微生物的实验室培养原创

关于微生物的实验室培养原创微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞第2页,共38页，2024年2月25日，星期天课题1微生物的实验室培养第3页,共38页，2024年2月25日，星期天一.培养基：1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养异养⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源对

不同需要，配置供生长繁殖的营养基质营养物质“吃”什么？第4页,共38页，2024年2月25日，星期天一.培养基：微生物生存的环境和营养物质2.特殊营养：生长因子（维生素、碱基等）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）3.pH、氧气的需求：4.种类：固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂分离鉴定工业生产细菌偏碱，真菌偏酸第5页,共38页，2024年2月25日，星期天牛肉膏蛋白胨培养基配方(最广泛)1000mlH2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g第6页,共38页，2024年2月25日，星期天5.配制原则⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研第7页,共38页，2024年2月25日，星期天1、关于微生物的营养，说法正确的是A、同一种物质不可能既作碳源又作氮源B、凡是碳源都能提供能量C、除水外的无机物仅提供无机盐D、无机氮源也能提供能量答案：D2、自养微生物和异养微生物最常用的碳源分别是A、CO2和CO2B、CO2和碳酸盐C、碳酸氢钠和含碳有机物D、CO2和含碳有机物答案：D第8页,共38页，2024年2月25日，星期天一）内容：1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行2、将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基进行3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行4、实验操作时应避免二.无菌技术：防止外来杂菌的污染关键技术是什么？清洁和消毒灭菌酒精灯火焰已经灭菌处理的材料和用具与周围的物品接触超净工作台第9页,共38页，2024年2月25日，星期天耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法（日常）巴氏消毒法（如：牛奶）化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌（玻璃器皿）酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min二.无菌技术：防止外来杂菌的污染.二）消毒与灭菌的区别：第10页,共38页，2024年2月25日，星期天芽孢在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。煮沸3小时才死。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.第11页,共38页，2024年2月25日，星期天孢子在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新个体。第12页,共38页，2024年2月25日，星期天判断是否需要消毒或灭菌,请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考高压蒸汽干热灭菌酒精擦拭第13页,共38页，2024年2月25日，星期天单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：三.菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体第14页,共38页，2024年2月25日，星期天S型：菌落表面光滑，不被免疫系统识别，有多糖荚膜，使人患肺炎或小鼠得败血症，有毒性。R型：菌落表面粗糙，被免疫系统识别，没有荚膜，无毒性。肺炎双球菌光滑的粗糙的第15页,共38页，2024年2月25日，星期天1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落不断搅拌第16页,共38页，2024年2月25日，星期天倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基用手摸刚不烫手第17页,共38页，2024年2月25日，星期天四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）外焰冷却试管口通过火焰冷却第18页,共38页，2024年2月25日，星期天问题讨论1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？第一步划线前灼烧目的：消灭接种环上可能存在的微生物每次划线前灼烧目的：杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。结束时灼烧的目的：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第19页,共38页，2024年2月25日，星期天2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第20页,共38页，2024年2月25日，星期天6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器第21页,共38页，2024年2月25日，星期天第22页,共38页，2024年2月25日，星期天⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍注意：沾有酒精并灼烧第23页,共38页，2024年2月25日，星期天问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。第24页,共38页，2024年2月25日，星期天⑴平板划线法：四.大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录第25页,共38页，2024年2月25日，星期天五、课题成果评价

培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录第26页,共38页，2024年2月25日，星期天六.菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃第27页,共38页，2024年2月25日，星期天3、关于牛肉膏蛋白胨培养基制备错误的是A、操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B、将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C、待培养基冷却50℃至左右时进行倒平板D、待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置

4、无菌技术包括以下几方面的叙述，其中错误的是A、对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌C、未避免周围环境微生物的污染，实验室操作应在酒精灯火焰附近进行D、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触答案：A答案：A第28页,共38页，2024年2月25日，星期天5．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B第29页,共38页，2024年2月25日，星期天⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：滴稀释菌液不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照稀释103倍稀释104倍稀释105倍第30页,共38页，2024年2月25日，星期天第31页,共38页，2024年2月25日，星期天包器材第32页,共38页，2024年2月25日，星期天包器材第33页,共38页，2024年2月25日，星期天/v_show/id_XMTE2NTU5ODAw.html微生物培养教学视频/v_show/id_XMjU4NTEwNjg4.html微生物介绍/v_show/id_XMTQ3ODE4MzY=.html微生物科学片/news/society/201105/edc502a8-cb2a-42b3-b8f1-29c31d3ca46a.shtml大肠杆菌第34页,共38页，2024年2月25日，星期天大肠杆菌大肠杆菌：是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。分布：主要生活在大肠内。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入