鱼类的急性毒性实验

鱼类的急性毒性实验鱼类的急性毒性实验第1页CompanyLogo目录

目标与要求

试验原理

试验材料3

试验步骤

试验汇报

注意事项64125鱼类的急性毒性实验第2页CompanyLogo

经过本试验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验设计、条件、操作步骤，以及试验结果计算、分析和汇报等全过程。目标与要求1鱼类的急性毒性实验第3页CompanyLogo

鱼类对水环境改变反应十分灵敏，当水体中污染物到达一定程度时，就会引发一系列中毒反应，比如行为异常、生理功效紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在要求条件下，使鱼接触含不一样浓度受试物水溶液，试验最少进行24h，最好以96h为一个试验周期，在24h、48h、72h、96h时统计试验鱼死亡率，确定鱼类死亡50％时受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占主要地位。经过鱼类急性毒性试验能够评价受试物对水生生物可能产生影响，以短期暴露效应表明受试物毒害性。鱼类急性毒性试验不但用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检验废水处理有效程度，也为制订水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。试验原理2鱼类的急性毒性实验第4页CompanyLogo

1．试验鱼选择与驯养试验用鱼必须对毒物敏感，含有一定代表性，便于试验条件下喂养，起源丰富，个体健康。我国可采取试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生食蚊鱼等。本试验选取鲫鱼作为试验鱼。在同一试验中要求试验鱼必须同属、同种、同龄，最好是当年生。鱼平均体长以7cm以下为适当。金鱼体短、身宽，普通以3cm以下较为适当。同组鱼中最大体长不应超出最小体长1.5倍。试验材料3鱼类的急性毒性实验第5页CompanyLogo

选取试验鱼在试验前必须在试验室内经过驯养，使之适应试验室条件生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温水体中最少驯养7d，使其适应试验环境，不应长久养殖（＜2个月）。驯养期间，应天天换水，可天天喂食1-2次，但在试验前一天应停顿喂食，以免试验时，剩下饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率不得超出5％，不然，能够认为这批鱼不符合试验鱼要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。试验前必须挑选健康鱼，即选择体色光泽、鱼鳍完整舒展、行动活泼、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病鱼作为试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态鱼都不得作试验鱼。试验材料3鱼类的急性毒性实验第6页CompanyLogo

2．试验仪器设备（1）试验容器

试验容器普通用玻璃或其它化学惰性材质制成水族箱或水槽。容器体积可依据试验鱼体重确定，通常以每升水中鱼负荷不得超出2g（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择500mL或1000mL烧杯为试验容器。容器深度必须超出16cm，水体表面积越大越好。同一试验应采取相同规格和质量容器。为预防鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。试验容器使用后，必须彻底洗净，以除去全部毒性残留物。（2）其它

溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。试验材料3鱼类的急性毒性实验第7页CompanyLogo

3．试验用水（稀释水）及水质条件

用来驯养和配置试验液水，必须是未受污染清洁水。普通可采取天然河水、湖水或地下水，但需过滤以除去大悬浮物质。也可用自来水代替，但必须进行人工曝气或放置3d以上脱氯。假如试验目标是评价工业废水或化学物质对接纳水体影响时，则最好采取接纳水体污染源上游水作为试验用稀释水。蒸馏水不适合做稀释水，因为蒸馏水中已除去了自然界水中盐类，与实际差距太大，另外因为蒸馏器影响，有时使蒸馏水中带有对鱼类不利金属离子，影响试验结果。试验材料3鱼类的急性毒性实验第8页CompanyLogo

试验用水水质条件普通是指水温度、pH、溶解氧、硬度、水中有机物和水量等。（1）水温试验中应保持鱼类原来适应温度，普通冷水鱼在12～18℃，温水鱼在20～28℃。为使得试验结果可靠，在同一试验中，温度波动范围不要超出4℃（即±2℃）。冬天能够经过加热室内空气温度而到达调整水温目标，也能够采取电热棒直接控制调整水温。试验材料3鱼类的急性毒性实验第9页CompanyLogo

（2）pH

水pH与水生生物代谢作用有亲密关系。对毒物毒性作用也有一定影响。所以，在试验中应维持pH在鱼类适宜范围内。普通试验液pH在6.7～8.5为宜。如需调整pH，可用1M或0.1MHCl和NaOH来调整受试物贮备液pH。调整贮备液pH时不能使受试物浓度显著改变，或发生化学反应或沉淀。

（3）溶解氧溶解氧是鱼类生存必要条件，它能影响鱼类对毒物敏感性。普通温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶解氧在5mg/L以上。（4）硬度水总硬度为10～250mg/L（以CaCO3计）。试验材料3鱼类的急性毒性实验第10页CompanyLogo

1．预试验用确定正式试验所需浓度范围，可选择较大范围浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，不设平行组，试验连续48～96h。每日最少两次统计各容器内死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100％死亡浓度和96h无死亡浓度。假如依次预试验结果无法确定正式试验所需浓度范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。试验步骤4鱼类的急性毒性实验第11页CompanyLogo2．正式试验依据预试验得出结果，在包含使鱼全部死亡最低浓度和96h鱼类全部存活最好浓度之间最少设置5个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应≤2.2。每个试验浓度组应最少设2～3个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中最高溶剂浓度相同。试验鱼数目以每组试验浓度10～20尾适当，不得少于10尾。试验溶液调整至对应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机快速放入各试验容器中。转移期间处理不妥鱼均应弃除。同一试验，全部试验用鱼应30min内分组完成。试验步骤4鱼类的急性毒性实验第12页CompanyLogo

在24h、48h、72h、96h后检验受试鱼情况。假如没有任何肉眼可见运动，如鳃扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并统计死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h或6h观察各处理组鱼情况，并统计试验鱼异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积、受惊吓后运动情况等）。试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，天天最少测定一次。最少在试验开始和结束时，测定试验容器中试验液受试物浓度。试验结束时，对照组死亡率不得超出10％。试验步骤4鱼类的急性毒性实验第13页CompanyLogo1．数据处理以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率曲线。用直线内插法或常见统计程序计算出24h、48h、72h、96h半致死浓度（LC50）值，并计算95％置信限。假如试验数据不适于计算LC50，可用不引发死亡最高浓度和引发100％死亡最低死亡浓度估算LC50近似值，即这两个浓度集合平均值。试验汇报5鱼类的急性毒性实验第14页CompanyLogo

2．化学物质急性毒性分级依据LC50值大小，能够将化学物质急性毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级，如试验表3-1所表示。试验汇报5试验表3-1鱼类急性毒性试验毒性分级标准鱼起始LC50（mg/L）＜11～100100～10001000～10000＞10000毒性分级剧毒高毒中等毒低毒微毒（无毒）鱼类的急性毒性实验第15页CompanyLogo

3．编写汇报在试验汇报中应包含：试验名称、目标、试验原理、试验准确起止日期，还有以下几项：（1）试验鱼种名、起源、体重、体长、健康和驯化情况。（2）受试物质名称、起源物化性质和保留方法。（3）试验用水起源、物化性质和试验前处理等。（4）试验溶液浓度与配置方法、试验温度。（5）试验条件，如容器形式、试验液体积与深度、受试生物数目及负荷率。（6）试验开始后24h、4