浙江省台州市八校联盟2022-2023学年高二下学期期中联考生物试题（解析版）

高级中学名校试卷PAGEPAGE1浙江省台州市八校联盟2022-2023学年高二下学期期中联考试题一、选择题1.动物细胞培养是动物细胞工程的基础技术。下列不属于动物细胞培养的必要条件是（）A.生长素 B.抗生素 C.血清 D.无机盐〖答案〗A〖祥解〗动物细胞培养是动物细胞工程技术的基础，需要满足的条件为：无菌、无毒；营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；适宜的温度和PH；气体环境：95%空气(细胞代谢必需的)和5%的CO2。【详析】动物细胞培养条件：(1)无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。(2)营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。(3)适宜的温度和PH。(4)气体环境：95%空气(细胞代谢必需的)和5%的CO2，综上，BCD正确，A错误。故选A。2.“基因剪刀”——限制性内切核酸酶是基因工程中非常重要的一种工具，它所切割的部位是（）A.① B.② C.③ D.④〖答案〗B〖祥解〗限制酶识别DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的部位将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒。经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。【详析】限制性内切核酸酶识别DNA中特定核苷酸序列，并在特定的核苷酸之间切割磷酸二酯键，即图中部位②，①是磷酸基团和脱氧核糖之间的化学键，③是脱氧核糖和碱基之间的化学键，④是氢键，ACD不符合题意，B符合题意。故选B。3.2017年11月27日，世界上首例体细胞克隆猴“中中”和“华华”在我国诞生。下列技术与“中中”和“华华”的产生无关的是（）A.胚胎移植 B.体外受精 C.胚胎体外培养 D.核移植〖答案〗B〖祥解〗动物体细胞核移植技术和克隆动物：（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。（2）选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞比较大，容易操作；卵（母）细胞细胞质多，营养丰富。卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达。（3）体细胞核移植的大致过程是：将供体体细胞核导入受体去核卵母细胞，形成重组细胞，用电脉冲刺激形成早期胚胎，导入代孕母羊的子宫，妊娠、出生后即克隆动物。【详析】体细胞克隆猴培养过程，需将体细胞细胞核移入去核卵母细胞中，构成重构胚，用物理或化学法诱导重构胚发育，需进行胚胎体外培养和胚胎移植，克隆猴是无性生殖，不需要进行体外受精，ACD不符合题意，B符合题意。故选B。4.拟采用“取材→消毒→愈伤组织→出芽→生根→移栽”的方法繁殖一种名贵花卉。下列有关叙述错误的是（）A.该过程为器官发生途径B.整个过程需要配制不同的培养基C.用聚乙二醇处理愈伤组织，可使其发生细胞融合D.取材时除了要考虑其优良性状外还需考虑细胞全能性的表达能力〖答案〗C〖祥解〗植物组织培养原理：植物组织培养将植物细胞培养成植物个体，体现了细胞的全能性。植物组织培养过程：离体的植物器官、组织或细胞→愈伤组织→胚状体→植物体。常用的植物激素生长素和细胞分裂素。【详析】A、该过程是离体培养的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程，即器官发生途径，A正确；B、脱分化阶段和再分化阶段等不同阶段对营养物质和激素的需要是不同的，整个过程需要配制不同的培养基，B正确；C、植物体细胞杂交之前需要去除细胞壁才能诱导融合，C错误；D、不同外植体表现出全能性的难易程度不同，取材时除了要考虑其优良性状外还需考虑细胞全能性的表达能力，D正确。故选C。5.微生物培养过程中十分重视无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作正确的是（）A.实验操作者的双手用75%酒精消毒B.接种操作时要打开紫外灯并在酒精灯火焰附近进行C.培养工作结束后，所有使用过的器皿都必须洗涤后再高压蒸汽灭菌处理D.高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从高压蒸汽灭菌锅开始加热时计时〖答案〗A〖祥解〗高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15~30min。灭菌时间从高压蒸汽灭菌锅达到要求温度或压力值到灭菌完成。【详析】A、实验操作者的双手和衣着用75%酒精消毒，A正确；B、酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了无菌操作，接种操作时要在酒精灯火焰附近进行，但实验者接种操作过程不能打开紫外灯，B错误；C、培养工作结束后，所有使用过的器皿都必须先经过高压蒸汽灭菌处理后再洗涤，C错误；D、高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从高压蒸汽灭菌锅达到预设温度或压力值时开始计时，直至灭菌完成为止，D错误。故选A。6.生物是一门既古老又现代的技术。下列关于生物技术的操作过程、原理或应用的说法错误的是（）A.基因工程的核心是构建重组DNA分子 B.细胞膜具有流动性是植物体细胞杂交的基础C.胚胎分割属于动物有性生殖 D.稀释涂布平板法可用于微生物的分离与纯化〖答案〗C〖祥解〗1.基因工程操作基本步骤中的核心步骤是基因表达载体的构建。2.