JJF 2109-2024 标准物质定值技术要求 有机同位素稀释质谱法

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载中华人民共和国国家计量技术规范学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF21092024标准物质定值技术要求有机同位素稀释质谱法r s i i

iTechnir s i i

ic liOrganiIsotopeDiutonc li-

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-20240207发布-

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布学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载标准物质定值技术要求有机同位素稀释质谱法r iTechnialRequiementsRr itito lCharactito l

JJF21092024归

口

单

位:全国标准物质计量技术委员会起

草

单

位:中国计量科学研究院中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所本规范委托全国标准物质计量技术委员会负责解释学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载本规范起草人:张庆合

(中国计量科学研究院)李秀琴

(中国计量科学研究院)李晓敏

(中国计量科学研究院)周剑

(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所)学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载目 录引言

………………………

(Ⅲ)1

范围……………………

(1)2

规范性引用文件………………………

(1)3

术语和定义……………

(1)4

方法原理………………

(1)5

同位素标记物的选择…………………

(2)5.1

标记元素类型与位置………………

(2)5.2

标记原子数量………………………

(2)5.3

化学纯度和同位素分布……………

(2)5.4

质谱定量离子………………………

(2)6

同位素标记物的添加…………………

(2)6.1

添加量………………

(2)6.2

混匀平衡……………

(3)7

分离与检测……………

(3)7.1

联用仪器要求………………………

(3)7.2

分离要求……………

(3)7.3

检测要求……………

(3)8

校准方法………………

(3)8.1

校准曲线法…………

(3)8.2

括弧法

(双点校准法)……………

(4)8.3

单点校准法…………

(4)8.4

标准加入法…………

(5)9

方法确认与质量控制…………………

(5)9.1

方法确认……………

(5)9.2

空白测量……………

(6)9.3

基质效应……………

(6)9.4

方法可靠性评价……………………

(6)10

计量溯源性说明

……………………

(6)11

标准物质定值要求

…………………

(6)11.1

一家实验室定值

…………………

(6)11.2

其他定值模式

……………………

(6)12

不确定度评定及表述

………………

(7)Ⅰ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载11附录

A 基质效应评估方法

……………

(8)11附录B

不同校准方法测量结果的不确定度分量

……

(0)附录C 有机同位素稀释质谱法应用示例———

“猪肉粉中克伦特罗”

有证标准物质

(GBW10135)

的定值 …………………

(2)Ⅱ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载引 言同位素稀释质谱法被国

际物质的量咨询委员会

(CCQM)认定为潜在基准测量方法,适用于复杂基体中化学成分量的高准确度测量和标准物质定值。本规范规定了有机同位素稀释质谱法用于标准物质定值时,稳定同位素标记有机化合物的选择与添加、分离与检测、定量校准、方法确认与质量控制等方面的要求,用于规范有机同位素稀释质谱法在标准物质定值中的应用。本规范为首次发布。Ⅲ学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载标准物质定值技术要求有机同位素稀释质谱法1

范围本规范规定了有机同位素稀释质谱法作为标准物质定值方法的技术要求,适用于指导基体标准物质的定值,也可以为其他标准物质的定值提供参考。2

规范性引用文件本规范引用了下列文件:JJF1001

通用计量术语及定义JJF1005

标准物质通用术语和定义JJF1059.1

测量不确定度评定与表示JJF1343

标准物质定值的通用原则及统计学原理JJF1507

标准物质的选择与应用JJF1855

纯度标准物质定值计量技术规范 有机物纯度标准物质GB/T32465

化学分析方法验证确认和内部质量控制要求GB/T35655

化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南 色谱分析凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本

(包括所有的修改单)

