临床微生物标本的采集

关于临床微生物标本的采集临床微生物检测的目的协助临床医生明确疾病的诊断并治疗感染性疾病规范临床抗生素的应用帮助院感加强多重耐药菌和特殊病原菌的监测第2页,共71页，2024年2月25日，星期天从微生物标本接收后，实验室的工作就是：生物安全柜恒温培养箱第3页,共71页，2024年2月25日，星期天第4页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集、运送及处理过程中的生物安全一、采集标本过程中需戴手套、穿工作服、戴防护口罩，必要时戴防护眼镜、穿隔离服。二、采集到的原始标本应采用防漏可密封的无菌管或杯型容器收集。外加防漏可密封的塑料袋，袋上应注明标本信息以及印有生物安全标志。第5页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集、运送及处理过程中的生物安全三、用带针头的注射器采集的标本应移至无菌管内或用防护性装置套住针头，再置于密封、防漏的塑料袋内送检。四、不要将泄漏的标本送到实验室或随意处理。若需重送，旧的标本需高压灭菌后弃去。第6页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则标本的正确选择、采集和运送是实验室工作准确和有效的前提，是保证实验室质量的重要环节，。

(早、无、药、适、时机)第7页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则一、尽早采集一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌感染的治疗具有极其重要意义。采集时间最好是病程早期、急性期，确保病原菌的检出。第8页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则二、遵守无菌操作在采取血液、穿刺液或脑脊液等正常状态下的无菌部位标本，应严格注意无菌操作，不得被其他部位细菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位应采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。

盛放标本的容器应无菌。第9页,共71页，2024年2月25日，星期天临床常见的各种送检标本无菌标本血液骨髓脑脊液胸腹水关节液胆汁非无菌标本痰尿大便生殖道标本耳泌物第10页,共71页，2024年2月25日，星期天微生物标本送检天然棉花及木棒√×bact第11页,共71页，2024年2月25日，星期天微生物标本送检√×bact第12页,共71页，2024年2月25日，星期天微生物标本送检√×第13页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则三、在抗生素应用前采集

感染会发生生命危险，临床医生会在细菌学检验出结果之前使用抗生素治疗，而抗生素的使用将影响病原菌的检出。第14页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则四、选择不同采集时机和标本种类

根据临床症状和流行病学资料，可大致对感染性疾病的病原体作大致的估计，根据病程和感染部位的不同，选择合适时机采集不同标本。如伤寒患者，发病第一周应采集血液、第二周应采集粪便和尿液，否则影响细菌的检出率。第15页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集的基本原则五、适量标本标本量太少，可能导致假阴性结果；标本尽量不用以天然棉花及木棍制成的拭子采集标本（不饱和脂肪酸、干燥）；

第16页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的运送1.把握好时间标本采集后立即送检，送检时间不得超过2h，否则会影响病原菌的检出。

少量液体（<1ml）或组织（<1cm3）应在15~30min内送至实验室，以免蒸发、干燥及暴露于周围环境。第17页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的运送2.控制好环境

一般性的细菌培养标本延迟送检时，应放置4℃冰箱保存，且不超过24h。

若疑似标本中有对周围环境敏感的微生物，如淋病奈氏菌、脑膜炎奈氏菌和流感嗜血杆菌（低温易死亡），应立即运送和处理。通常血液、脑脊液、生殖道、眼或内耳标本不要冷藏保存。第18页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的运送3、做好包装和防护临床标本及感染性物质，不管运送距离有多远，应严格注意标本的包装，并且应采取安全防护措施。第19页,共71页，2024年2月25日，星期天标本送检样本第20页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的接受、处理原则当标本送至实验室时，应有病人基本信息、标本来源、采集时间等。实验室遇到下列情况标本时拒绝接受

1.不正确的运送温度

2.不正确的运送工具

3.延长送检时间

4.标本容器上未贴病人信息或贴错

5.标本有泄漏

6.盛标本的容器有破损

7.标本有明显污染

8.标本量不足或已干涸

9.24h内重复送检的标本（不包括血培养）

10.对某种试验不适合的标本第21页,共71页，2024年2月25日，星期天临床常见标本采集、运送与接种第22页,共71页，2024年2月25日，星期天临床常见的标本：

