临床检验方法评价专家讲座

新方法进入常规应用过程流程图临床检验方法评价专家讲座第1页临床试验室检测系统临床检验检测系统包含产生结果所需要试剂、校准物、仪器、消耗品及详细操作程序。试剂是化学溶液，以可预测方式给出分析项目标反应；可预测反应允许我们测量每一样本中存在分析物量。校准物是含有已知量分析物物质。仪器将样本与试剂混合，并将参考已知校准物值，来比较患者、室间质量评价或质控样本反应，或分析物可预测化学反应产生每一样本结果。消耗品包含装样本、分配样本和试剂和测量化学反应所需要物品。过程包含准备检验样本、准备试剂和校准物、建立和维护仪器、将样本与试剂结合、计算分析物量、及汇报结果所必须全部步骤。

临床检验方法评价专家讲座第2页临床试验室试剂选择SFDA同意;分析系统（试剂+校准品+仪器）及检测结果计量学可溯源性；试剂稳定性：（使用期、待机稳定时）及校准周期；方法学性能：精密度、线性、可比性临床检验方法评价专家讲座第3页分析方法分级决定性方法（definitivemethod）：经详尽研究还未发觉不准确度或不确定性原因方法。参考方法（referencemethod）：经详尽研究证实其不准确度与不精密度能够忽略方法。常规方法（routingmethod）：可满足临床或其它目标需要日常使用方法。临床检验方法评价专家讲座第4页临床检验方法学分类分析物决定性方法参考方法CaID-MS原子吸收分光光度法Cl电量滴定中子活化法电流滴定法KID-MS中子活化法火焰光度法Na重量分析法中子活化法火焰光度法临床检验方法评价专家讲座第5页临床检验方法学分类分析物决定性方法参考方法UreaID-MS尿素酶法GLUID-MS己糖激酶法TBIL-重氮法ALB-免疫化学法TP-双缩脲法临床检验方法评价专家讲座第6页临床检验方法分类项目名称决定性方法参考方法常规方法HbA1c-IFCCNGSP色谱免疫血细胞计数-ICSH血细胞分析仪临床检验方法评价专家讲座第7页常规方法参考方法决定性方法准确度应用范围不一样方法间关系临床检验方法评价专家讲座第8页标准品分级标准品（referencematerial）：充分均匀并含有一个或多个良好确定特征值材料或物质，用来校准仪器设备、评定测定方法或给其它物质赋值。一级标准品（原级参考物）：含有最高计量学特征，由一级参考测量程序定值；二级标准品：用一级标准品校准，二级参考方法定值。校准品（calibrator）：用二级标准品校准，拟被用于校准常规方法定值。用于对常规方法和仪器校准临床检验方法评价专家讲座第9页一级标准物质人血清无机成份分析标准物质—GBW09135血清胆固醇标准物质—GBW09138临床检验方法评价专家讲座第10页二级标准物质红细胞微粒标准物质—GBW（E）090001胆红素标准物质—GBW（E）090002氰化高铁血红蛋白溶液标准物质—GBW（E）090004纯化血红蛋白标准物质—GBW（E）090011临床检验方法评价专家讲座第11页临床检验方法评价专家讲座第12页溯源链中不确定度真值一级参考方法二级参考方法厂家标准方法厂家常规方法试验室常规方法不确定度临床检验方法评价专家讲座第13页方法选择要求（一）实用性要求在决定是否将新方法或仪器在某一试验室执行前，一些实际原因必须首先考虑。它们包含标本类型、样本量、分析能力、周转时间、试验菜单、标本处理、分析批大小、人员技能要求、每一试验成本、校准方法、校准频率、随机处理能力，质控方法、空间需求（包含试剂贮存）、废物处理要求、以及化学危险物和安全考虑。（二）性能参数与方法或仪器性能相关特征包含其准确度、分析范围、分析回收、分析灵敏度、分析特异度、空白读数、检出限、干扰、精密度、试剂稳定性、“稳健性”，及样本交互作用等。

临床检验方法评价专家讲座第14页分析方法相关基本概念校准（calibration）是指在要求条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示量值，或实物量具或标准物质所代表量值，与对应由标准所复现量值之间关系一组操作。（JIF1001-1998）临床检验方法评价专家讲座第15页分析方法相关基本概念临床检验方法评价专家讲座第16页方法评价主要内容定量试验室方法初步评价（CLSIEP10）临床化学设备操作精密度评价