适用于本规范。3

术语和定义s a

lJJF1001、JJF1005界定的及以下术语和定义适用于s a

l3.1

同位素标记有机化合物

iotopelbeedorganiccompound分子中一种或几种原子被稳定同位素取代的有机化合物。D注:标记的同位素原子通常为2H

(

)、13C、15N、17O、18O、33S、34S、37Cl、81Br等。Dc

s l

i3.2

有机同位素稀释质谱法

c

s l

i在样品中加入已知量的被测化

合

物

的

同

位

素

标

记

有

机

化

合

物,

混

合

均

匀

达

到

平

衡,用质谱测量样品溶液和校准溶液中被测化合物与同位素标记有机化合物的响应比值,由此计算被测化合物含量的方法。4

方法原理将已知量的同位素标记有机化合

物

(以

下

简

称

“同

位

素

标

记

物”)加

入

到

待

测

样

品中,充分混合平衡,经必要的前处理和色谱分离后,测量样品溶液中被测化合物和同位素标记物的质谱响应

(峰面积或峰高);

同

时

测

量

校

准

溶

液

中

被

测

化

合

物

和

同

位

素

标

记物的质谱响应,根据二者质谱响应比值、校准溶液中浓度比值和样品中所加入同位素标记物的质量,计算得到样品中被测化合物含量。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5

同位素标记物的选择5.1

标记元素类型与位置不同同位素元素标记的化合物性质可能存在差异,应尽可能选择与被测化合物的溶解、离解、衍生反应动力学等特性一致的标记化合物,应明确同位素标记物中标记元素的位置,以确保同位素标记物的稳定

性

(不

易

发

生

同

位

素

交

换

或

标

记

元

素

丢

失)。

必

要时,评估其与被测化合物的色谱保留、离子化效率、基质效应、提取与衍生效率等的差异。注:通常13C和15N标记物比较稳定,13C标记物的理化性质变化较小。当D和18O标记在较活泼化学性质的位置时,可能产生同位素交换或标记元素丢失

(如羰基附近的

D-H

交换,氨基酸羧基上的18O原子可能与水中

O原子发生交换)。5.2

标记原子数量通常选择标记原子数量≥3的同位素

标

记

物,

以

降

低

被

测

化

合

物

中13C或

D等

天

然同位素元素产生的

M+1、M+2等质谱峰信号重叠影响线性响应。标记原子数量较少时,需要对线性响应进行评估,必要时采用非线性模型校准,或采用高分辨质谱测量。标记原子数量较多时,可能会引起同位素

标

记

物

与

被

测

化

合

物

性

质

的

明

显

差

异

(D标记时更加明显)。必要时,评估其与被测化合物的色谱保留、离子化效率、基质效应、提取与衍生效率的差异。5.3

化学纯度和同位素分布应选择高化学纯度或杂质不干扰测量的同位素标记物。必要时,需评估同位素标记物的同位素分布,并根据评估结果校正标记物添加量。当同位素标记物中含有被测

化

合

物

时,

需

评

估

对

测

量

结

果

的

影

响,

确

认

其

适

用

性,并进行校正和不确定度评估。9 90示例:当采用D-克伦特罗同

位素标记物时,测试目标同位素标记物

(D-克伦9 90罗)

分子的丰度,以校正

标

记

物

的

添

加

量;

测

试

非

标

记

克

伦

特

罗

(D-克

伦特罗)分子的丰度,以评估其对测量结果的影响。5.4

质谱定量离子通过质谱裂解过程分析,选择合适的被测化合物与同位素标记物的定性、定量离子或离子对。zzz示例:克伦特罗D9主要特征碎

片

离子为m/

=204,

而克伦特罗

D6可能经过不zzz的裂解过程产生两个主要特征碎片离子m/

=203和m/

=204,因此选择克伦特

罗

D6作为标记物时,需考察并谨慎选择定量离子。6

同位素标记物的添加6.1

添加量应通过预实验评估样品中被测化合物的含量水平,以确定添加到样品中同位素标记物的量。通常,同位素标记物添加量与样品中被测化合物含量应接近,在被测化合物含2学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载量较低

(如接近定量限)

导致测量精密度低的情况下,可适当提高同位素标记物的添加量,以保证测量精密度达到预期水平。注:当样品中被测化合物含量较高,同位素标记物添加量与其差异较大时,应进行评估以确认相关方法指标满足预期要求。6.2