植物体细胞杂交技术:就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。3.胚胎分割：是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术。来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。4.微生物分离与纯化的方法有①平板划线法：将灭菌过的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详析】A、基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等，A正确；B、植物体细胞杂交涉及原生质体的融合，依赖于细胞膜的流动性，因此细胞膜具有流动性是植物体细胞杂交的基础，B正确；C、胚胎分割可以看作动物无性生殖方法的之一，C错误；D、稀释涂布平板法是将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，可用于微生物的分离与纯化，D正确。故选C。7.下图为平板划线法接种微生物的示意图，下列说法错误的是（）A.观察或比较各种细菌菌落形态的最佳区域是④B.划线时要注意不能将④区域的划线与①区域相连C.每次划线后，都应将接种环放在酒精灯火焰上灼烧D.划线结束时即可看到划线末端出现不连续单菌落〖答案〗D〖祥解〗1、平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。2、平板划线操作的注意事项：（1）第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。（2）灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。（3）划线时最后一区域不要与第一区域相连。（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。【详析】A、④区域的划线与①区域没有相连，根据箭头方向，可知④区域是最后划线区域，由于随着在平板上连续划线，菌体数量越来越少，故观察或比较各种细菌菌落形态的最佳区域是④，A正确；B、划线时要注意不能将④区域的划线与①区域相连，才能达到分离的效果，B正确；C、图中所示的4次划线后，都应将接种环放在酒精灯上灼烧，其中前三次划线结束后的灼烧是为了杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少，最后一次灼烧是为了杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者，C正确；D、划线结束后，将培养皿倒置放在一定温度的恒温培养箱中培养一定时间后，可看到划线末端出现不连续单菌落，D错误。故选D。8.海拉（HeLa）细胞是1951年从一位患宫颈癌的美国病人身上分离出来的宫颈癌细胞。虽然该病人已经去世，但海拉细胞直到今天还被用于科学研究。下列说法正确的是（）A.海拉细胞可利用液体培养基在体外无限传代，在细胞培养过程中会出现接触抑制现象B.将癌变的宫颈癌组织分散为单个的细胞，可用胃蛋白酶处理C.培养液需定期更换，以便清除代谢废物，防止代谢废物积累对细胞自身造成危害D.体外培养海拉细胞时，需提供95％O2和5％CO2的气体环境〖答案〗C〖祥解〗接触抑制是将多细胞生物的细胞进行体外培养时，分散贴壁生长的细胞一旦相互汇合接触，即停止移动和生长的现象；动物细胞培养条件：无菌、无毒的环境(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)；营养(氨基酸、无机盐、维生素、葡萄糖、动物血清等)；温度和pH36.5+(-)0.5度，PH为7.2-7.44、气体环境：(95%空气和5%CO2保证细胞顺利的生长增殖。【详析】A、海拉细胞属于癌细胞，在细胞培养过程中不会出现接触抑制现象，A错误；B、将癌变的宫颈癌组织分散为单个的细胞，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，B错误；C、对动物细胞进行培养时，应营造无菌、无毒的环境，需要做到培养液需定期更换，以便清除代谢废物，防止代谢废物积累对细胞自身造成危害，C正确；D、体外培养海拉细胞时，需提供95％空气和5％CO2的气体环境，CO2的作用是维持溶液的pH，D错误。故选C9.病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构进行扩散导致果蔬产量和品质退化。利用植物组织培养技术可以快速生产出脱毒苗。下列叙述错误的是（）A.多种消毒药剂配合使用来消毒植株茎尖切段，可获得良好的消毒效果B.形成愈伤组织的过程中，可能会发生染色体变异、基因突变及基因重组C.脱毒苗培育过程中适当提高NAA的比例有利于根的分化D.植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达〖答案〗B〖祥解〗植物组织培养中培养基生长素用量比细胞分裂素用量，比值高时，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低时，有利于芽的分化、抑制根的形成。【详析】A、多种消毒药剂（常用70%的酒精和5%的次氯酸钠）配合使用来消毒植株茎尖切段，可获得良好的消毒效果，A正确；B、形成愈伤组织的过程发生有丝分裂，可能会发生染色体变异、基因突变，但不会发生基因重组，基因重组发生在减数分裂过程中，B错误；C、植物组织培养过程中，提高生长素的比例有利于生根，提高细胞分裂素的比例有利于芽的生长，NAA与生长素的作用类似，故脱毒苗培育过程中适当提高NAA的比例有利于根的分化，C正确；D、根据题干“病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构进行扩散”，可知植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达，D正确。