实验三网织红细胞计数血沉测定

关于实验三网织红细胞计数血沉测定一、网织红细胞计数目的

掌握网织红细胞（Ret)试管法计数的原理及操作方法。原理

网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体及核糖核酸等嗜碱性物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后，呈蓝色网状或点状结构，可与成熟红细胞相区别。第2页,共17页，2024年2月25日，星期天器材

显微镜、试管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦镜纸、擦镜液试剂

新亚甲蓝标本新鲜全血第3页,共17页，2024年2月25日，星期天操作步骤1.加染液将Ret染液2滴加至小试管中，做好标记。2.加血在已加入染液的小试管内注入新鲜全血2滴，立即混匀。3.染色室温下染色10-15min。4.涂片制备取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥5.观察低倍镜下选择红细胞分布均匀、着色好、背景清晰的部位进行计数。6.计数

常规法：在油镜下计数至少1000个红细胞中的网织红细胞。7.计算

Ret百分数=（1000个RBC中的Ret数/1000）×100%8.结果报告网织红细胞百分数：X.X%第4页,共17页，2024年2月25日，星期天血涂片制备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。一张满意的血涂片应厚薄均匀

头体尾涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B123第5页,共17页，2024年2月25日，星期天参考区间成人、儿童：0.5%-1.5%新生儿：2.0%-6.0%第6页,共17页，2024年2月25日，星期天注意事项1.试剂准备推荐使用新亚甲蓝染液，试剂应定期配制，用前过滤。2.染色染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能过短。试剂用后及时盖好盖子，以免挥发。3.标本应及时染色，及时测定。4.计数选择红细胞分布均匀，网织红细胞着色好的、背景清晰的部位计数。应兼顾血片边缘和尾部。第7页,共17页，2024年2月25日，星期天目的掌握魏氏法测定血沉的原理及方法。原理将一定量的枸橼酸钠抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，由于红细胞比重大于血浆，克服血浆阻力而下沉，1h后读取上层血浆高度的毫米数，即为红细胞沉降率。器材魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管）试剂

109mmol/L枸橼酸钠溶液。标本外周血。二、血液沉降率测定（魏氏法）第8页,共17页，2024年2月25日，星期天1.采血采静脉血1.6ml加入含0.4ml109mmol/L枸橼酸钠溶液抗凝剂的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度线处），混匀。2.吸血混匀血吸入血沉管内至刻度“0”处，拭去管外残余血。3.立血沉管将血沉管直立于血沉架上。4.读数

1h末准确读取红细胞下沉后露出的血浆高度。5.报告方式

XXmm/h操作步骤第9页,共17页，2024年2月25日，星期天参考值

＜50岁：男性<15mm/h

女性<20mm/h

＞50岁：男性<20mm/h

女性<30mm/h

＞85岁：男性<30mm/h

女性<42mm/h

儿童:<10mm/h二、血液沉降率测定（魏氏法）第10页,共17页，2024年2月25日，星期天注意事项

1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液比例为1：4。

2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。

3.测量时，血沉架应避免直接光照、移动和振动。

4.本实验最适宜温度为18～25℃，并要求在采血后2h内完成。

5.红细胞沉降率在1h沉降过程中，并不是均衡等速度的沉降，绝不可以只观察30min沉降率，将结果乘以2作为1h血沉结果。第11页,共17页，2024年2月25日，星期天二、血液沉降率测定（自动血沉仪法）第12页,共17页，2024年2月25日，星期天白细胞计数一、目的

掌握显微镜白细胞计数的方法。二、原理

用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数。第13页,共17页，2024年2月25日，星期天三、器材

显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布四、试剂

白细胞稀释液五、标本

EDTA盐抗凝血第14页,共17页，2024年2月25日，星期天六、操作1.加稀释液用加样枪吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。2.加血用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20μl，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。3.充池混匀后用微量吸管将细胞悬液冲入计数池，室温下平放3～5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。4.计数用低倍镜依次计数四角4个大方格内的白细胞数。5.计算白细胞/L=N/4×10×20×106=N/20×109/L6.报告方式X.X×109/L。第15页,共17页，2024年2月25日，星期天七、注意事项1.充池前应将白细胞悬液充分混匀。

2.在充池时要一次完成，不能产生满溢、气泡或充池不足及充液后玻片移动的现象。

3.白细胞在计数池中若分布不均，各大方格间细胞计数不得相差8个以上，应重新计数。

4.白细胞