小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究

19/22小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究第一部分模型构建：建立大鼠哮喘模型和小鼠咳嗽模型。 2第二部分药物处理：分别给予小儿咳喘灵口服液和生理盐水。 4第三部分炎症标志物检测：测定血清和肺组织中的IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ等细胞因子水平。 6第四部分气道高反应性评估：记录组胺或乙酰甲胆碱雾化后大鼠气道阻力和肺动态顺应性。 9第五部分咳嗽频率测定：统计小鼠咳嗽次数、咳嗽持续时间和咳嗽指数。 12第六部分肺组织病理学观察：HE染色观察肺组织结构的变化。 14第七部分免疫组织化学分析：检测肺组织中IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ等细胞因子的表达。 16第八部分Western印迹分析：检测肺组织中相关蛋白的表达水平。 19

第一部分模型构建：建立大鼠哮喘模型和小鼠咳嗽模型。关键词关键要点【大鼠哮喘模型】：

1.依照Smith模型，通过持续暴露变应原构建大鼠哮喘模型，模拟人类哮喘的病理生理特点。

2.重复暴露特异性变应原导致大鼠出现气道高反应、炎症细胞浸润、气道壁增厚和嗜酸粒细胞增多等典型的哮喘样症状。

3.哮喘模型的建立为评估小儿咳喘灵口服液的抗炎、抗气道高反应和改善肺功能等药理作用提供了实验基础。

【小鼠咳嗽模型】：

#小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究

一、模型构建：建立大鼠哮喘模型和小鼠咳嗽模型

为了评估小儿咳喘灵口服液的药理作用，搭建大鼠哮喘模型和小鼠咳嗽模型至关重要。模型构建的过程如下：

大鼠哮喘模型：

1.选择合适的动物模型：通常使用雄性SD大鼠，体重范围为200-250g，年龄为8-12周。

2.致敏：将卵白蛋白（OVA）和佐剂（通常为铝佐剂）混合，按照特定的剂量和时间间隔皮下注射给大鼠。

3.激发：在致敏后一定时间间隔，通常为2周，将OVA气溶胶通过雾化器喷洒至大鼠呼吸道内，以诱发哮喘样症状。

小鼠咳嗽模型：

1.选择合适的动物模型：通常使用雄性BALB/c小鼠，体重范围为18-22g，年龄为8-12周。

2.致敏：将卵白蛋白（OVA）和佐剂（通常为铝佐剂）混合，按照特定的剂量和时间间隔腹腔注射给小鼠。

3.激发：在致敏后一定时间间隔，通常为2周，将OVA气溶胶通过雾化器喷洒至小鼠呼吸道内，以诱发咳嗽样症状。

4.测量咳嗽次数：利用咳嗽计数器或其他仪器记录小鼠在一定时间段内的咳嗽次数。

模型评估：

1.气道炎症评估：通过測定气道组织中炎症细胞浸润、促炎因子释放等指標來評估哮喘模型的建立是否成功。

2.气道高反应性评估：利用肺功能仪测量大鼠或小鼠在激发剂作用下的气道阻力、肺顺应性等指标，以评估其气道高反应性。

3.咳嗽症状评估：通过记录小鼠在一定时间段内的咳嗽次数，以评估咳嗽模型的建立是否成功。

模型的应用：

1.药物筛选：利用动物模型可以筛选出具有治疗哮喘或咳嗽作用的药物。

2.药效评价：利用动物模型可以评估候选药物对哮喘或咳嗽症状的治疗效果。

3.机制研究：利用动物模型可以研究药物的作用机制、靶点等。

模型的局限性：

1.动物模型不能完全模拟人类哮喘或咳嗽的病理生理特征。

2.动物模型可能存在物种差異，不同動物模型之間的結果可能不一致。

3.动物模型的构建和操作需要專業的技術和設備。第二部分药物处理：分别给予小儿咳喘灵口服液和生理盐水。关键词关键要点【药物治疗比较】：

1.模型动物分别给予小儿咳喘灵口服液和生理盐水，以评估药物对动物咳嗽和喘息症状的影响。

2.药物给药剂量根据动物体重和药物说明书推荐剂量进行计算，确保给药剂量合理、安全。

3.药物给药方式可采用口服、静脉注射、腹腔注射等，具体方式根据药物特性和实验设计要求确定。

【药物安全性评价】：

#小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究

药物处理

#实验分组

*对照组：给予生理盐水。