故选B。10.下图为人胰岛素基因结构模式图，下列叙述正确的是（）A.启动子是RNA聚合酶结合的部位B.cDNA文库和基因组文库的基因中均含有内含子C.人胰岛细胞的cDNA文库中可找到该基因D.细胞内DNA复制时，只对编码区进行复制〖答案〗A〖祥解〗真核细胞的基因也是由编码区和非编码区两部分组成的，编码区包括：外显子——能编码蛋白质的序列；特点：间隔的、不连续的，即能编码蛋白质的序列被不能编码蛋白质的序列分隔开来，成为一种断列的形式；内含子——不能编码蛋白质的序列；非编码区：有调控作用的核苷酸序列，启动子——是基因结构中位于编码区上游的核苷酸序列，是RNA聚合酶结合点,能准确地识别转录的起点并开始转录，有调控遗传信息表达的作用。【详析】A、启动子位于基因的非编码区，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录，A正确；B、cDNA文库是以成熟mRNA为模板逆转录合成的，故cDNA文库中的基因没有内含子，而基因组文库的基因中含有内含子，B错误；C、人胰岛α细胞的cDNA文库中对应的基因无启动子、终止子和内含子，故人胰岛α细胞的cDNA文库中可找不到该基因，C错误；D、细胞内DNA复制时，DNA分子中所有序列均被复制，即不管是编码区还是非编码区均被复制，D错误。故选A。11.下列关于微生物发酵的叙述正确的是（）A.制作葡萄酒的过程中，将挤碎的葡萄放入发酵瓶中时，应尽可能装满B.为防止杂菌进入，果酒、果醋发酵都需要严格密封C.果醋发酵后期，随着醋酸菌数量减少，醋酸含量不断降低D.泡菜腌制过程中，可加入已腌制过的泡菜汁来加快发酵进程〖答案〗D〖祥解〗1.果酒制作的原理是利用酵母菌在无氧条件下才能进行酒精发酵产生酒精，若是在有氧条件下则进行有氧呼吸而大量繁殖。参与果酒制作的微生物是酵母菌，其代谢类型为异养兼性厌氧型。果酒发酵是在18～30℃、缺氧、呈酸性的环境中，其中酵母菌可大量繁殖，而其他绝大多数微生物无法适应这一环境而受到抑制。2.果醋的制作原理是利用醋酸菌在氧气充足的条件将乙醇先转化为乙醛，在进一步转化为醋酸。醋酸菌是好氧菌，必须生活在氧气充足的环境中，且最适生长温度是30～35℃，所以果醋的发酵过程中，需要往发酵液中持续地通入无菌空气（氧气）。【详析】A、挤碎的葡萄放入发酵瓶中不要装满，一方面，留有一定空间，有氧条件，利于酵母菌快速繁殖；耗尽O2后，再进行酒精发酵，另一方面还能防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液溢出，A错误；B、果酒制作的原理是利用酵母菌在无氧条件下才能进行酒精发酵产生酒精，果酒发酵需要严格密封；果醋的制作原理是利用醋酸菌在氧气充足的条件将乙醇先转化为乙醛，在进一步转化为醋酸。果醋发酵不要密封，需要往发酵液中持续地通入无菌空气（氧气），B错误；C.果醋发酵后期，醋酸菌数量不会减少，醋酸含量达到最大，C错误；D.泡菜腌制过程中加入一些已经腌制过的泡菜汁，可以增加乳酸菌的数量，从而加快乳酸发酵的速率，D正确。故选D。利用愈伤组织中的胚性细胞获得转基因植株的流程如图所示，其中①、②、③表示过程。请回答问题。12.③过程涉及到植物组织培养技术，下列有关叙述，正确的是（）A.③过程要经历细胞的脱分化和再分化B.①过程需在低渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体C.在植物组织培养过程中无需提供光照D.MS培养基中通常加入天然植物激素13.下列关于获得该转基因植株的整个流程的叙述错误的是（）A.①过程去除细胞壁可提高②过程中目的基因导入的成功率B.③过程体现了植物细胞的全能性C.图示途径和植物体细胞杂交都能克服远缘杂交的不亲和性D.原生质体的胞质分裂方式与动物细胞类似〖答案〗12.A13.D〖祥解〗植物体细胞杂交是指将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导原生质体融合的方法：物理法（离心、振动、电激等）和化学法（聚乙二醇等）。植物体细胞杂交的意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，扩大亲本范围，培育作物新品种。【12题详析】A、③是将原生质体培育为转基因植株的过程，所用技术是植物组织培养技术，该过程中需要经历脱分化和再分化，A正确；B、①过程需在等渗或较高渗溶液中用酶解法处理植物细胞获得原生质体，以避免原生质体吸水涨破，B错误；C、植物组织培养的再分化过程中需要提供光照，C错误；D、MS培养基中需用适宜配比的生长素和细胞分裂素溶液处理，但不一定是天然植物激素，可用其类似物，D错误。故选A。【13题详析】A、原生质体没有细胞壁，①过程去除细胞壁可提高②过程中目的基因导入的成功率，A正确；B、③是将原生质体培育为转基因植株的过程，所用技术是植物组织培养技术，体现了植物细胞的全能性，B正确；C、植物体细胞杂交是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术，图示途径和植物体细胞杂交都能克服远缘杂交的不亲和性，C正确；D、融合后的原生质体再生出细胞壁后才能进行分裂，细胞分裂时会形成细胞板，进而形成细胞壁，与动物细胞向内凹陷的分裂不同，D错误。故选D。14.限制性内切核酸酶可以在特异的位点将DNA分子剪切开。如图为不同种限制酶识别的序列，箭头所指的是酶切位点，下列叙述错误的是（）A.能被BamHI识别的序列也一定能被Sau3AI识别B.一个DNA分子被EcoRI切成两个片段时会发生8个氢键的断裂C.质粒作为基因工程的常用载体，通常会有多种限制性内切核酸酶切割位点D.