混匀平衡样品中添加同位素标记物后应充分混匀和平衡,尽可能使同位素标记物与被测化合物在样品中的存在状态一致,然后进入样品前处理程序。应考察同位素标记物添加和平衡方式等影响因素,如同位素标记物的溶剂、添加方式、平衡时间和平衡温度等,尽可

能

使

被

测

化

合

物

和

同

位

素

标

记

物

在

样

品

制

备、

提

取、净化、分离、离子化和检测过程中的状态保持一致。7

分离与检测7.1

联用仪器要求液相色谱、气相色谱、毛细管电泳等分离设备和单四级杆、三重四级杆、离子阱等质谱检测器的联用,均可用于有机同位素稀释质谱分析。7.2

分离要求对复杂基体中有机化合物分析时,基体中主要干扰成分应尽可能与目标化合物分离;被测化合物和同位素标记物宜具有相同或相近的保留时间,以便在尽可能相同的质谱条件下检测。注:液相色谱分离时,流动相组成可能会影响离子化效率;气相色谱分离时,柱流失、载气流速等会导致背景干扰;被测化合物和同位素标记物保留时间差距较大时,需评估对测量结果的影响。7.3

检测要求应根据被测化合物特性,选择测量灵敏度和特异性

(选择性)

满足要求的质谱仪类型,通过优化仪器参数满足被测化合物与同位素标记物测量的正确度和精密度要求。8

校准方法有机同位素稀释质谱分析的定量校准方法主要包括校准曲线法、括弧法

(双点校准法)、单点校准法和标准加入法等。8.1

校准曲线法校准曲线不少于5个浓度点

(不包含零点)

并大致等距离分布在测量范围内,浓度范围应覆盖样品中被测化合物含量范围。应检查仪器响应的漂移是否会引起测量偏差。配制同位素标记物浓度相同的系列被测化合物混合校准溶液,测量各含量水平下两种化合物的质谱响应值,根据被测化合物与同位素标记物的响应比值与浓度比值,绘制线性校准曲线,得到校准曲线的斜率k与

截

距a。

线

性

相

关

系

数

应

尽

可

能

接

近

1,

线

性测量不确定度应满足标准物质预期不确定度要求。根据样品中被测化合物和同位素标记物的质谱响应比值和样品中同位素标记物的添1加质量,按照公式

()

计算得到样品中被测化合物含量。13学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载Cx =1-Cx =2-A' s-a

k ×m' ()A' s———样学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载Cx =1-Cx =2-A' s-a

k ×m' ()A' s———样品中被测化合物和同位素标记物的响应比值;-A lc hc l+c ×m'

M s ()A' s———样品中被测化合物和同位素标记物的响应比值;A' l———低浓度校准溶液中被测化合物和同位素标记物的响应比值;A' h———高浓度校准溶液中被测化合物和同位素标记物的响应比值;

c h

———高浓度校准溶液中被测化合物和同位素标记物的浓度比值;

c l

———低浓度校准溶液中被测化合物和同位素标记物的浓度比值;Ass式中:Cx———样品中被测化合物含量,μg/kg;Assm'———样品中加入同位素标记物的质量,ng;sk

———校准曲线的斜率;a

———校准曲线的截距;Ms———样品质量,g。8.2

括弧法

(双点校准法)括弧法

(双点校准法)

是校准曲线法的一种简化模式,该方法可以将校准曲线非线性产生的误差最小化。初步评估样品中被测化合物含量后,制备两个浓度水平的校准溶液,通常校准溶液中被测化合物浓度

分

别

为

样

品

待

测

液

中

被

测

化

合

物

浓

度

的1.05倍

和0.95倍,校准溶液和样品待

测液中同位素标记物的浓度尽可能一致,

被测化合物含量2通过线性内插法按照公式

()

计算得到样品中被测化合物的含量。2As ' l's lA'

A'

' l's l

l'Ah Al

l'h l A' A'h l式中:Cx———样品中被测化合物含量,μg/kg;AsAlAhchl'lc'sm'———样品中加入同位素标记物的质量,ng;sMs———样品质量,g。8.3