（CLSI

EP5）用患者标本进行方法学比较和偏倚评定

（CLSI

EP9）定量分析方法线性（CLSI

EP6）临床化学干扰试验

（CLSIEP7）定性测试性能评定(CLSIEP12)基质效应评价（CLSIEP14）精密度和准确度性能用户证实(EP15-A)临床试验方法总分析误差预计（EP21-A)

使用ROC曲线试验室试验临床准确度评价（CLSI

GP10）临床试验室怎样定义和确定参考区间(C28-A2)NCCLSNationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandardsCLSIClinicalandLaboratoryStandardsInstitute

临床检验方法评价专家讲座第17页临床检验方法评价专家讲座第18页临床检验方法评价专家讲座第19页临床化学设备精密度评价EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices,ApprovedGuideline,1984EP5临床检验方法评价专家讲座第20页精密度内容批内不精密度批间不精密度日内不精密度日间不精密度总不精密度临床检验方法评价专家讲座第21页试验方法试剂和校准物：同一批号样本：基质与临床样本相同，2个以上浓度（参考医学决定水平）。试验天数：20天以上试验次数：天天2批，每批2个样本，每个样本重复2次临床检验方法评价专家讲座第22页精密度试验天数1批2批XX11X12X1X11-X12X21X22X2X21-X2212345临床检验方法评价专家讲座第23页批内不精密度I=总试验天数（普通为20天）j=天天测定批次（普通为2批）Xij1=第i天j批试验第一次结果Xij2=第i天j批试验第二次（重复）结果临床检验方法评价专家讲座第24页批间不精密度I=试验天数（通常为20天）Xi1=第i天第一批试验结果平均值（通常重复2次）Xi2=第i天第二批试验结果平均值（通常重复2次）临床检验方法评价专家讲座第25页日间不精密度I=试验天数X=全部结果平均值Xi＝第I天全部结果平均值临床检验方法评价专家讲座第26页总不精密度临床检验方法评价专家讲座第27页精密度性能用户核实试验最少要做5天，每批每个水平(要求2个浓度水平)作4次重复检测。利用方差分析进行数据统计。计算批内不精密度(CV或SD),并将与厂家批内不精密度比较。计算总不精密度(CV或SD)，并将与厂家总不精密度比较。或者将总不精密度与不精密度分析目标进行比较。临床检验方法评价专家讲座第28页临床检验方法评价专家讲座第29页临床检验方法评价专家讲座第30页NCCLS文件EP9-A用患者样本进行方法对比及偏倚评定同意指南1995年12月临床检验方法评价专家讲座第31页目标及用途引进新方法前或用一个方法替换另一个方法时进行偏倚分析；评价同一分析项目标两种分析方法间偏倚。临床检验方法评价专家讲座第32页评价操作要求熟悉仪器操作熟悉评价方案质量控制足够数据临床检验方法评价专家讲座第33页试验样本要求起源于健康人或患者，无干扰，尽可能防止储存；测定物浓度范围应在医学决定水平范围内均匀分布；样本数最少40例，增加数量能提升可信性临床检验方法评价专家讲座第34页对比喻法厂家要求试验室常规方法或公认参考方法。含有好精密度没有已知干扰物相同单位相对国家标准或参考方法偏倚是已知临床检验方法评价专家讲座第35页测定方法天天分别用两种方法进行测定，测定次序：1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1测定次数：最少测定5天，共40个样本临床检验方法评价专家讲座第36页数据监督常规质控：系统误差人为误差临床检验方法评价专家讲座第37页试验步骤熟悉仪器及方法搜集数据检验方法内离群点界限：（双份测定）相对差值均值4倍临床检验方法评价专家讲座第38页绘图散点图：均值散点图（X，Y）全部值散点图（Yij，Xi）偏倚图：散点图（（Yij-Xij），Xi）临床检验方法评价专家讲座第39页临床检验方法评价专家讲座第40页临床检验方法评价专家讲座第41页均值散点图（X，Y）临床检验方法评价专家讲座第42页偏差图：每次测定Y均值与X均值之差-对应X均值图临床检验方法评价专家讲座第43页两种方法间离群值目测检验界限：4倍两种方法间绝对偏倚均值绝对差值允许范围:相对差值允许范围:临床检验方法评价专家讲座第44页适合范围：