用BamHI切割的目的基因和用Sau3AI切割的质粒无法连接〖答案〗D〖祥解〗限制酶识别DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的部位将两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒。经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。【详析】A、能被BamHI识别的序列中包含了被Sau3AI识别的序列，A正确；B、一个DNA分子被EcoRI切成两个片段时，四个AT碱基对间的氢键断裂，每个AT碱基对有2个氢键，一共会发生8个氢键的断裂，B正确；C、质粒作为基因工程的常用载体，通常会有多种限制性内切核酸酶切割位点，以便于把目的基因插入，C正确；D、用BamHI切割的目的基因和用Sau3AI切割的质粒，其黏性末端是相同的，可以连接，D错误。故选D。15.在进行微生物数量测定时，下列情况会造成结果偏多的是（）A.利用显微镜计数法计数时，滴加菌液时产生了气泡B.利用显微镜计数法计数时，滴加菌液后再盖盖玻片C.使用稀释涂布平板法计数时，涂布器经火焰灼烧后直接进行涂布D.使用稀释涂布平板法计数时，平板上有不少菌落是两个细菌连在一起形成的〖答案〗B〖祥解〗对微生物数量进行测定，可以采用稀释涂布平板法和利用显微镜在血细胞计数板上直接计数。稀释涂布平板法是将样品的稀释度足够高，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌；利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目，所以一般用于单细胞微生物数量的测定，由于血细胞计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的，所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。【详析】A、利用显微镜计数法计数时，滴加菌液时产生了气泡，导致实际所取菌液体积偏小，造成结果偏小，A错误；B、利用显微镜计数法计数时，应先盖盖玻片，滴加菌液，如果反之，则盖玻片可能由于已加入的液滴的表面张力作用使其未能严密的盖到计数板表面上，会使计数室内的体积增大，从而使计数结果偏高，B正确；C、使用稀释涂布平板法计数时，涂布器经火焰灼烧后直接进行涂布会烫死一部分细菌，导致结果偏小，C错误；D、平板上有不少菌落是两个细菌长成的菌落连在一起形成按一个菌落计数，会使数值偏小，D错误。故选B。16.胚胎工程中各种操作技术如图所示，下列分析正确的是（）A.d可直接移植给受体，形成d的关键是要对a均等分割B.从良种公牛体内获得的精子可以直接与卵细胞结合受精C.早期囊胚a、b、c基因型相同，但发育得到的个体表型不一定相同D.代孕母牛应用孕激素提前做好同期发情处理，避免移植胚胎发生免疫排斥〖答案〗A〖祥解〗胚胎移植基本程序：（1）供、受体的选择和处理（使用激素进行同期发情处理、（促性腺激素）超数排卵处理）。（2）配种或人工受精。（3）胚胎收集（冲卵（早期胚胎））、检查（胚胎发育到桑椹胚或囊胚）、培养或保存（－196℃的液氮）。（4）胚胎移植：手术法（引出子宫和卵巢将其注入）；非手术法（用移植管将其送入子宫）。（5）移植后的检查（是否妊娠）等。【详析】A、d是分割后的囊胚，可直接移植给受体，形成d的关键是要对a的内细胞团均等分割，A正确；B、从良种公牛体内获得的精子需要精子获能处理后，才可以与卵细胞结合受精，B错误；C、早期囊胚a、b、c是不同精子和不同卵细胞受精作用形成的，基因型不同，C错误；D、代孕母牛的子宫对外来胚胎几乎不发生免疫排斥，应用孕激素提前做好同期发情处理，使供、受体的生理状态相同，以保证移植的胚胎能够继续正常发育，D错误。故选A。17.已知一双链DNA分子，用限制性核酸内切酶Ⅰ切割得到长度为120kb（kb：千碱基对）片段；用限制性核酸内切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段；同时用限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb3个片段。据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况为（）A. B.C. D.〖答案〗D〖祥解〗根据题意，该双链DNA分子，用限制酶Ⅰ切割得到长度为120kb片段；用限制酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段，则说明该DNA分子为环状DNA分子，据此分析。【详析】据分析可知，该DNA分子为环状DNA，用限制酶Ⅰ切割得到长度为120kb片段，用限制酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段，则说明该DNA上限制酶Ⅰ有1个酶切位点，限制酶Ⅱ有两个酶切位点；同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb共3个片段，则说明限制酶Ⅰ的酶切位点位于限制酶Ⅱ切割后的40kb片段中，D正确，ABC错误。故选D。【『点石成金』】18.野生型大肠杆菌菌株能在未添加某种维生素的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种维生素的完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是（）A.图中①②④为基本培养基，③为完全培养基B.紫外线的目的是提高突变率，增加突变株的数量C.B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面D.