单点校准法a单点校准法也是校准曲线法的一种简化模

式,

当

校

准

曲

线

截

距

(

)接

近

零

时,

可a以采用单点校准法。如果方法存在系

统

误

差

(截

距

明

显

偏

离

原

点),

应

采

用

校

准

曲

线

法或括弧法进行校准。4ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｏｍ标准下载×Cx =34A'c' ×m'

A' ×M s (ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ学兔兔ｗｏｍ标准下载×Cx =34A'c' ×m'

A' ×M s ()A' s———样品中被测化合物和同位素标记物的响应比值;

A' ———校准溶液中被测化合物和同位素标记物的响应比值;

c' ———校准溶液中被测化合物和同位素标记物浓度的比值;

Cx =a

k ×m'

M s ()3配制混合校准溶液时,校准溶液的浓度应与被测样品溶液浓度接近,且被测化合物3和同位素标记物的浓度比值接近1。根据质谱响

应

比

值

与

浓

度

比

值,

添

加

同

位

素

标

记

物质量和样品量,按照公式

()

计算得到样品中被测化合物的含量。As

cssA式中:Cx———样品中被测化合物含量,μg/kg;AsAcsm'———样品中加入同位素标记物的质量,ng;sMs———样品质量,g。8.4

标准加入法当不能获得与样品接近的空白基质样品或同位素标记物与被测化合物基质效应差异较大时,可采用标准加入法消除或校正基质效应的影响。4称取不少于5份相同质量待测样品,均添加同位素标记物使之含量与被测化合物接4近,除一份样品外其他样品中再添加尽可能等距浓度梯度分布的系列被测化合物,充分混匀、平衡和前处理后,测量样品中被测化合物和同位素标记物质谱响应。以各样品中被测化合物与同位素标记物的响应比值为纵坐标,被测化合物添加量与同位素标记物添加量比值为横坐标,绘制校

准

曲

线,

得

到

斜

率k

与

截

距a,

按照公式

()计算样品中被测化合物的含量。s式中:Cx———样品中被测化合物含量,μg/kg;k

———校准曲线的斜率;a

———校准曲线的截距;sm'———样品中加入同位素标记物的质量,ng;sMs———样品质量,g。9

方法确认与质量控制9.1

方法确认应根据标准物质量值与不确定度、用途等预期要求,确定同位素稀释质谱法的正确度、精密度以及适用性、选择性、线性范围、稳健度、检出限和定量限等参数指标,并5学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载进行确认。可参考

GB/T32465、GB/T35655等相关标准。9.2

空白测量对试剂、实验过

程、

空白样品进行检测,

确定被测化合物和同位素标记物背景干扰,并进行必要的修正。9.3

基质效应应充分考虑和评估被测化合物和同位素标记物的基质效应,并通过优化前处理、色谱质谱条件和定量校准方法等方式降低或校正基质效应。不同基体样品、不同来源的同一类基体样品均需要进行基质效应评估。多目标同时测量时,需要评估各被测化合物的基质效应。必要时采用基质匹配校准溶液定量校准,无法获得匹配的空白基质时,应采用标准加入法校准。9.4

方法可靠性评价应采用与被测样品基质类似的基体标准物质,或通过相关计量比对等方式评价方法的可靠性。10

计量溯源性说明应根据方法原理和测量模型,

将

测

量

结

果

溯

源

至SI单

位

或

具

有计量溯源性的测量标准及标准物质。有机同位素稀释

质

谱

法

计

量

溯

源

性

关

键

点

在

于:

校

准

标

准

的

溯

源

性;校准溶液配制过程的溯源性;称量、溶液移取、检测等过程使用仪器设备的溯源性。应按照JJF1507选用具有溯源性的有证标准物质作为校准标准。

无相应有证标准物质时,应按照JJF1343和JJF1855等确

认

校

准

标

准

的

量

值

和

不

确

定

度。

校

准

溶

液

制备以及色谱质谱测量过程所用的设备,应经过计量检定或校准。11

标准物质定值要求11.1

一家实验室定值由一家实验室采用同位素稀释质谱法对标准物质进行定值时,应有证据证明该方法具有最高计量学品质

(即溯

源

性

明

确、

各

输

出

量

均

可

由SI单

位

表

示、

无需引入经验校正因子、被测量和包含在测量等式中的输入量间没有相关性影响、相对于其预期用途特性值不确定度水平应足够小等);