血液

痰及鼻咽分泌物尿液

粪便

穿刺液（脑脊液、胆汁、胸腹水等）

脓液及创伤感染分泌物

生殖道第23页,共71页，2024年2月25日，星期天血液

正常人的血液是无菌的。当细菌侵入时可引起菌血症或败血症。第24页,共71页，2024年2月25日，星期天血液培养的意义：菌血症感染性心内膜炎临床不明原因的感染假体植入后感染（人工关节、人工瓣膜）静脉导管相关性感染肺炎第25页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养采集指征：高热（>38℃）或低温（<36℃）寒战白细胞增多（计数>10*109/L）皮肤黏膜出血休克多器官衰竭血压降低C反应蛋白升高及呼吸加快血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少第26页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养中出现的问题血培养阳性检出率偏低

血培养污染问题

血培养瓶的保存与运送不当

没有及时送检送检率偏低采血时机不合适药物对细菌培养的影响采血量不足影响细菌生长套数的影响第27页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养送检率

国内多数三甲综合医院10～20瓶/天

复旦大学中山医院20～50瓶/天

香港玛丽医院200瓶/天

台湾大学医院300瓶/天第28页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养中出现的问题血培养阳性检出率偏低

血培养污染问题

血培养瓶的保存与运送不当

没有及时送检送检率偏低采血时机不合适药物对细菌培养的影响采血量不足影响细菌生长套数的影响第29页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本采集时机使用抗菌药物之前或停药24小时后寒战和发热高峰30~60min内（研究表明细菌通常在寒战或发热前1小时左右进入血流）第30页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本采集时机

怀疑感染性心内膜炎或其他静脉内感染（如导管相关性感染）时，可分开时段分部位采集：第31页,共71页，2024年2月25日，星期天导管相关血流感染导管相关血流感染（CatheterRelatedBloodStreamInfection,简称CRBSI）

指带有血管内导管或者拔除血管内导管48小时内的患者出现菌血症或真菌血症，并伴有发热（38℃）、寒颤或低血压等感染表现，除血管导管外没有其他明确的感染源。

第32页,共71页，2024年2月25日，星期天导管送检指征

在ICU病房内携带中心静脉导管超过48小时，出现原因不明的发烧或低血压的患者，儿童患者出现低体温者。第33页,共71页，2024年2月25日，星期天送检方法

1、保留情况：采取至少2套血培养，其中至少一套来自外周静脉，另外的一套则从导管中心无菌采获，两个来源的采血时间必须接近（<5分钟），各自做好标记。2、不保留情况：从独立的外周静脉无菌采集2套血培养。无菌状态下取出导管并剪下5cm导管尖端或近心端送往实验室进行Maki半定量平板滚动培养。第34页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养中出现的问题血培养阳性检出率偏低

血培养污染问题

血培养瓶的保存与运送不当

没有及时送检送检率偏低采血时机不合适药物对细菌培养的影响采血量不足影响细菌生长套数的影响第35页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养瓶需氧瓶厌氧瓶一套血培养=1瓶需氧+1瓶厌氧第36页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本采集方法采集量：成人每瓶采血量为8~10ml，儿童每瓶采血量为1~3ml

采用“双侧双瓶”原则。即2套血培养（1套为1瓶需氧和1瓶厌氧）。成人每套不少于10ml，婴幼儿仅用需氧瓶，采用两只需氧瓶为2套血培养，不少于4ml。

儿童患者因血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人第37页,共71页，2024年2月25日，星期天采血的总量是影响检出病原菌的重要因素之一。