经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养〖答案〗A〖祥解〗分析题图可知：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中，分别是基本培养基、完全培养基；在基本培养基中，某氨基酸营养缺陷型突变株不能生长，而在完全培养基中能够生长，据此可以选择出氨基酸营养缺陷型突变株。【详析】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，根据题干信息和图形分析，图中①②④为完全培养基，③为基本培养基，A错误；B、紫外线照射的目的诱导野生大肠杆菌发生基因突变，通过紫外线照射处理可提高突变频率，从而增加突变株的数量，B正确；C、B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C正确；D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D正确。故选A。19.葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，我国科学家运用蛋白质工程把其第138位甘氨酸（Gly）替换为脯氨酸（Pro），由于脯氨酸侧链的吡咯环填充了第138位氨基酸附近的空洞，使酶的热稳定性明显提高。下列叙述正确的是（）A.改造后的葡萄糖异构酶是自然界已存在的蛋白质B.蛋白质工程和基因工程的根本区别是操作对象的差异C.获得改造葡萄糖异构酶的过程不需要基因工程参与D.根据蛋白质的氨基酸序列推测出的mRNA的碱基序列不是唯一的〖答案〗D〖祥解〗1、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）。2、蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径。【详析】A、葡萄糖异构酶的改造过程属于蛋白质工程，蛋白质工程的实质是定向改造或生产人类所需蛋白质，故蛋白质工程可以获得满足人类生产和生活需求的蛋白质，改造后的葡萄糖异构酶不是自然界已存在的蛋白质，A错误；B、蛋白质工程和基因工程都要对基因进行操作，其操作对象相同，B错误；C、蛋白质工程要通过基因工程实施，需要限制酶、DNA连接酶和运载体作为工具，C错误；D、一种氨基酸可能对应多种密码子，所以根据蛋白质的氨基酸序列推测出的mRNA的碱基序列不是唯一的，D正确。故选D。20.花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图，据图分析下列叙述错误的是（）A.原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，其作用是保持原生质体的完整性B.显微镜观察融合的活细胞中有供体的叶绿体存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志C.原生质体经过细胞壁再生，进而脱分化和再分化形成愈伤组织D.对杂种植株进行黑腐病菌接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株〖答案〗C〖祥解〗分析题图可知，过程①表示原生质体的制备，用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞的细胞壁；过程②表示诱导原生质体融合，体现了细胞膜的流动性。【详析】A、原生质体培养液中加入适宜浓度的甘露醇用于维持渗透压，有利于保持原生质体完整，A正确；B、观察融合的活细胞中有无叶绿体的存在，可以作为初步筛选杂种细胞的标志，B正确；C、原生质体再生出细胞壁后，经过脱分化形成愈伤组织，C错误；D、对杂种植株接种黑腐病菌，能正常生长的即为具有高抗性的杂种植株，D正确。故选C。【『点石成金』】21.下图表示三亲绵羊的培养过程，下列相关说法错误的是（）A.三亲绵羊细胞中的染色体只来自绵羊甲和绵羊丙B.可用紫外线短时间照射的方法对绵羊乙的卵母细胞去核C.图示方法可避免携带有线粒体致病基因的绵羊甲产下患该病的子代D.受精卵发育成原肠胚再通过胚胎移植的方式在绵羊甲子宫内发育成幼体〖答案〗D〖祥解〗三亲绵羊的染色体来自绵羊甲和绵羊丙提供的细胞核，细胞质基因来自绵羊乙。【详析】A、三亲绵羊的染色体来自绵羊甲和绵羊丙提供的细胞核，A正确；B、去除细胞核可用梯度离心法、紫外线短时间照射法和显微操作法，可用紫外线短时间照射的方法对乙的卵母细胞去核，B正确；C、根据图示可知卵母细胞的细胞质来自于绵羊乙，可避免携带有线粒体致病基因的绵羊甲产下患该病的子代，C正确；D、胚胎移植一般选择桑葚胚或囊胚期的胚胎，D错误。故选D。22.金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，通过下图所示的方法培育出了抗枯萎病的新品种，①—⑤分别生物或生物的部分结构代表。下列相关叙述正确的是（）A.②需插入①的T-DNA片段中，便于整合到金茶花细胞染色体DNA上B.⑤从培养室取出后直接用流水冲洗掉幼苗根部培养基，再移栽到育苗盘中C.抗病金茶花植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织的基因型一定相同D.在⑤幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着成功培育新品种〖答案〗A〖祥解〗根据题意和图示分析可知：图示表示抗枯萎病新品种的培育过程，其中①为质粒，②为目的基因，③为基因表达载体，④为含有目的基因的受体细胞，⑤为抗枯萎病新品种的幼苗。