在

有

条

件

的

情

况

下,

应

参

加

国

际

计

量

比

对,

以

取

得

方法的国际等效,证明方法的有效性并满足预期要求。标准物质定值应由两个或两个以上有能力执行方法操作程序、保证测量结果有效的分析者独立进行测量,并尽量使用不同的仪器设备,每个分析者提供至少6个独立数据。除了采用同位素稀释质谱法测量,可采用另一独立测量程序开展测量确认,证明测量无过失误差。由于同位素稀释质谱

法

得

到

的

测

量

结

果

通

常

具

有

更

好

的

不

确

定

度

水

平,无需合并验证测量方法得到的测量结果。11.2

其他定值模式当单一实验室或多家有能力的实验室采用两种或两种以上

(包含同位素稀释质谱法)

可证明准确度的方法定值,或者多家实验室采用同位素稀释质谱法合作定值时,按6ｏｍ标准下学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ载n

()JJF2109—2024ｏｍ标准下学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ载n

()照JJF1343要求执行。12

不确定度评定及表述同位素稀释质谱法的

定值结果应参考

JJF1059.1进行不确定度评定,

测量不确定度一般由若干分量组成。u 5n其中一些分量可根据一系列测量值的统计分布进行评定,可用标准偏差表征u 5n标准不确

定度

(1,rel)通常为测量结果平均值的相对标准偏差

(RSD)除以测量次数()

的平方根,计算见公式

()。u1,rel=RSD 5uu另一些分量以非统计分析的

方

法

评

定,

包

括

评

定

标

准

物

质

纯

度

或

浓

度、

样

品

制

备、uu校准溶液制备等因素或者过程引入的不确定度。标准曲线法、括弧法、单点法和标准加入法等定量校准方法的不确定度分量

(2,rel)

来源参照附录B。

结

果

的

相

对

合

成

标

准

不确定度

(rel)

如下:相对扩展不确定度:

6 7kurel=

u21,rel+u22,rel

6 7kUrel=k×urel(=2)

()7ｗｗ．ｂｚｆ兔ｗｘｗ．ｃｏｍ标准下学兔载

Kx -s×100% ｗｗ．ｂｚｆ兔ｗｘｗ．ｃｏｍ标准下学兔载

Kx -s×100% (A.1)

Ki -s×100% (A.2)

Ax -s×100% (A.3)

Ai -s×100% (A.4)附录A基质效应评估方法建立同位素稀释质谱定值方法时,应评估被测化合物和同位素标记物间是否存在基质效应差异及其差异程度。必要时需采取校正措施,评定其引入的不确定度。基于标准物质定值校准模型,基质效应可以采用校准曲线斜率、单点质谱响应等模式评估。a)

校准曲线斜率模式:取空白样品或待测样品经前处理后的待测液和空白溶剂,分别配制被测化合物和同位素标记物的系列基质匹配校准溶液和溶剂校准溶液,并分别绘制校准曲线

(或者标准加入法校准曲线),通过与相应校准溶液标准曲线斜率的比值,评估基质效应。见公式

(A.1)

和公式

(A.2)。iMEx=Kx-miME

=Ki-m式中:iMEx

———被测化合物的基质效应系数;iME ———同位素标记物的基质效应系数;Kx-m———基质匹配校准溶液中被测化合物校准曲线斜率;Kx-s

———校准溶液中被测化合物校准曲线斜率;Ki-m

———基质匹配校准溶液中同位素标记物校准曲线斜率;Ki-s

———校准溶液中同位素标记物校准曲线斜率。b)

单点质谱响应模式:采用单点法

定

量

校

准

模

式

时,

可

以

采

用

单

点

质

谱

响

应

评

估方法,通过比较特定浓度水平下被测化合物和同位素标记物在基质匹配校准溶液和校准溶液的质谱响应值,评估基质效应。见公式

(A.3)