采血量一套血培养（抽20ml血液）二套血培养三套血培养

阳性检出率

65%80%96%第38页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本采集时机+采血量

急性感染患者，应在5min内从不同部位分别采2~3套血培养发热原因不明患者，在24h内应从不同部位采2~3套，间隔不少于60min。可疑心内膜炎患者，起始采集3套血培养（每次间隔不少于30min），如果24h内培养阴性，则应继续采集2套血培养亚急性感染性心内膜炎，需在30min至1h内连续抽取数套血培养（以证明细菌感染的连续性）然后才开始抗菌药的经验治疗。第39页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养中出现的问题血培养阳性检出率偏低

血培养污染问题

血培养瓶的保存与运送不当

没有及时送检送检率偏低采血时机不合适药物对细菌培养的影响采血量不足影响细菌生长套数的影响第40页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本采集方法

静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。采用真空采血装置可降低污染。采血部位：成人采用肘静脉，儿童和婴幼儿多为颈部和腹股沟。成人不建议采集动脉血，不宜从静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。严格消毒原因为：采血部位皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染第41页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养瓶接种顺序有学问用注射器采血时：首先接种厌氧瓶避免空气进入，所以接种顺序为先接种厌氧瓶，后需氧瓶。用蝶形针采血时：血液首先装入需氧瓶，以免装置里的空气传送到厌氧瓶中。所以它的顺序为先接种需氧瓶，后接种厌氧瓶。特殊情况：如果抽取血液量很少时，血液应首先接种到需氧瓶中，因为多数菌血症是由需氧菌和兼性厌氧菌感染导致的，剩余的血再接种厌氧瓶。第42页,共71页，2024年2月25日，星期天血培养中出现的问题血培养阳性检出率偏低

血培养污染问题

血培养瓶的保存与运送不当

没有及时送检送检率偏低采血时机不合适药物对细菌培养的影响采血量不足影响细菌生长套数的影响第43页,共71页，2024年2月25日，星期天血液标本的运送采集后的血培养应在1h内送达，不能及时送达时，需置室温下保存，不可冷藏或冷冻。(因为若感染菌为肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌遇冷易死亡)第44页,共71页，2024年2月25日，星期天泌尿生殖道标本一、尿液标本

适应症：尿路感染肾结核泌尿系结石膀胱排空功能受损前列腺增生的患者第45页,共71页，2024年2月25日，星期天送检指针：出现尿频、尿急、尿痛等膀胱刺激症，肉眼脓尿或血尿，尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性，不明原因的发热或留置尿管的患者出现发热、尿道口有脓性分泌物等症状，泌尿系统疾病手术前等情况第46页,共71页，2024年2月25日，星期天采集时间：抗菌药物使用前或停药5天后采集尿液标本，通常采集晨尿，确保尿液在膀胱内停留4h以上。·第47页,共71页，2024年2月25日，星期天采集方法

1、清洁中段尿采集法：嘱患者晨起用温和肥皂水清洁会阴后，弃去前段尿，留取中段尿10ml~15ml于灭菌容器内，立即加盖送检。2、膀胱穿刺采集法：严格无菌操作消毒耻骨联合上皮肤，用无菌注射器穿刺入膀胱抽取5~10ml尿液于灭菌容器送检。该方法带给病人有一定的痛苦3、导尿法：直接导尿采集法、留置导尿采集法第48页,共71页，2024年2月25日，星期天采集方法直接导尿按常规方法消毒会阴后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，先弃去前段15ml，再留取10~15ml膀胱尿液于无菌容器送检。留置导尿用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液10~15ml，置于无菌容器中送检第49页,共71页，2024年2月25日，星期天采集方法四、集尿法怀疑结核分枝杆菌感染时，可用一清洁容器留24h尿，取其沉渣10~15ml送检。第50页,共71页，2024年2月25日，星期天尿液标本的运送标本采集后及时送检和接种，室温下存放时间不得超过2h（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4~8℃保存时间不得超过24h，当应注意冷藏保存不用于疑为淋病奈瑟菌感染病人第51页,共71页，2024年2月25日，星期天常见临床标本的采集及处理泌尿生殖道标本二、生殖道和尿道标本送检指针：女性患者外阴阴道炎细菌性阴道炎阴道溃疡尿道炎宫颈炎子宫颈炎子宫内膜炎输卵管炎卵巢脓肿男性患者尿道炎附睾炎前列腺炎生殖器第52页,共71页，2024年2月25日，星期天标本采集（根据不同感染种类和病变特征采集不同的标本）

