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文档简介

关于实验四细胞的冷冻保存一、实验目的掌握细胞冻存与复苏的基本原理、方法和要领熟练进行细胞冻存与复苏的操作第2页,共11页，2024年2月25日，星期天二、实验原理细胞冻存的主要目的：保存种子细胞。减少细胞被污染的危险性。减少细胞因传代培养而引起的遗传变异和形态改变。避免有限细胞系出现衰老或恶性转化。降低人力和物力。第3页,共11页，2024年2月25日，星期天冰晶细胞脱水电解质浓度变化pH变化蛋白质变性水解酶释出线粒体功能障碍细胞超微结构改变溶酶体膜透性变化核内DNA构型和生物学行为的变化细胞损伤冰晶对细胞的损伤第4页,共11页，2024年2月25日，星期天冷冻保存原则

冷冻过程要缓慢。冻存细胞必须处在对数生长期细胞浓度控制在：1×107－5×107/ml使用高浓度血清或蛋白保护剂使用合适的细胞冷冻保护剂，以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏。第5页,共11页，2024年2月25日，星期天细胞冷冻保护剂的选择对细胞无毒易穿透进入细胞，使冰点降低提高细胞膜对水的通透性常用冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜)GL(甘油)EG(乙二醇)第6页,共11页，2024年2月25日，星期天标准冷冻程序降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5～-10℃/min到－100℃时，则可迅速浸入液氮中。第7页,共11页，2024年2月25日，星期天简易冷冻程序细胞冻存管放入泡沫小盒放入-70℃冰箱3h细胞冻存管放入纱布小袋中液氮表面上停留30min直接投入液氮细胞冻存管放入泡沫小盒放入-20℃冰箱3h细胞冻存管放入纱布小袋中放入液氮灌的液氮蒸汽中，逐渐下降到液氮表面（30－40min）停留30min后，直接投入液氮中细胞冻存管装入纱布小袋液氮罐口缓慢放入，按-1℃/min，在30－40min内到达液氮表面停留30min投入液氮第8页,共11页，2024年2月25日，星期天液氮从液体向气体转化的过程中产生的深低温-196℃

第9页,共11页，2024年2月25日，星期天本次冷冻程序细胞冻存管用厚棉花包裹，放入塑料盒中或泡沫盒中，直接投入-70℃超低温冰箱中。第10页,共11页，2

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