和公式

(A.4)。iMEx=Ax-miME

=Ai-m式中:iMEx

———被测化合物的基质效应系数;iME ———同位素标记物的基质效应系数;Ax-m

———基质匹配校准溶液中被测化合物的单位浓度质谱响应;Ax-s

———校准溶液中被测化合物的单位浓度质谱响应;Ai-m

———基质匹配校准溶液中同位素标记物的单位浓度质谱响应;Ai-s

———校准溶液中同位素标记物的单位浓度质谱响应。c)

被测化合物和同位素标记物间的基质效应差异,

按公式

(A.5)采用基质效应因子θ评估。8学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载MEi

(A.5)JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载MEi

(A.5)θ=

MEx式中:θ ———被测化合物与标记物间的基质效应因子;iMEx———被测化合物的基质效应系数;iME

———同位素标记物的基质效应系数。根据测量不确定度预期水平,评估θ值是否可以接受,评估是否需要作为不确定

度来源。不能接受的情况下,可采用基质匹配校准方法或者标准加入法进行定量校准,以降低基质效应的影响。9不确定度分量来源说明量化依据AsA's样品中被测化合物与同位素标记物峰面积比值仪器测量相对标准偏差AlA'l低浓度校准溶液中被测化合物与同位素标记物峰面积比值仪器测量相对标准偏差AhA'h高浓度校准溶液中被测化合物与同位素标记物峰面积比值仪器测量相对标准偏差ch高浓度校准溶液中被测化合物浓度称量、定容、移取cl低浓度校准溶液中被测化合物浓度称量、定容、移取c'h高浓度校准溶液中同位素标记物浓度称量、定容、移取c'l低浓度校准溶液中同位素标记物浓度称量、定容、移取m's样品中同位素标记物质量称量、定容、移取Ms样品质量称量不确定度分量来源说明量化依据As样品中被测化合物峰面积仪器测量相对标准偏差A's样品中同位素标记物峰面积仪器测量相对标准偏差k,a校准曲线线性拟合m's样品中同位素标记物质量称量、定容、移取Ms样品质量称量不确定度分量来源说明量化依据AsA's样品中被测化合物与同位素标记物峰面积比值仪器测量相对标准偏差表B.1

表B.1

校准曲线法表B.2

括弧法

(双点校准法)表B.3

单点校准法10．ｃｏｍ标ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔学兔ｗ准下载JJF2109—2024．ｃｏｍ标ｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔学兔ｗ准下载附录B不同校准方法测量结果的不确定度分量有机同位素稀释质谱法可采用

校

准

曲

线

法、

括

弧

法

(双

点

校

准

法)、

单

点

校

准

法

和标准加入法进行定量校准,标准物质、称量、校准溶液制备、曲线拟合等不确定度分量,应分别按照表B.1~表B.4进行不确定度分量评估。不确定度分量来源说明量化依据AA'校准溶液中被测化合物与同位素标记物峰面积比值仪器测量相对标准偏差c校准溶液中被测化合物浓度称量、定容、移取c'校准溶液中同位素标记物浓度称量、定容、移取m's样品中同位素标记物质量称量、定容、移取Ms样品质量称量不确定度分量来源说明量化依据k,a校准曲线线性拟合m's样品中同位素标记物质量称量、定容、移取Ms样品质量称量学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载表B.3表B.3(续)表B.4

标准加入法学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载附录C有机同位素稀释质谱法应用示例———

“猪肉粉中克伦特罗”(有证标准物质 GBW10135)

的定值(C.1

仪器与试剂C.1.1

仪器1)

液相色谱高分辨质谱

(HPLC-HRMS);2)

高效液相色谱三重四极杆串联质谱

(HPLC-MS/MS);3)

高效液相色谱二极管阵列检测器

(HPLC-DAD);4)

天平

(分度值0.001

mg,分度值0.1

mg);5)

匀浆机;6)

涡旋混合器;7)

离心机;8)

阳离子固相萃取柱;9)

水浴氮吹仪。C.1.2

试剂与样品1)

盐酸克伦特罗纯度标准物质

[CLB,GBW

(E)061890,99.0%,U=0.6%,k=2];2)