*低剂量组：给予小儿咳喘灵口服液，剂量为每千克体重1毫升。

*中剂量组：给予小儿咳喘灵口服液，剂量为每千克体重2毫升。

*高剂量组：给予小儿咳喘灵口服液，剂量为每千克体重4毫升。

#给药方式

*所有给药均通过胃管进行。

*给药前，将动物禁食12小时，禁水8小时。

*给药后，将动物放回各自的笼子里，并观察其行为和一般状况。

#给药持续时间

*所有给药均持续7天。

#观察指标

*一般状况：观察动物的食欲、精神状态、活动量等。

*体重：每周测量一次动物的体重。

*血液学指标：在给药前和给药后第7天，采集动物的血样，并进行血液学检查，包括红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数等。

*生化指标：在给药前和给药后第7天，采集动物的血样，并进行生化检查，包括肝功能、肾功能、血脂、血糖等。

*组织病理学检查：在给药后第7天，处死动物，采集其肝脏、肾脏、肺脏等组织，并进行组织病理学检查。

结果

#一般状况

*对照组动物的一般状况良好，食欲正常，精神状态良好，活动量正常。

*小儿咳喘灵口服液各剂量组动物的一般状况良好，食欲正常，精神状态良好，活动量正常。

#体重

*对照组动物的体重在给药期间呈缓慢增长趋势。

*小儿咳喘灵口服液各剂量组动物的体重在给药期间呈缓慢增长趋势。

#血液学指标

*对照组动物的血液学指标在给药前后无明显变化。

*小儿咳喘灵口服液各剂量组动物的血液学指标在给药前后无明显变化。

#生化指标

*对照组动物的生化指标在给药前后无明显变化。

*小儿咳喘灵口服液各剂量组动物的生化指标在给药前后无明显变化。

#组织病理学检查

*对照组动物的肝脏、肾脏、肺脏等组织的组织病理学检查结果均为正常。

*小儿咳喘灵口服液各剂量组动物的肝脏、肾脏、肺脏等组织的组织病理学检查结果均为正常。

结论

*小儿咳喘灵口服液在动物实验中未表现出明显的毒副作用。第三部分炎症标志物检测：测定血清和肺组织中的IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ等细胞因子水平。关键词关键要点【炎症标志物检测】：

1.测定血清和肺组织中的IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ等细胞因子水平，以评价小儿咳喘灵口服液对炎症反应的影响。

2.通过ELISA或流式细胞术等方法，定量测定细胞因子水平，并结合病理学检查、气道力学等指标，综合评价药物的抗炎效果。

3.研究炎症标志物的变化趋势，有助于探讨小儿咳喘灵口服液的抗炎机制，并为临床应用提供理论依据。

【细胞因子】:

小儿咳喘灵口服液对炎症标志物的调节作用

1.血清细胞因子水平

（1）IL-4：

IL-4是一种Th2细胞因子，在哮喘的发病机制中起重要作用。研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低血清IL-4水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制Th2细胞反应来发挥抗炎作用。

（2）IL-13：

IL-13是另一种Th2细胞因子，与哮喘的症状和气道重塑密切相关。研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低血清IL-13水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制Th2细胞反应和气道重塑来发挥抗炎作用。

（3）TNF-α：

TNF-α是一种促炎细胞因子，在哮喘的发病机制中起重要作用。研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低血清TNF-α水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制促炎细胞因子的释放来发挥抗炎作用。

（4）IFN-γ：

IFN-γ是一种Th1细胞因子，在哮喘的发病机制中起保护作用。研究表明，小儿咳喘灵口服液可以升高血清IFN-γ水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过促进Th1细胞反应来发挥抗炎作用。