【详析】A、①为质粒，②为目的基因，目的基因需插入质粒的T-DNA片段中，便于整合到金茶花细胞染色体DNA上，A正确；B、⑤从培养室取出后，先将培养瓶的瓶口打开，放置一段时间，以提高试管苗对外部环境的适应能力，然后用流水冲洗掉幼苗根部培养基，再移栽到育苗盘中，B错误；C、抗病金茶花植株不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织的基因型不一定相同，如花粉细胞培养形成的愈伤组织的基因只有体细胞的一半，C错误；D、在⑤幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着目的基因已经成功导入受体细胞，但这不能说明已经成功培育抗枯萎病新品种，还需要检测目的基因是否成功表达，D错误。故选A。23.目前临床上诊断新冠感染疑似患者的常用方法是先进行咽拭子取样，再用实时荧光RT-PCR检测。如图为RT-PCR技术的原理，数字①-③为相关步骤。在PCR过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和淬灭基团（抑制荧光发出），当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光。下列叙述错误的是（）A.若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者可能感染了病毒B.最终监测的荧光强度与起始时反应管内样本DNA的含量呈正相关C.荧光基因R连接在DNA探针的3’端，探针可以由新冠病毒的RNA特定序列逆转录获得D.该反应体系中虽未加入ATP，但新链的合成还是需要消耗能量的〖答案〗B〖祥解〗分析题图：过程①为逆转录，以病毒的RNA为模板合成cDNA；过程②为引物与模板链的结合；过程③为合成子链（子链的延伸）。【详析】A、结合题干“当酶催化子链延伸至探针处时会水解探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而发出荧光”可知，若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者可能感染了病毒，A正确；B、结合题图可知，经咽拭子采样含有的是病毒的RNA，故最终监测的荧光强度与起始时反应管内样本RNA的含量呈正相关，B错误；C、耐高温的DNA聚合酶从引物的3，端进行子链的延伸，结合题图中子链延伸的方向，以及引物的结合情况可知，荧光基因R连接在DNA探针的3’端，探针可以由新冠病毒的RNA特定序列逆转录获得，C正确；D、该反应体系中虽未加入ATP（加入的是dNTP，在水解的过程中既能提供能量又能提供原料），但新链的合成还是需要消耗能量的，D正确。故选B。24.紫杉醇是红豆杉属植物产生的一种次生代谢产物，具有抑制纺锤丝解聚，阻止染色体运动的作用，可用于某些癌症的治疗。某研究小组利用含3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷（3H-TdR）细胞培养液、紫杉醇对乳腺癌细胞（核DNA为2N）进行了培养，如下图所示。下列叙述错误的是（）A.紫杉醇对正常的细胞不会产生毒副作用B.甲、乙两瓶中，核DNA含量为4N的细胞占比较高的是乙瓶C.甲瓶中大量的3H-TdR会在S期进入细胞核D.培养所用的卡氏瓶有利于乳腺癌细胞的贴壁生长〖答案〗A〖祥解〗有丝分裂间期分为G1（DNA合成前期）、S（DNA合成期）、G2（DNA合成后期）三个阶段，其中G1期与G2期进行RNA（即核糖核酸）的复制与有关蛋白质的合成，S期进行DNA的复制。动物细胞培养条件：无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染，此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害；营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)；温度和pH：（36.5±0.5℃，7.2～7.4）；气体环境：（95%的空气+5%CO₂的混合气体），其中5%CO₂气体是为保持培养液的pH稳定。【详析】A、对于正常细胞而言，分裂增殖是正常现象之一，根据题干“紫杉醇是红豆杉属植物产生的一种次生代谢产物，具有抑制纺锤丝解聚，阻止染色体运动的作用”可知：若用紫杉醇处理正常的细胞，会影响正常细胞增殖过程中染色体的运动从而影响细胞的正常分裂，具有毒副作用，A错误；B、甲、乙的区别在于乙瓶中加了紫杉醇处理，根据题干“紫杉醇是红豆杉属植物产生的一种次生代谢产物，具有抑制纺锤丝解聚，阻止染色体运动的作用”可知紫杉醇可以抑制进行有丝分裂的细胞正常分裂成两个子细胞，由于核DNA的复制是正常的，经过间期复制核DNA数量为4N，甲瓶中细胞分裂正常，乙瓶中细胞核DNA复制后无法分配到子细胞中去，仍留在原来的细胞中，导致乙瓶中核DNA为4N含量的细胞占比高于乙瓶，B正确；C、3H-TdR作为DNA的合成原料之一，会在分裂间期的S（DNA合成期）进入细胞核，以供核DNA的复制使用，C正确；D、培养所用的卡氏瓶有利于乳腺癌细胞的贴壁生长，要求瓶壁是光滑无毒的，便于细胞贴附，D正确。故选A。25.某单基因遗传病患者的家系如图1，研究人员采集了部分家系成员的DNA，对于该病相关基因的特异性片段（长度400bp，bp代表碱基对）进行PCR扩增，然后用限制性内切核酸酶HhaⅠ对其切割，进行琼脂糖凝胶电泳分析，结果如图2．下列分析错误的是（）A.II-3的致病基因来自I-3B.该致病基因片段上没有HhaⅠ酶切点C.Ⅲ-2成年后进行产前诊断时可参考胎儿的性别判断其患病概率D.Ⅱ-2与Ⅱ-3再生育两个孩子（非同卵双胞胎），其中一个正常的概率是3/8〖答案〗C〖祥解〗根据家系图可知II-2、II-3表现型正常，但是他们的子女中有患者，由此判定该病为隐性遗传病，Ⅲ-1是患者，其父亲II-2表现型正常，由此可知该病为常染色体隐性遗传病，通过凝胶电泳图可知，PCR扩增之后与该病相关基因的特异性片段的长度是400bp，而该病相关基因的特异性片段的长度是400bp，显然隐性致病基因没有被切割，而显性基因被切割成两个200bp的片段，由此可知，I-1是显性纯合，I-2与I-3是显性杂合，I-4是显性纯合，II-1是显性纯合，II-2与II-3是显性杂合，Ⅲ-3是隐性纯合。