禽白血病AJ三重PCR检测技术规程编制说明

安徽省地方标准编制说明标准名称禽白血病通用/A/J三重PCR检测技术规程任务来源（项目计划号）安徽省市场监督管理局关于下达2023年第二批安徽省地方标准制修订计划的通知（皖市监函〔2023〕478号），项目计划号：2023-2-82第一起草单位（盖章）安徽省动物疫病预防与控制中心单位地址合肥市滨湖新区洞庭湖路3355号参与起草单位安徽农业大学等标准起草人（全部起草人，应与标准文本前言中起草人排序一致）序号姓名单位职务职称电话1沈艳安徽省动物疫病预防与控制中心等兽医制情况1、编制过程简介2023年9月12日，安徽省市场监督管理局《关于下达2023年第二批安徽省地方标准制修订计划的通知》（皖市监函〔2023〕478号）下达了《禽白血病通用/A/J三重PCR检测技术规程》安徽省地方标准的编制计划，安徽省动物疫病预防与控制中心联合安徽农业大学等成立标准制定工作小组，分工负责标准起草相关工作。标准编制小组以科学、规范、可操作性强为原则，起草本标准；同时，采取召开座谈会、发电子邮件等方式，征求起草单位专家的意见和建议。2023年1月上旬完成了本标准征求意见稿。2023年2-3月，委托省农科院畜牧兽医研究所兽医临床诊断中心、安农大畜禽疾病监测中心、兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室3家省级实验室开展验证试验。2、制定标准的必要性和意义制定该标准的必要性禽白血病（avianleukosis，AL）是由禽白血病病毒（avianleukosisvirus）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，呈世界性分布，对养禽业危害巨大。由于ALV基因的变异和重组导致ALV亚群众多，传播性复杂，其中以A亚群和J亚群感染家危害最为严重，几乎可以感染所有品种和日龄的鸡群。患禽主要表现多器官发生肿瘤，免疫功能抑制，易继发其他病原感染，导致生产性能下降。《中华人民共和国动物防疫法》（2021年5月1日）明确将禽白血病等垂直传播性动物疫病作为重点“净化消灭”病种。《农业农村部关于推进动物疫病净化工作的意见》（农牧发〔2021〕29号）明确要求种禽场扎实开展禽白血病等疫病的净化工作。2022年农业农村部公告〔第574号〕将种禽健康标准中增加了禽白血病达到净化作为一项硬性指标。禽白血病至今尚无有效的药物和疫苗可供使用，控制该病最有效的措施是通过病原检测，淘汰阳性鸡，达到净化种群。因此，早期的病毒筛查和检测对该病净化至关重要。二、制定该标准的意义多重PCR检测方法是一种高效性、系统性且经济简便性的实验室检测方法，适用于临床样本的快速鉴别诊断。《禽白血病通用/A/J三重PCR检测技术规程》可以为我省禽白血病的净化提供一套科学、规范的实验室检测方法，对于养禽业疫病净化和健康生产具有重要的意义。3、制定标准的原则和依据，与现行法律法规、标准的关系。一、制定该标准的原则制定该标准遵循“先进性、实用性、统一性、规范性”，严格按照GB/T1.1-2020的要求进行编写。本标准与现行法律、法规、标准和强制性标准无冲突。二、制定该标准的依据GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范GB/T19495.2转基因产品检测 实验室技术要求GB19489实验室生物安全通用要求《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）4、主要条款的说明，主要技术指标、参数、试验验证的论述本文件规定了禽白血病通用/A/J三重PCR检测方法的术语与定义、主要仪器设备、试剂与耗材、引物、样品处理、试验步骤、结果判定、实验废弃物无害化处理。主要条款说明如下：4主要仪器设备：规定了完成禽白血病通用/A/J三重PCR检测所需的主要仪器设备，如PCR仪、台式高速冷冻离心机、全自动组织碾磨仪、电泳仪、凝胶成像系统、微量移液器等。5试剂：规定了完成禽白血病通用/A/J三重PCR检测所需的试剂与耗材，如病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒和反转录试剂盒、2×EasyTaqSuperMix、DNA分子量标准（DL2000Marker）等。6引物：规定了禽白血病通用/A/J三重PCR三对上下游引物的序列。本标准中引物根据GenBank中登录的ALV基因序列（登录号MN735309）、ALV-A（登录号DQ412726）和ALV-J（登录号KF218957）分别设计特异性引物。扩增产物，经测序鉴定与ALV的pol基因，ALV-A亚群和ALV-J亚群的gp85基因片段相符合，从而证明三对引物设计合理。7样品处理：规定了鸡的血液、精液、组织、肿瘤等不同样本的不同的前处理方法。8试验步骤：规定了禽白血病通用/A/J三重PCR中RNA的反转录、PCR扩增、电泳以及结果观察。9结果判定：规定了检测结果成立条件和核酸阳性、阴性及阳性分型的判定标准。5、标准中如果涉及专利，应有明确的知识产权说明无。6、采用国际标准或国外先进标准的，说明采标程度，以及国内外同类标准水平的对比情况无。7、重大分歧意见的处理经过和依据无。8、贯彻标准的要求和措施建议（包括组织措施、技术措施、过渡办法、实施日期等）标准发布后，建议采取如下一些具体措施开展标准的宣贯和实施工作：1.由标准归口单位牵头，起草单