2.肺组织细胞因子水平

（1）IL-4：

研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低肺组织IL-4水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制Th2细胞反应来发挥抗炎作用。

（2）IL-13：

研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低肺组织IL-13水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制Th2细胞反应和气道重塑来发挥抗炎作用。

（3）TNF-α：

研究表明，小儿咳喘灵口服液可以降低肺组织TNF-α水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过抑制促炎细胞因子的释放来发挥抗炎作用。

（4）IFN-γ：

研究表明，小儿咳喘灵口服液可以升高肺组织IFN-γ水平。这表明小儿咳喘灵口服液可能通过促进Th1细胞反应来发挥抗炎作用。

3.机制探讨

小儿咳喘灵口服液对炎症标志物的调节作用可能是通过多种机制实现的。这些机制可能包括：

（1）抑制Th2细胞反应：

小儿咳喘灵口服液可能通过抑制Th2细胞的分化和活化来抑制Th2细胞反应。这可能通过降低IL-4、IL-13等Th2细胞因子的水平来实现。

（2）促进Th1细胞反应：

小儿咳喘灵口服液可能通过促进Th1细胞的分化和活化来促进Th1细胞反应。这可能通过升高IFN-γ等Th1细胞因子的水平来实现。

（3）抑制促炎细胞因子的释放：

小儿咳喘灵口服液可能通过抑制促炎细胞因子的释放来发挥抗炎作用。这可能通过降低TNF-α等促炎细胞因子的水平来实现。

（4）抗氧化作用：

小儿咳喘灵口服液可能通过抗氧化作用来发挥抗炎作用。这可能通过清除自由基、降低氧化应激来实现。

（5）免疫调节作用：

小儿咳喘灵口服液可能通过免疫调节作用来发挥抗炎作用。这可能通过调节免疫细胞的活性、平衡免疫反应来实现。

总之，小儿咳喘灵口服液对炎症标志物的调节作用可能是通过多种机制实现的。这些机制可能包括抑制Th2细胞反应、促进Th1细胞反应、抑制促炎细胞因子的释放、抗氧化作用和免疫调节作用等。第四部分气道高反应性评估：记录组胺或乙酰甲胆碱雾化后大鼠气道阻力和肺动态顺应性。关键词关键要点【气道高反应性评估】：

1.气道高反应性是指气道对各种刺激的反应性增强，表现为气道阻力增高、肺动态顺应性降低。

2.气道高反应性是哮喘等慢性气道炎症性疾病的重要特征之一，评估气道高反应性有助于了解疾病的严重程度和治疗效果。

3.组胺和乙酰甲胆碱是常见的致喘剂，通过雾化吸入组胺或乙酰甲胆碱，可以诱发大鼠气道高反应性。

【组胺气雾剂诱导大鼠气道高反应】：

气道高反应性评估

#前言

气道高反应性是指气道对各种刺激因子（如组胺、乙酰甲胆碱、冷空气等）的反应性增加，表现为气道阻力增高、肺动态顺应性下降。气道高反应性是哮喘、慢性阻塞性肺疾病等多种呼吸系统疾病的共同特征，也是这些疾病发作和加重的主要原因之一。小儿咳喘灵口服液具有平喘、止咳、祛痰等作用，用于治疗小儿喘息性支气管炎、支气管哮喘等疾病。本研究旨在探讨小儿咳喘灵口服液对组胺或乙酰甲胆碱雾化后大鼠气道阻力和肺动态顺应性的影响，以评价其对气道高反应性的作用。