【详析】A、根据家系图可知II-2、II-3表现型正常，但是他们的子女中有患者，由此判定该病为隐性遗传病，Ⅲ-1是患者，其父亲II-2表现型正常，由此可知该病为常染色体隐性遗传病，通过凝胶电泳图可知，PCR扩增之后与该病相关基因的特异性片段的长度是400bp，而该病相关基因的特异性片段的长度是400bp，显然隐性致病基因没有被切割，而显性基因被切割成两个200bp的片段，由此可知，I-1是显性纯合，I-2与I-3是显性杂合，I-4是显性纯合，II-1是显性纯合，II-2与II-3是显性杂合，Ⅲ-3是隐性纯合，若用A、a基因表示该遗传病，I-3基因型为Aa，I-4基因型为AA，则II-3的致病基因来自I-3，A正确；B、因为致病基因PCR扩增后的长度没有变，说明限制性核酸内切酶HhaⅠ对其没有切割位点，B正确；C、结合A选项的分析可知，该病的致病基因在常染色体上，患者出现的概率在男女中是相等的，因此胎儿性别不会影响患病概率，C错误；D、结合A选项的分析可知，Ⅱ-2与Ⅱ-3的基因型都是Aa，他们再生育两个孩子，题干〖提示〗非同卵双胞胎，这两个孩子都正常的概率是3/4×3/4=9/16，都患病的概率是1/4×1/4=1/16，因此这两个孩子有一个正常的概率是1-9/16-1/16=3/8，D正确。故选C。二、非选择题26.滩涂野耐盐大豆细胞具有耐盐特性，普通高产大豆植物具有高产特性。下图是科学家利用这两种植物细胞进行体细胞杂交培育“耐盐-高产大豆”新品种的过程，数字①-⑤为相关过程。请回答下列问题：（1）愈伤组织是未分化的细胞，具有_____等特点（答出两点）。（2）图中过程①使用了_____酶和_____酶去除细胞壁，获得植物原生质体。若过程②形成的细胞均为2个细胞融合而来，则经过该过程后，产生的融合细胞最多有_____种。（3）培养过程运用了多种植物细胞工程技术，其中过程②③涉及_____技术，过程④⑤涉及_____技术。图中试管苗的形成是愈伤组织经过过程⑤_____实现的。（4）科学家在甲瓶的培养基中加入了0．6%的NaCl，发现仅有部分细胞转变为愈伤组织，未转变为愈伤组织的细胞是_____（填“滩涂野耐盐大豆细胞”“普通高产大豆细胞”或“杂种细胞”）。（5）除了上述办法，还可以采用其他思路获得“耐盐-高产大豆”新品种，请简要列举一种思路_____。〖答案〗（1）无组织结构##松散##薄壁##分裂快（2）①.纤维素②.果胶③.3（3）①.原生质体融合##细胞融合②.植物组织培养③.再分化（4）普通高产大豆细胞（5）将耐盐基因导入普通高产大豆植物体内进行表达##将高产相关基因导入耐盐大豆植物体内表达〖祥解〗题图分析：①表示去壁过程，常用酶解法；②表示诱导原生质体融合，③表示杂种细胞再生出细胞壁，④表示脱分化过程，⑤表示再分化过程。【小问1详析】愈伤组织是未分化的细胞，表现为分裂能力强，为高度液泡化的、无定形状态的薄壁细胞，也可描述为无组织结构/松散/薄壁/分裂快。【小问2详析】植物细胞壁的成分主要为纤维素和果胶，所以用纤维素酶和果胶酶去除植物的细胞壁，获得植物的原生质体。植物原生质体间的融合，需要人工诱导，人工诱导的方法分为物理法和化学法，化学法一般用聚乙二醇作为诱导剂来诱导细胞融合；若过程②形成的细胞均为2个细胞融合而来，则两种细胞的原生质体融合时有可能是两个滩涂野耐盐大豆细胞相互融合，也可能是两个普通高产大豆相互融合，滩涂野耐盐大豆细胞和普通高产大豆细胞相互融合，所以有3种情况。【小问3详析】培养过程运用了多种植物细胞工程技术，其中过程②③涉及原生质体融合/细胞融合技术，该过程依赖膜的流动性实现，过程④⑤分别为脱分化和再分化过程，涉及植物组织培养技术，该技术的原理是植物细胞的全能性。图中试管苗的形成是愈伤组织经过过程⑤再分化实现，其本质是基因的选择性表达。【小问4详析】题中显示，科学家在甲瓶的培养基中加入了0．6%的NaCl，发现只有具有耐盐特性的细胞才能生存，而普通高产大豆细胞不具有耐盐特性，不能形成愈伤组织，即未转变为愈伤组织的细胞是普通高产大豆细胞。【小问5详析】题中显示，两种大豆具有远缘杂交的障碍，故不能采用杂交的方案来进行，故可采用基因工程育种的方式或多倍体育种的方式进行，即提取普通高产大豆的高产基因，转入滩涂野耐盐大豆中培育“耐盐—高产”大豆品种，为转基因新品种，或提取滩涂野耐盐大豆的耐盐基因，转入普通高产大豆；诱导滩涂野耐盐大豆高产大豆杂交，而后对杂种植株进行染色体数目加倍，形成多倍体。而后由不育变为可育种，这是多倍体育种方式。27.新型冠状病毒抗原检测试剂盒是相对比较简便、快速的检测方法，抗原检测试剂盒的生产依赖于新型冠状病毒单克隆抗体的制备。制取新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体部分过程如下图所示，请回答下列问题：（1）图中操作a是指对小鼠注射_____，之后一般从该小鼠的_____中提取淋巴细胞，并在体外让淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。与诱导植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合的特有方法是_____。（2）诱导融合后至少要经过两次筛选，图中的筛选1是指利用HAT选择培养基将具有_____特点的_____细胞筛选出来；筛选2需要将细胞接种到多孔培养板上，每个孔接种_____个细胞，取上清液作为待测样本进行抗体阳性检测，检测原理如下图所示：加入酶标抗体一段时间后，需要将未与_____结合的酶标抗体洗脱。据图可知在抗体检测中，杂交瘤细胞呈阳性的判断依据为_____。（3）单克隆抗体的优点是_____（答出两点）。利用筛选出的符合要求的细胞生产单克隆抗体，既可以将细胞注入小鼠腹腔内进行生产，也可以在体外生产，两种方式相比，后者的优点是_____。