是促进动物细胞融合特有方法；核移植属于克隆，为无性生殖，不会产生新物种；动物细胞应在含5%CO2恒温箱中培养，CO2作用是维持培养液中pH。第49页1．动物细胞融合(1)原理：_________________。(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、_____________、电激等。(3)意义：突破了________________局限，使__________成为可能，也为制造_____________开辟了新路径。考点三动物细胞融合与单克隆抗体制备细胞膜流动性灭活病毒有性杂交方法远缘杂交单克隆抗体第50页2．单克隆抗体(1)制备过程(2)优点：特异性强、__________，可大量制备。(3)用途：作为__________；用于治疗疾病和__________。灵敏度高诊疗试剂运载药品第51页判断以下说法正误。(1)能够用灭活病毒促进动物细胞融合，而不能促进植物细胞融合(

)(2)小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，B淋巴细胞染色体数为46，融合后形成杂交瘤细胞DNA分子数为86(

)(3)杂交瘤细胞进行体内培养，是为了取得能产生单克隆抗体胚胎(

)(4)体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体(

)(5)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经细胞融合后有三种细胞类型(若仅考虑两两融合情况)(

)(6)植物原生质体融合与动物细胞融合原理是相同(

)√×××√√第52页如图为制备单克隆抗体和多克隆抗体示意图。请据图思索：第53页(1)单克隆抗体相比多克隆抗体，其优点有哪些？(2)图中第一次筛选和第二次筛选目标有何不一样？(3)注射抗原目标是什么？(4)杂交瘤细胞有什么特点？[提醒](1)单克隆抗体优点是：特异性强、灵敏度高，可大量制备。(2)第一次筛选目标是筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选目标是筛选出能产生所需单克隆抗体杂交瘤细胞。(3)刺激机体发生免疫反应，从而产生浆细胞。(4)既能无限增殖，又能产生所需抗体。第54页1．植物体细胞杂交与动物细胞融合比较植物体细胞杂交动物细胞融合(单克隆抗体制备)理论基础(原理)细胞膜流动性、细胞全能性细胞膜流动性、细胞增殖融合前处理酶解法(纤维素酶、果胶酶)去除细胞壁注射特定抗原使正常小鼠产生免疫反应第55页植物体细胞杂交动物细胞融合(单克隆抗体制备)促融方法①物理法：离心、振动、电刺激等；②化学法：聚乙二醇(PEG)①物化法：与植物细胞融合相同；②生物法：灭活病毒过程第一步原生质体制备(酶解法)正常小鼠免疫处理第二步原生质体融合(物化法)动物细胞融合第三步杂种细胞筛选与培养杂交瘤细胞筛选与培养第四步杂种植株诱导与判定单克隆抗体提纯第56页第57页2.单克隆抗体制备(1)血清抗体与单克隆抗体：名称产生特点血清抗体由浆细胞分泌普通从血清中分离，产量低、纯度低、特异性差单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌特异性强，灵敏度高，能大量制备第58页(2)单克隆抗体制备：第59页3．单克隆抗体制备过程几个问题分析(1)对动物免疫原因：B淋巴细胞要经过免疫过程，即接触抗原，增殖分化为有特异性免疫功效B淋巴细胞，才能产生对应抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合B淋巴细胞实际上是浆细胞。(2)在单克隆抗体制备过程中，普通认为有两次筛选过程，第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基)，第二次是深入筛选出能产生人们所需抗体杂交瘤细胞。(3)杂交瘤细胞具备双亲遗传物质，不但含有浆细胞产生特异性抗体能力，还含有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖能力，从而能够克服单纯B淋巴细胞不能无限增殖缺点，而大量生产单克隆抗体。第60页[高考警示](1)植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶作用对象不一样，纤维素酶和果胶酶作用于细胞壁，而胰蛋白酶等作用于细胞间蛋白质。(2)在细胞融合时，可出现各种杂种细胞，如B细胞—B细胞，骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞，B细胞—骨髓瘤细胞。(3)动物细胞融合和植物体细胞杂交，均需对杂种细胞进行筛选，但筛选方法不一样，前者可用免疫法，后者可用机械方法、生理学或遗传学方法。第61页(4)各项技术在使用中普通要借助于其它某种技术帮助，如动物细胞融合、单克隆抗体制备、胚胎移植、核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程技术基础。(5)灭活病毒保持了其抗原性，但毒性消失。(6)植物杂交细胞在激素诱导下能表示出全能性，但动物杂交细胞全能性不能表示。第62页第63页(1)普通情况下，奶牛所产生能用于体外受精卵母细胞往往数量不足，我们通常对供体母牛用____________处理。(2)在基因工程中，我们称②为____________，在②进入③之前要用___________________________________等工具来构建基因表示载体，能实现②进入③惯用方法是_____________。(3)图中①普通经__________处理能够得到③，从③到④过程中普通利用未受精卵细胞去核后作为受体，而不用普通体细胞，原因是_______________________________________。促性腺激素目标基因限制性核酸内切酶和DNA连接酶载体显微注射法胰蛋白酶卵细胞中含有能激发细胞核全能性物质第64页(4)⑥是⑤发育后代，那么⑥遗传性状和_____________相同。假如②数量太少，惯用________技术扩增，要实现大批量生产血清白蛋白，③提供者性别应是__________。[解析]