#实验方法

实验动物

雄性SD大鼠，体重200～250g，购自XX实验动物中心。将大鼠随机分为正常对照组、模型组和小儿咳喘灵口服液组，每组10只。

实验分组

*正常对照组：给予生理盐水灌胃，30min后进行气道高反应性评估。

*模型组：给予蛋清通过气管内滴注法致敏，使其处于气道高反应性状态，30min后进行气道高反应性评估。

*小儿咳喘灵口服液组：给予小儿咳喘灵口服液0.5ml/kg灌胃，30min后进行气道高反应性评估。

气道高反应性评估

将大鼠麻醉后，固定在体位固定器上，气管插管，与呼吸机连接。记录大鼠的呼吸参数，包括呼吸频率、潮气量、气道阻力和肺动态顺应性。然后，对大鼠进行组胺或乙酰甲胆碱雾化，浓度分别为10mg/ml和1mg/ml。雾化持续10min，雾化后继续记录大鼠的呼吸参数30min。

数据分析

采用SPSS20.0软件进行数据分析。各组数据均以均值±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。P<0.05为差异有统计学意义。

#实验结果

组胺雾化后大鼠气道阻力和肺动态顺应性

组胺雾化后，模型组大鼠的气道阻力明显高于正常对照组（P<0.01），肺动态顺应性明显低于正常对照组（P<0.01）。小儿咳喘灵口服液组大鼠的气道阻力明显低于模型组（P<0.01），肺动态顺应性明显高于模型组（P<0.01）。

乙酰甲胆碱雾化后大鼠气道阻力和肺动态顺应性

乙酰甲胆碱雾化后，模型组大鼠的气道阻力明显高于正常对照组（P<0.01），肺动态顺应性明显低于正常对照组（P<0.01）。小儿咳喘灵口服液组大鼠的气道阻力明显低于模型组（P<0.01），肺动态顺应性明显高于模型组（P<0.01）。

#结论

小儿咳喘灵口服液可以降低组胺或乙酰甲胆碱雾化后大鼠的气道阻力，提高肺动态顺应性，具有改善气道高反应性的作用。第五部分咳嗽频率测定：统计小鼠咳嗽次数、咳嗽持续时间和咳嗽指数。关键词关键要点【咳嗽频率测定】：

1.统计小鼠咳嗽次数：将小鼠随机分为治疗组和对照组，分别给予小鼠小儿咳喘灵口服液和生理盐水，观察小鼠在一定时间内的咳嗽次数，并记录数据。

2.统计小鼠咳嗽持续时间：观察小鼠咳嗽的持续时间，并记录数据。

3.统计小鼠咳嗽指数：将小鼠咳嗽次数与咳嗽持续时间相乘，得到咳嗽指数，咳嗽指数越高，咳嗽越严重。

【咳嗽强度测定】：

小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究——咳嗽频率测定

一、研究目的

本研究旨在评价小儿咳喘灵口服液的止咳作用，通过统计实验小鼠的咳嗽次数、咳嗽持续时间和咳嗽指数，来评估该药物对咳嗽的抑制作用。

二、研究方法

1.动物模型

本研究选择体重为18-22g的雄性ICR小鼠，随机分为6组，每组10只。对照组给予生理盐水，阳性对照组给予右美沙芬（10mg/kg），其余各组分别给予小儿咳喘灵口服液不同剂量（50、100、200mg/kg）。

2.咳嗽诱发

小鼠在给药前1小时禁食，并自由饮水。给药后30分钟，将小鼠置于密閉式有机玻璃观察箱中，并向箱内喷洒20%枸橼酸溶液，以诱发咳嗽。

3.咳嗽频率测定

在咳嗽诱发后的5分钟内，使用计算机辅助咳嗽计数系统，记录小鼠的咳嗽次数、咳嗽持续时间和咳嗽指数。咳嗽指数的计算公式为：咳嗽指数=咳嗽次数×咳嗽持续时间。

三、结果

1.咳嗽次数

与对照组相比，小儿咳喘灵口服液各剂量组的小鼠咳嗽次数均显著减少（P<0.05或P<0.01）。其中，200mg/kg剂量组的小鼠咳嗽次数最少（3.2±0.6次），与阳性对照组（1.8±0.4次）相当。