计算r，r2>=0.95范围适合r2<0.95扩大数据范围线性回归：

计算均匀离散度直观检验临床检验方法评价专家讲座第45页临床检验方法评价专家讲座第46页临床检验方法评价专家讲座第47页预期偏倚及可信范围

线性回归方程计算偏倚（高、中、低3组）解释试验结果并与内部标准比较临床检验方法评价专家讲座第48页临床检验方法评价专家讲座第49页临床检验方法评价专家讲座第50页准确度用户核实选择20份患者新鲜标本，它们内含分析物浓度分布于试验方法可汇报范围。不使用分析物浓度超出可汇报范围样品。两个方法对标本检测应在同1天4小时内完成。假如试验安排3～5天，天天进行5

7份标本检测，这么得到结论是最可靠。临床检验方法评价专家讲座第51页临床检验方法评价专家讲座第52页临床检验方法评价专家讲座第53页评价方法可接收性

1．经过试验确定误差预计与分析目标建立规范确定界限进行比较。2．当取得总误差值小于方法允许总误差时，可认为侯选方法性能是可接收。3．当一个或各种分析参数发觉大于方法允许误差，可认为侯选方法性能是不可接收。当这种情况出现时，必须改进方法性能；假如不能改进，则需要舍弃该方法。临床检验方法评价专家讲座第54页临床检验方法评价专家讲座第55页允许不精密度制订依据本国各试验室室内变异系数水平确定。依据室间质量评价允许总误差（TEa)确定允许CV%:

1/4TEa,1/5TEa,1/6TEa依据生物学变异确定允许CV%:临床检验方法评价专家讲座第56页临床检验方法评价专家讲座第57页临床检验方法评价专家讲座第58页临床检验方法评价专家讲座第59页临床检验方法评价专家讲座第60页临床检验方法评价专家讲座第61页临床检验方法评价专家讲座第62页临床检验方法评价决定图制作及应用

临床检验方法评价专家讲座第63页定量测量程序线性评价EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures:AStatisticalApproach