(1)超数排卵用促性腺激素进行处理。(2)构建基因表示载体工含有限制酶、DNA连接酶、载体；将目标基因导入动物受体细胞惯用方法是显微注射技术。(3)动物组织用胰蛋白酶处理可得到单个细胞；分化动物细胞细胞核全能性受到限制，但卵母细胞细胞质中含有促进细胞核全能性表示物质，所以应将细胞核移入去核卵母细胞中。(4)利用核移植技术培育后代与供核个体遗传性状相同；因为要利用乳腺生产药品，所以应选取雌性动物作为核供体。荷斯坦奶牛PCR雌性第65页4．(·徐州质检)下面相关动物细胞工程和植物细胞工程叙述，正确是(

)A．叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织B．融合植物叶肉细胞时，应先用溶菌酶除去细胞壁C．动物细胞培养过程中要用到胰蛋白酶，目标是使组织细胞分散成单个细胞D．单克隆抗体制备过程中，只进行了一次筛选〔变式训练〕C第66页[解析]

了解动、植物细胞工程区分和联络是解题关键。植物叶肉细胞经脱分化过程可形成愈伤组织；融合植物叶肉细胞时，应先用纤维素酶和果胶酶除去细胞壁；单克隆抗体制备过程中，最少要进行两次筛选(筛选杂交瘤细胞和筛选产生单一抗体杂交瘤细胞)。第67页(1)选择H蛋白作为单克隆抗体作用靶点，是因为H蛋白在成年个体正常组织中__________(填“低表示”或“高表示”)。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所表示。制备免疫小鼠用H蛋白(抗原)时，应构建________区基因，转入原核细胞表示并提纯。低表示胞外第68页(2)将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠脾脏细胞与________细胞进行融合，使用化学诱导剂是______________________，细胞融合原理是_______________。(3)将融合细胞在______培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，应用__________________技术进行抗体阳性检测。经屡次筛选，就能得到产生单克隆抗体杂交瘤细胞。(4)将筛选得到杂交瘤细胞，经过____________或小鼠腹腔内培养，获取大量单克隆抗体。(5)治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药品结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞。这充分表达了单克隆抗体__________________________________特点。骨髓瘤PEG(或“聚乙二醇”)细胞膜流动性选择抗原—抗体杂交体外(培养)特异性强(或“识别抗原部位专一”)第69页[解析]

(1)依据题意可知，H蛋白在各种恶性肿瘤尤其是乳腺癌细胞中过量表示，所以原癌基因表示产物H蛋白在正常组织中低表示；因为抗体主要存在于细胞外液中，所以依据H蛋白结构图可知，若用H蛋白制备抗原需要利用胞外区基因，由制备取得抗体作用于该抗原胞外区。(2)在制备单克隆抗体过程中，需要将脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导其融合试剂为聚乙二醇，其融合原理是借助于细胞膜流动性。(3)将融合细胞接种在选择培养基中，从中选出杂交瘤细胞，利用抗原——抗体杂交技术最终选出产生单克隆抗体杂交瘤细胞。(4)将杂交瘤细胞经过体外培养或小鼠腹腔内培养，取得大量单克隆抗体。(5)单克隆抗体优点是特异性强，灵敏度高。第70页课末总结

〔思维导图〕

第71页〔探究高考·明确考向〕第72页回答以下问题：(1)先要经过基因工程方法取得蛋白乙，若在开启子下游直接接上编码蛋白乙DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，则所构建表示载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是___________________________________________________________。(2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为__________，加入了__________作为合成DNA原料。编码乙DNA序列起始端无ATG，转录出mRNA无起始密码子模板dNTP第73页(3)现经过基因工程方法取得了甲、乙、丙三种蛋白，要判定这三种蛋白是否含有刺激T淋巴细胞增殖作用，某同学做了以下试验：将一定量含T淋巴细胞培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定时检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。①由图2可知，当细胞浓度到达a时，添加蛋白乙培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采取方法是__________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定CO2浓度，CO2作用是_________________。②仅依据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺乏__________(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所编码肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖效果。进行细胞传代培养维持培养液pHC第74页[解析]

(1)若在开启子下游直接接上编码蛋白乙DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，则转录出mRNA上缺乏起始密码子，故不能翻译出蛋白乙。(2)使用PCR技术获取DNA片段时，应在PCR反应体系中添加引物、耐高温DNA聚合酶、模板、dNTP作为原料。(3)T淋巴细胞浓度之所以不再增加，是因为细胞间出现接触抑制，所以若要使T淋巴细胞继续增殖，需要对贴满瓶壁细胞使用胰蛋白酶处理，然后分瓶培养，即细胞传代培养。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定CO2浓度，以维持培养液pH。据图分析，蛋白丙与对照靠近说明B、D片段对于T淋巴细胞增殖不是非常主要，蛋白甲和乙对T淋巴细胞增殖都有较大影响，甲、乙两种蛋白中有、而丙种蛋白中没有片段是C，所以缺乏C片段会降低其刺激T淋巴细胞增殖效果。第75页2．(·全国卷Ⅱ，40)下列图表示经过核移植等技术取得某种克隆哺乳动物(二倍体)流程。回答以下问题：(1)图中A表示正常细胞核，染色体数为2n，则其性染色体组成可为__________。过程①表示去除细胞核，该过程普通要在卵母细胞培养至适当初期再进行，去核时常采取__________方法。②代表过程是__________。XX或XY显微操作胚胎移植第76页(2)经过屡次传代后，供体细胞中__________稳定性会降低。所以，选材时必须关注传代次数。(3)若取得克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质角度分析其原因是__________________________________________________________。(4)与克隆羊“多莉(利)”培养成功一样，其它克隆动物成功取得也证实了_____________________________________。遗传物质卵母细胞细胞质中遗传物质会对克隆动物性状产生影响动物已分化体细胞细胞核含有全能性第77页[解析]

(1)提供体细胞供体可能为雌性，也可能为雄性，所以图中A(正常细胞