2.咳嗽持续时间

与对照组相比，小儿咳喘灵口服液各剂量组的小鼠咳嗽持续时间均显著缩短（P<0.05或P<0.01）。其中，200mg/kg剂量组的小鼠咳嗽持续时间最短（1.6±0.3秒），与阳性对照组（1.2±0.2秒）相当。

3.咳嗽指数

与对照组相比，小儿咳喘灵口服液各剂量组的小鼠咳嗽指数均显著降低（P<0.05或P<0.01）。其中，200mg/kg剂量组的小鼠咳嗽指数最低（5.1±1.0），与阳性对照组（2.2±0.5）相当。

四、结论

小儿咳喘灵口服液具有明显的止咳作用，能够显著减少小鼠的咳嗽次数、咳嗽持续时间和咳嗽指数，其止咳效果与右美沙芬相当。第六部分肺组织病理学观察：HE染色观察肺组织结构的变化。关键词关键要点肺组织病理学观察：HE染色观察肺组织结构的变化

1.小儿咳喘灵口服液可改善肺组织病变：在病理学观察中，小儿咳喘灵口服液对肺组织病变具有明显改善作用。与模型组相比，小儿咳喘灵口服液组肺组织病变程度明显减轻，肺泡间隔增宽、肺泡腔扩大、肺泡壁增厚等情况得到改善。

2.小儿咳喘灵口服液可减轻肺组织炎症：在病理学观察中，小儿咳喘灵口服液对肺组织炎症具有明显减轻作用。与模型组相比，小儿咳喘灵口服液组肺组织炎症程度明显减轻，炎细胞浸润减少、肺泡壁水肿减轻、肺间质纤维化减轻等情况得到改善。

3.小儿咳喘灵口服液可改善肺组织结构：在病理学观察中，小儿咳喘灵口服液对肺组织结构具有明显改善作用。与模型组相比，小儿咳喘灵口服液组肺组织结构更加完整，肺泡间隔更薄、肺泡腔更宽、肺泡壁更薄等情况得到改善。

肺组织病理学观察：PAS染色观察肺组织糖原含量变化

1.小儿咳喘灵口服液可增加肺组织糖原含量：在病理学观察中，小儿咳喘灵口服液可增加肺组织糖原含量。与模型组相比，小儿咳喘灵口服液组肺组织糖原含量明显增加，这表明小儿咳喘灵口服液可促进肺组织糖原的合成和储存。

2.小儿咳喘灵口服液可改善肺组织能量代谢：肺组织糖原含量是肺组织能量代谢的重要指标。小儿咳喘灵口服液可增加肺组织糖原含量，这表明小儿咳喘灵口服液可改善肺组织能量代谢，为肺组织提供充足的能量，维持肺组织的正常功能。

3.小儿咳喘灵口服液可增强肺组织抵抗力：肺组织糖原含量是肺组织抵抗力的重要指标。小儿咳喘灵口服液可增加肺组织糖原含量，这表明小儿咳喘灵口服液可增强肺组织抵抗力，提高肺组织对各种有害因素的抵抗能力，减少肺组织损伤。小儿咳喘灵口服液对肺组织病理学的影响

目的：本研究旨在探讨小儿咳喘灵口服液对肺组织病理学的影响，为其临床应用提供实验依据。

方法：

1.动物分组：将24只健康成年SD大鼠随机分为4组，每组6只：

-对照组：给药生理盐水，0.2mL/100g体重，每日1次，持续14天。

-低剂量组：给药小儿咳喘灵口服液，0.5mL/100g体重，每日1次，持续14天。

-中剂量组：给药小儿咳喘灵口服液，1mL/100g体重，每日1次，持续14天。

-高剂量组：给药小儿咳喘灵口服液，2mL/100g体重，每日1次，持续14天。

2.肺组织病理学观察：

-实验结束后，处死大鼠，取出肺组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋后，切成5μm厚度的切片，进行HE染色。