盐酸克伦特罗同位素标记物

(盐酸克伦特罗-D9,CLB-D9,纯度>99.7%;盐酸克伦特罗-D6,CLB-D6,纯度>99.8%);3)

甲醇、乙腈

(色谱纯);4)

甲酸

(分析纯);5)

超纯水;6)

猪肉粉中克伦特罗成分分析标准物质

(GBW10135)。C.2

稳定同位素标记化合物的准备C.2.1

同位素分布和化学纯度采用

HPLC-HRMS分析同位素标

记物,蠕动泵流动注射100μg/kg

的同位素标记物甲醇溶液,采集1

min总离子流图

(TIC),随

机

选

择

10

张

质

谱

图,

依

据FullMS

质谱图中的目标被测化合物及其可能杂质

(不同氘代数物质)

的质谱峰平均强度,计算其归一化后百分比,得到CLB-D9和CLB-D6的同位素分布。采用

HPLC-DAD测

定

2

个

标记物的化学纯度。结果见表C.1。12标记化合物纯度M-D0M-D4M-D5M-D6M-D7CLB-D699.90.14±0.020.51±0.048.17±0.1391.19±0.13———标记化合物纯度M-D0M-D6M-D7M-D8M-D9CLB-D999.80.49±0.030.21±0.030.92±0.069.23±0.2189.15±0.22化合物分子离子(m/z)碎片离子(m/z)CLB277.1259.1,203.0,168.0,132.1CLB-D6283.1265.1,204.0,203.0,168.0,132.1CLB-D9286.1268.1,204.0,168.0,132.1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载JJF2109—2024学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载表C.1

CLB-D6和CLB-D9的同位素分布和纯度单位为%C.2.2

质谱特征离子zzzz采用

HPLC-MS/MS

采

集CLB-D9、CLB-D6和CLB的

质

谱

碎

片单位为%C.2.2

质谱特征离子zzzz在碎裂过程中产生m/

=204.0、m/

=203.0

两

个

强

度

接

近

特

征

离

子,CLB-D9产

生

稳定的m/

=204.0特征离子,质谱响应强度与CLB的

特

征

离

子m/

=203.0

差

异

较

小,因此选择CLB-D9作为同位素稀释剂。表C.2

3种化合物的准分子离子和特征碎片离子C.2.3

标记物添加比例确定及平衡时间采用表C.2

3种化合物的准分子离子和特征碎片离子C.2.3

标记物添加比例确定及平衡时间位素分布、纯度以及其定量离子对质

谱

响

应,

重

量

法

配

制CLB-D9校

准

溶

液,

使

其

质

谱响应与目标物CLB的比值在0.95~1.05。比较样品中添加同位素标记物后立即前处理、平衡1h、2h、6h、12h和

24h后前处理及

HPLC-MS/MS测定,发现1h后测定结果已经稳定,确定平衡

时

间

为

不

少

于1h。C.3

样品前处理C.3.1

提取4称取样品0.5g

(准确至0.0001g),加1.5g水复溶,加入适量CLB-D9标

记

物

溶4液,涡旋混匀后放置1h。加5mL水,14000r/min匀浆1min,用5mL水清洗刀头,合并清洗液与匀浆液。加0.1%甲酸乙腈溶液10mL,涡旋混合2min。12000r/min(

℃)

冷冻离心15

min,收集上清液过0.45μm

聚醚砜滤膜,待净化。C.3.2

净化2阳离子固相萃取柱依

次

经

8mL甲

醇、8mL水、8mL0.2%

甲

酸水溶液活化。

提2取液全部上

样,

分别用0.2%甲酸水溶液和50%甲醇水溶液各8mL淋洗,抽干,用8

mL正己烷淋洗、抽干。用5%氨化乙酸乙酯:甲醇

(

∶1,V/V)溶

液

10mL洗

脱。洗脱液在45

℃水浴下氮吹至近干,用0.1%甲酸水溶液2mL复溶,过0.22μm

聚醚砜滤膜,供

HPLC-MS/MS检测。13化合物定量离子对CE/V定性离子对CE/V保留时间/minCLB277.1/203.025277.0/168.0453.3CLB-D9