EP6-A临床检验方法评价专家讲座第64页目标为试验室中采取定量分析方法用户提供评价仪器或方法是否满足厂家线性指标评价方法。用户可为分析方法设定线性范围。临床检验方法评价专家讲座第65页定义试验范围（AssayRange）：或者线性范围（LinearRange)：分析系统最终输出、与被测物浓度或活性成百分比、浓度或活性值范围临床检验方法评价专家讲座第66页定义线性（Linearity）:曲线靠近直线程度量；与完整系统反应相关（是最终分析结果或解释，不但是仪器输出结果）临床检验方法评价专家讲座第67页ScopeandLimitations线性是分析方法一个特征，不一样于准确性和精密度。线性试验应该使用与待分析物基质相同样本。线性检验“系统”反应，包含校准、线性化技术、系数和仪器反应。临床检验方法评价专家讲座第68页检测系统TestingSystem全部检测过程，包含仪器，样品，人员，试剂，消耗品和程序；注：还有以下属性（方法特征）：样本类型，检测温度，湿度，等临床检验方法评价专家讲座第69页使用者需求用简单试验来检验厂家标示线性范围及定量分析方法分析范围；在试验室中作为方法学信息（方法线性）；进行线性评价试验。临床检验方法评价专家讲座第70页仪器熟悉过程执行分析过程试验室人员必须掌握仪器操作和维护程序、样本准备方法和校准。对较简单设备需要5天或更少时间。对较复杂多通道设备需要5天或更长时间。临床检验方法评价专家讲座第71页试验周期在完成仪器熟悉过程后开始试验并搜集数据。全部试验和数据采集应在同一工作日内完成。临床检验方法评价专家讲座第72页线性评价试验样本要求样本数量：验证线性：5-7个浓度水平，重复2次测定。建立线性：7-11个浓度水平，测定2-4次基质：应使用与病人样本相同样本或注明基质类型。临床检验方法评价专家讲座第73页可以使用样本病人混合血清（理想样本基质）建立线性范围：高值样本：高于上限20-30%低值样本：线性低限或更低。临床检验方法评价专家讲座第74页可以使用样本含添加物混合病人血清：加入品在没有干扰物存在时不需高纯度。经处理材料稀释混合血清用于降低分析物浓度，材料处理：透析、热处理、层析。临床检验方法评价专家讲座第75页可以使用样本生理盐水稀释混合血清：在线性试验中使用这类样本可掩盖不一样基质效应。商品质控或校准品：这类样本因为不是正常生理形式，可掩盖实际线性结果。临床检验方法评价专家讲座第76页可以使用样本不一样百分比稀释商品质控物；水溶液：普通无基质效应其它溶液：基质效应与有机溶剂相同临床检验方法评价专家讲座第77页推荐样本添加材料ALB：白蛋白干粉、humanfractionV.乙醇：无水乙醇AMS：腮腺或胰腺提取物BIL：胆红素纯品Ca:CaCO3Cl:NaCl临床检验方法评价专家讲座第78页推荐样本添加材料CHOL：胆固醇纯品或稀释质控品CO2：CaCO3CREA：标准液或高值血清-ALT：纯酶GLU：右旋糖AST：纯酶ALT：纯酶临床检验方法评价专家讲座第79页推荐样本添加材料Lipase：胰腺提取物Mg：MgCl2P:K(H)2PO4或Na(H)PO4TP：白蛋白干粉、人或牛成份VUA：在得不到高值病人样本时，使用标准贮备液或干燥尿酸。BUN：在得不到高值病人样本时，使用标准贮备液或干燥尿素。临床检验方法评价专家讲座第80页样本分析次序分析序列应为随机排列。有显著携带污染时，应用空白隔开样本。每个试验组内应最少分析5-7个不一样浓度水平样本。临床检验方法评价专家讲座第81页样本浓度范围应覆盖待评线性范围上、下限。评价结果不满意时应重新设定浓度。线性范围内最少应保留有5-7个浓度。临床检验方法评价专家讲座第82页样本准备足量混合血清。低浓度混合血清（No1）；高浓度混合血清（No5）血清（No2）：3份“No1”+1份“No5”血清（No3）：2份“No1”+2份“No5”血清（No4）：1份“No1”+3份“No5”临床检验方法评价专家讲座第83页样本浓度计算C1×V1+C5×V5浓度=----------------------------------V1+V5临床检验方法评价专家讲座第84页数据搜集x1y1-1y1-2y1-3y1-4x2y2-1y2-2y2-3y2-4x3y3-1y3-2y3-3y3-4x4y4-1y4-2y4-3y4-4x5y5-1y5-2y5-3y5-4临床检验方法评价专家讲座第85页数据评价观察有没有显著数据错误；若有显著异常时应判断是否为离群点；如离群点超出2点，则保留全部数据或重做全部试验。临床检验方法评价专家讲座第86页离群点检验用于特定浓度Y值离群点检验。将4个重复值从大到小排列（Y1到Y4）。计算：D=Y1-Y4若Y1可能是离群点，计算：D1=（Y1-Y2）/D若Y4可能是离群点，计算：D4=（Y3-Y4）/D临床检验方法评价专家讲座第87页离群点判断判断值（Criticalvalue)(0.05)0.765(0.01)0.889临床检验方法评价专家讲座第88页绘图和评价线性X-Y图，X轴为分析物浓度；反应值或仪器输出值为Y轴；目测离群值：(Y=aX+b)目测线性判断是否符合要求；进行统计学判断和评价。临床检验方法评价专家讲座第89页多项式回归分析一次方程：y=b