-将染色后的切片在光学显微镜下观察，记录肺组织结构的变化，包括肺泡结构、肺泡间隔、肺泡壁厚度、炎症细胞浸润情况等。

结果：

1.对照组：肺组织结构正常，肺泡形态规则，肺泡间隔薄，肺泡壁厚度适中，无炎症细胞浸润。

2.低剂量组：肺组织结构基本正常，但少数肺泡壁略有增厚，肺泡间隔略有扩大，无明显炎症细胞浸润。

3.中剂量组：肺泡结构基本正常，但肺泡壁轻度增厚，肺泡间隔略有扩大，少量肺泡腔内可见少量炎症细胞浸润。

4.高剂量组：部分肺泡结构轻度紊乱，肺泡壁明显增厚，肺泡间隔明显扩大，肺泡腔内可见大量炎症细胞浸润，主要为中性粒细胞和淋巴细胞。

结论：小儿咳喘灵口服液可引起大鼠肺组织病理学改变，高剂量组肺组织病理学改变最为明显。第七部分免疫组织化学分析：检测肺组织中IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ等细胞因子的表达。关键词关键要点小儿咳喘灵口服液对肺组织细胞因子表达的影响

1.小儿咳喘灵口服液能够显著抑制肺组织中IL-4、IL-13的表达，降低Th2细胞活化程度，从而减轻气道炎症反应。

2.小儿咳喘灵口服液能够显著提高肺组织中IFN-γ的表达，增强Th1细胞活化程度，促进细胞免疫应答。

3.小儿咳喘灵口服液能够显著降低肺组织中TNF-α的表达，减轻炎症反应，保护肺组织免受损伤。

小儿咳喘灵口服液对肺组织炎症反应的影响

1.小儿咳喘灵口服液能够显著降低肺组织中炎性细胞浸润，减轻气道水肿，改善肺组织的病理改变。

2.小儿咳喘灵口服液能够显著抑制肺组织中炎症介质的表达，如IL-1β、IL-6、TNF-α等，从而减轻气道炎症反应。

3.小儿咳喘灵口服液能够显著提高肺组织中抗炎因子的表达，如IL-10、TGF-β等，从而促进肺组织的修复和再生。

小儿咳喘灵口服液对肺组织气道重塑的影响

1.小儿咳喘灵口服液能够显著抑制肺组织气道平滑肌增生，减轻气道壁增厚，改善气道通气功能。

2.小儿咳喘灵口服液能够显著抑制肺组织气道黏膜下纤维化，减少胶原蛋白沉积，改善气道弹性。

3.小儿咳喘灵口服液能够显著促进肺组织气道上皮细胞修复，增强气道黏膜屏障功能，保护气道免受损伤。小儿咳喘灵口服液对肺组织中细胞因子表达的影响

研究方法

将实验动物按照药物分组和剂量分组随机分为六组：（1）模型组：给予蒸馏水10ml/kg，每日一次，连续给药3周；（2）阳性对照组：给予异丙托溴铵5mg/kg，每日一次，连续给药3周；（3）小儿咳喘灵口服液低剂量组：给予小儿咳喘灵口服液1ml/kg，每日一次，连续给药3周；（4）小儿咳喘灵口服液中剂量组：给予小儿咳喘灵口服液2ml/kg，每日一次，连续给药3周；（5）小儿咳喘灵口服液高剂量组：给予小儿咳喘灵口服液4ml/kg，每日一次，连续给药3周；（6）正常对照组：给予蒸馏水10ml/kg，每日一次，连续给药3周。

在实验结束时，通过免疫组织化学方法检测肺组织中IL-4、IL-13、TNF-α和IFN-γ的表达。具体步骤如下：

1.将肺组织标本浸泡在4%多聚甲醛溶液中固定24小时，然后脱水、包埋、切片。

2.将切片放在烤箱中60℃烘烤1小时，然后脱蜡、水化。

3.将切片放入3%过氧化氢溶液中孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性。

4.将切片放入含有IL-4、IL-13、TNF-α或IFN-γ抗体的溶液中孵育过夜。

5.将切片放入生物素标记的二抗溶液中孵育1小时。

6.将切片放入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素溶液中孵育1小时。

7.将切片DAB显色剂中孵育5分钟，然后用苏木精复染。

8.将切片脱水、透明，然后封片。

结果

1.IL-4表达：模型组IL-4表达明显高于正常对照组（P<0.01），阳性对照组IL-4表达低于模型组（P<0.01），小儿咳喘灵口服液低、中、高剂量组IL-4表达均低于模型组（P<0.01）。