〖答案〗（1）①.新冠病毒的S蛋白/抗原蛋白②.脾脏③.灭活的病毒（2）①.既能产生抗体又能无限增殖②.杂交瘤③.1④.抗S蛋白抗体⑤.酶促反应底物由无色变为蓝色（3）①.纯度高、灵敏度高、特异性强、可大量制备等②.可大量生产单克隆抗体，且纯度高，容易提取〖祥解〗单克隆抗体：由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体。具有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点。单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。【小问1详析】图中a是注射特定抗原病毒S蛋白，小鼠产生分泌抗S蛋白的B细胞，该细胞主要分布在淋巴器官如脾脏中。诱导动物细胞融合特有的方法是用灭活的病毒诱导。【小问2详析】筛选1是用选择培养基选择出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞是骨髓瘤细胞和B细胞融合形成的，能分泌抗体也能无限增殖。筛选2是将产生抗S蛋白的杂交瘤细胞筛选出来，需要先进行克隆化培养，在每个孔接种1个细胞，让其增殖，然后进行抗体阳性检测。检测图的原理是在测定时，受检标本（测定其中的抗体）与固相载体表面的抗原起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据蓝色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。固相抗原上有S蛋白，待测样本与S蛋白结合，进行洗脱使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开，再用酶标抗体结合到待测样本上，需要将未与待测样本即抗S蛋白抗体结合的酶标抗体洗脱，以免对下一步骤中的显色反应产生干扰。酶标抗体能催化反应底物由无色变为蓝色，若酶促反应底物由无色变为蓝色，则说明待测样本是抗S蛋白抗体。【小问3详析】单克隆抗体是由产生特异性抗体的杂交瘤细胞培养而来的，其优点是纯度高、灵敏度高、特异性强、可大量制备等。既可以将细胞注入小鼠腹腔内进行生产，也可以在体外生产，两种方式相比，前者需从腹水中提取抗体，后者从细胞培养液中提取抗体，后者的优点是可大量生产单克隆抗体，且纯度高，容易提取。28.19世纪末，巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物。20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平。图1是通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程，数字①-⑦为相关步骤。在图1步骤①和③中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置如图2。启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。LacZ基因控制合成某种酶，该酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（1）在图1步骤④中，使用的基因工程工具酶是_____，将一个乙肝表面抗原基因与一个质粒重组的过程中，游离的磷酸基团数目减少_____个。（2）根据图2，为了避免自身环化及便于筛选，切割质粒选用的限制酶是_____，获得乙肝表面抗原基因选用的限制酶是_____。（3）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将大肠杆菌接种到含_____的固体培养基上，挑选_____的菌落纯化培养。（4）若运用PCR技术检测乙肝表面抗原基因是否导入，需根据目的基因的序列设计_____，利用待检DNA为模板进行PCR。PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：_____→_____→延伸。若基因导入成功PCR过程中至少复制_____次可以得到两条链等长的目的基因。（5）利用基因工程生产乙肝疫苗比灭活的乙肝病毒的疫苗安全性更_____，原因是_____。〖答案〗（1）①.DNA连接酶②.4（2）①.BamHⅠ和HindⅢ②.BclⅠ和HindⅢ（3）①.氨苄青霉素和无色染料X-gal②.未被染上蓝色的菌落/白色菌落（4）①.引物②.变性③.退火##复性④.3##三（5）①.高②.因为基因工程生产的乙肝疫苗成分中只含病毒蛋白，不含病毒核酸，不会出现病毒侵染的情况〖祥解〗分析图1：过程①为目的基因的获取；过程②为提取质粒；过程③为用限制酶切割质粒；过程④为基因表达载体的构建中的目的基因与质粒的连接；过程⑤为将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）；过程⑥为大肠杆菌的增殖；过程⑦为目的基因的表达。【小问1详析】图1中过程④为基因表达载体的构建中的目的基因与质粒的连接，使用的基因工程工具酶是DNA连接酶，催化DNA分子片段中磷酸二酯键的形成；一个乙肝表面抗原基因（含有2个游离的磷酸基团）与一个质粒（被切开的质粒含有2个游离的磷酸基团）重组的过程中（图1的步骤④），游离的磷酸基团数目减少4个。【小问2详析】目的基因中含有限制酶EcoRⅠ的切割位点，因此不能用EcoRⅠ切割外源DNA分子，为了避免自身环化及便于筛选，切割乙肝表面抗原基因选用的限制酶是BclⅠ和HindⅢ。用限制酶BclⅠ切割质粒会破坏启动子，因此切割质粒选用的限制酶是BamHⅠ和HindⅢ（BclⅠ和BamHⅠ切割产生的黏性末端相同）。【小问3详析】构建基因表达载体时使用了限制酶HindⅢ，导致lacZ基因被破坏（导入重组质粒的大肠杆菌不能合成某种酶，不能使无色染