+b1x二次方程：y=b+b1x+b2x2

三次方程：y=b

+b1x+b2x2+b3x3

EP6-A指南主旨是利用多项式回归分析方法判定线性。多项式回归分析是研究一个因变量与一个自变量间多项式方法,即比较一阶(直线)、二阶(抛物线)和三阶(S形线)多项式回归分析方法。多项式回归分析最大优点是能够经过增加X高阶项对实测点进行迫近直至满意为止,从而建立最优多项式回归方程。临床检验方法评价专家讲座第90页临床检验方法评价专家讲座第91页临床检验方法评价专家讲座第92页临床检验方法评价专家讲座第93页临床检验方法评价专家讲座第94页注意统计学标准和临床可接收限不一样。慎用方法学线性范围从0开始。有临床意义浓度应在线性评价中：最小线性浓度医学决定水平最大线性浓度临床检验方法评价专家讲座第95页卫生部临床检验中心组织线性评价或校准验证室间质量评价计划结果可用于试验室检测项目标线性评价：Beckman自动生化分析仪器Roche或Hitachi自动生化分析仪器Olympus自动生化分析仪器临床检验方法评价专家讲座第96页临床检验方法评价专家讲座第97页试验室检验临床准确性评价NCCLGP10A临床检验方法评价专家讲座第98页GP10-AAssessmentofTheClinicalAccuracyofLaboratoryTestsUsingReceiverOperatingCharacteristic(ROC)Plots;ApprovedGuideline(1995)“用ROC曲线图评价试验室检验临床准确性”临床检验方法评价专家讲座第99页定义临床检验信息：准确性：敏感性Sensitivity特异性Specificity有用性：临床检验方法评价专家讲座第100页定义临床准确性（ClinicalAccuracy）：衡量检验项目对于不一样健康情况区分能力。如：健康与疾病；良性与恶性疾病；对治疗反应性与不反应性；预测疾病好转与恶化临床检验方法评价专家讲座第101页定义临床有用性（Usefulness）：检验信息在病人管理中实用价值，如：检验成本；假阳（或假阴）性率；有损伤小、成本低其它方法；检验技术要求；检验创伤和舒适性临床检验方法评价专家讲座第102页定义ROC：ReceiverOperatingCharacteristic受试者工作特征ROC曲线：描述试验室检验敏感性和特异性关系曲线。临床检验方法评价专家讲座第103页ROC曲线临床检验方法评价专家讲座第104页临床检验方法评价专家讲座第105页定义阳性预测值（PPV）真阳性结果数真阳性结果数+假阳性结果数临床检验方法评价专家讲座第106页定义阴性预测值（NPV）真阴性结果数真阴性结果数+假阴性结果数临床检验方法评价专家讲座第107页ROC曲线意义临床检验方法评价专家讲座第108页ROC曲线意义临床检验方法评价专家讲座第109页ROC曲线意义临床检验方法评价专家讲座第110页用ROC图进行方法比较临床检验方法评价专家讲座第111页ROC曲线绘制临床检验方法评价专家讲座第112页ROC曲线绘制进行临床准确性试验确定诊疗敏感性和特异性绘制ROC曲线图ROC分析：敏感性/特异性置信区间；ROC曲线下面积；多试验ROC曲线比较；其它临床检验方法评价专家讲座第113页ROC曲线绘制临床检验方法评价专家讲座第114页ROC曲线绘制临床检验方法评价专家讲座第115页ROC曲线制作及分析软件CLINROCMetzROCANALYZERROCLABRULEMAKERSIGNALTEP-UH临床检验方法评价专家讲座第116页ROC曲线优点利用简单易于分辨图形反应临床准确性指标；不需要确定临床决定水平；可直接用于不一样检验方法临床准确性比较临床检验方法评价专家讲座第117页ROC曲线不足不能显示实际临界值；不能提醒样本数量；ROC曲线分析参数计算复杂；缺乏实用性强计算机软件。临床检验方法评价专家讲座第118页定性试验性能评定(CLSIEP12)