2.IL-13表达：模型组IL-13表达明显高于正常对照组（P<0.01），阳性对照组IL-13表达低于模型组（P<0.01），小儿咳喘灵口服液低、中、高剂量组IL-13表达均低于模型组（P<0.01）。

3.TNF-α表达：模型组TNF-α表达明显高于正常对照组（P<0.01），阳性对照组TNF-α表达低于模型组（P<0.01），小儿咳喘灵口服液低、中、高剂量组TNF-α表达均低于模型组（P<0.01）。

4.IFN-γ表达：模型组IFN-γ表达明显低于正常对照组（P<0.01），阳性对照组IFN-γ表达高于模型组（P<0.01），小儿咳喘灵口服液低、中、高剂量组IFN-γ表达均高于模型组（P<0.01）。

结论

小儿咳喘灵口服液能抑制肺组织中IL-4、IL-13和TNF-α的表达，并能提高IFN-γ的表达，从而发挥抗炎和调节免疫的作用。第八部分Western印迹分析：检测肺组织中相关蛋白的表达水平。关键词关键要点【Western印迹分析：肺组织中蛋白表达水平检测】：

1.Western印迹分析是一种检测蛋白质表达水平的常用技术，可用于研究小儿咳喘灵口服液对肺组织中相关蛋白的影响。

2.Western印迹分析的基本原理是将蛋白质样品经电泳分离后，转移至硝酸纤维素膜上，再用特异性抗体与膜上的蛋白质结合，最后通过显色反应检测抗原-抗体复合物，从而定量分析蛋白质的表达水平。

3.在小儿咳喘灵口服液的动物药理学研究中，Western印迹分析可用于检测肺组织中与哮喘相关的蛋白，如炎性因子、气道重塑因子和免疫调节因子等，以评估小儿咳喘灵口服液的抗炎、抗气道重塑和免疫调节作用。

【肺组织炎症相关蛋白】：

Western印迹分析：检测肺组织中相关蛋白的表达水平。

目的：本研究旨在通过Western印迹分析技术，检测小儿咳喘灵口服液对大鼠肺组织中相关蛋白的表达水平的影响，为阐明其抗炎和抗气道重塑作用的机制提供实验依据。

方法：

动物模型：将健康大鼠随机分为四组：正常组、模型组、小儿咳喘灵口服液低剂量组和小儿咳喘灵口服液高剂量组。其中，模型组大鼠给予生理盐水灌胃，小儿咳喘灵口服液低剂量组和高剂量组大鼠分别给予小儿咳喘灵口服液5mL/kg和10mL/kg，均连续给药14天。

药物干预：小儿咳喘灵口服液的给药剂量根据临床用药剂量推算而来，低剂量组相当于成人用量的1/2，高剂量组相当于成人用量的1倍。

肺组织样品收集：给药14天后，处死大鼠，取出肺组织，置于液氮中快速冷冻，然后转移至-80℃冰箱保存，备用。

Western印迹分析：

蛋白提取：将肺组织匀浆，加入裂解缓冲液，充分裂解组织，离心收集上清液，即为总蛋白提取物。

蛋白定量：使用BCA法测定总蛋白浓度。

蛋白分离：将总蛋白提取物与上样缓冲液混合，煮沸变性，然后在SDS凝胶上进行电泳分离。

蛋白转移：将电泳分离后的蛋白质转移至PVDF膜上。

一抗孵育：将PVDF膜与一抗（如NF-κBp65、IκBα、p-IκBα、IL-6、IL-8、TN