定性试验（qualitativetests）仅给出阳性或阴性（是或非）试验结果。在临床试验室中使用一项新定性检验方法能够有许多理由，如使用简便、低成本、操作过程规范或能满足使用者特殊要求。但在使用新方法进行患者样本检验前，使用者必须进行相关试验准备工作，包含与其它方法比较、使用培训、正确采集标本和必要室内质量控制过程等。对定性试验方法进行评价时，使用患者样品进行重复性试验和方法比较是非常主要内容。临床检验方法评价专家讲座第119页一、定性试验临床应用在临床试验室中，定性试验可用于筛查、诊疗、确认、或监测为目标测定。试验敏感性、特异性、预测值和效率等，决定了其在临床应用范围。从临床应用角度讲，定性试验可分为筛查试验、诊疗试验和确证试验。临床检验方法评价专家讲座第120页一、定性试验临床应用筛查试验（screeningtests）筛查试验通惯用于对整个人群或特定人群中是否存在初测物检验，如大便潜血试验。作为筛查试验，通常要求检验方法有较高敏感性，以确保不遗漏真阳性结果。诊疗试验（diagnostictests）定性试验用于特定疾病诊疗或临床可疑指征判断，如微生物学培养与细菌判定。通常情况下，诊疗性试验要求方法学同时含有很好敏感性和特异性。不过，在有确证试验条件下，能够适当放宽对方法学特异性要求。确认试验（confirmatorytests）确认试验通常在筛查试验和诊疗试验之后进行，对已做出检验结果进行验证和确认，以帮助临床医生做出正确临床诊疗。确认试验普通设计为有很好特异性和较高阳性预测值。临床检验方法评价专家讲座第121页一、定性试验临床应用临界值（cutoff）试验结果处于（阴、阳性）分界点时样品中分析物浓度值，低于此值，定性试验结果为阴性，高于此值，定性试验结果为阳性。对定性试验来讲，临界值是唯一医学决定水平，当样品中被测物浓度处于临界水平时，定性试验重复检验同一样品，将产生50%阳性结果和50%阴性结果。当样品浓度在临界值以上增加时，阳性结果比率增加；而当样品浓度在临界值以下减低时，阴性结果比率增加。临床界值95%区间在样品浓度高于临界值并重复试验产生95%阳性结果和浓度低于临界值并产生95%阴性结果之间样品浓度范围。临床检验方法评价专家讲座第122页二、定性试验方法学评价评价准备在开展定性试验方法评价工作之前，操作人员应有一个熟悉和培训过程，使操作人员掌握样本处理和保留、试剂处理和保留、正确试验过程和结果解释、及质量控制（QC）操作。培训应该在不一样工作日内进行，并能使工作人员操作能力到达临床应用要求。在使用生产商提供质控物时，应按生产者要求进行，使用其它商业质控物必须注意可能存在基质效应问题。可能时，在进行方法学评价期间，应使用相同质控物。对大多数定性试验，每日进行阴性和阳性质控物测定已经足够。用于评价试验临床标本，应按要求采取。必要时，应新鲜采取，并尽快完成检测，在熟悉方法和操作培训过程结束后，能够继续方法学评价工作。临床检验方法评价专家讲座第123页二、定性试验方法学评价重复性评价在评价试验期间，应做好质量控制工作，以确保试验在预期质量目标下进行和试验数据有效性。质控物可使用试剂生产者推荐阴性和阳性质控物。重复性评价试验能够与方法学比较试验同期进行。重复性评价试验应该提供样品浓度靠近临界值时精密度结果，而用远低于或高于临界值浓度样品进行定性试验重复性评价是不适当。在临界值95%区间之外，定性方法给出相同测定结果能力（阴性或阳性）是评价其方法性能主要指标。定性试验方法重复性评价目标是确立被评价方法临界值，深入确立临界值±20%样本浓度范围是否在该方法临界值95%区间内。重复性评价试验可按以下步骤进行：临床检验方法评价专家讲座第124页二、定性试验方法学评价重复性评价1．确立方法临界值参考试剂说明书或用阳性样品进行稀释，直至重复试验给出阳性和阴性结果各占50%，此时样品浓度即为试验方法临界值。2．在临界值基础上准备出-20%浓度样品和+20%浓度样品。3．对以上低、高浓度样品分别测定20次，统计阴性及阳性结果数；重复次数低于20时，统计学意义可能降低。4．当试验结果表明“临界值”样品阴性结果和阳性结果不是各占50%时，原因可能是：被评定临界值浓度不准确、或结果数据不充分、或方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性。5．当试验结果表明+20%浓度样品产生阳性结果数≥95%，同时，-20%浓度样品产生阴性结果数≥95%，说明临界值±20%浓度范围等于或超出临界值95%区间，对于被测物浓度在±20%浓度范围以外样品，试验方法将给出稳定结果。当阳性和/或阴性结果数＜95%时，应另外准备不一样浓度试验样品，重新进行评价。临床检验方法评价专家讲座第125页二、定性试验方法学评价方法学比较1．样品种类和数量进行方法学研究时样品最好使用常规患者新鲜标本，样品量应确保评价试验方法和比较方法测定需要。样品中被测物应稳定，应尽可能用评价方法和对比喻法同时完成测定。作为最低要求，用对比喻法测定阴性和阳性样品，应分别在50例以上。常规检测时，为确保阳性样品到达50例，阴性样品可能已大大超出50例，为确保正确评价阳性样品中可能出现假阴性问题，必须确保有足够样品量。2．试验过程使用临床样品进行方法学对比研究应在10到20天内完成，首先能确保足够样品量，另首先也确保对试验方法评价在常规试验条件下进行。全部试验样品都应妥善保留，以备再次检测用。能够经过对比喻法再次测定，或使用另一个对比喻法、或使用临床诊疗提供更多信息以解释试验中问题。临床检验方法评价专家讲座第126页二、定性试验方法学评价方法学比较3．参考样品盘由一组临床样品组成，测定结果可与指定参考方法或临床诊疗相联络，对评价定性试验方法是非常有效。参考样品盘通常包含不一样浓度被测物临床样品，可能时，还包含干扰物质。