尿道分泌物患者排尿1h后采集，男性用生理盐水局部清洗，采取从尿道口溢出的脓性分泌物，或尿道内2~4cm旋转拭子停留20s后取出分泌物；女性清洗尿道口后，从尿道内压迫尿道，使分泌物溢出后采集标本，无肉眼可见的脓液，可用灭菌拭子轻轻深入前尿道内2~4cm旋转拭子停留20s取样送检生殖器标本用无菌盐水和手术刀清除溃疡面，暴露出溃疡基底，渗出物积聚较明显时，用拭子或吸管采集第53页,共71页，2024年2月25日，星期天送检指针：腹泻病人出现以下任一情况时建议采集粪便标本进行培养：

腹泻、大便每日≥3次，粪便的性状异常，可为稀便、水样便、粘液便、脓血便及血便，可伴有恶心、呕吐、食欲不振、发热、腹痛及全身不适等；病情严重者，因大量丢失水分引起脱水、电解质紊乱甚至休克；粪便涂片镜检白细胞≥5个/hp；抗菌药物治疗后腹泻；来自疫区的患者常见临床标本的采集及处理

粪便标本第54页,共71页，2024年2月25日，星期天采集方法自然排便采集法自然排便后，挑取有脓血或粘液部分的粪便，液状粪便取絮状物盛于无菌容器内或置于保存液中送检，若不能及时送检，应按1:10比例与ph7.0磷酸盐甘油缓冲液混合保存，以防病原菌死亡而影响检出率第55页,共71页，2024年2月25日，星期天直肠拭子采集法适于排便困难患者或婴幼儿。第56页,共71页，2024年2月25日，星期天采集量一般用拭子采集大于2g的标本送检，若标本为水样，采集大于2ml的标本置于无菌容器中送检第57页,共71页，2024年2月25日，星期天采集时间及频率采集时间尽可能在发病早期（急性期）和应用抗菌药物治疗之前，采集新鲜粪便送检，以提高检出率。怀疑沙门菌感染时，应在发病2周以后采集标本送检采集频率重复采集标本的频率每日最多1次第58页,共71页，2024年2月25日，星期天痰标本适应症：咳嗽咳出脓性痰或铁锈样痰咯血鲜血和痰中带血等呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛、X线检查提示肺部有炎性浸润或胸腔积液

发热伴有白细胞以及中性粒细胞升高或CRP明显升高第59页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的采集一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨起床后进行体位引流，可采集痰标本。自然咳痰采集法：在留取痰之前，用温清水反复漱口，以减少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器中。气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本。第60页,共71页，2024年2月25日，星期天不合格标本的处理对下列不合格的标本应拒收

申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符痰标本呈水样或唾液样痰涂片白细胞<10/LP,上皮细胞>25/LP

标本容器溢漏，无盖子痰标本留取放置时间太长，超过2h

未用指定的无菌容器留痰做细菌培养第61页,共71页，2024年2月25日，星期天标本的运送标本采集后需尽快（小于2h）送至实验室，不及时运送可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等病原菌由于不适应外界环境和自溶想象而死亡。延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌感染标本不能冷藏），以免杂菌生长，但保存标本应在24h小时内处理。对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者检验标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全防护。第62页,共71页，2024年2月25日，星期天脓液及创伤感染分泌物标本采集送检指针：局部感染：红、肿、热、痛和功能障碍全身症状：轻重不一、常有发热、头痛、全身不适、乏力食欲减退等。（白细胞计数增加、crp升高）疑为软组织的急性化脓性炎症、化脓性疾病、脓肿、创伤感染第63页,共71页，2024年2月25日，星期天采集方法：开放性脓肿：包括眼、耳、扁桃体、术后切口感染等脓性分泌物首先用无菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，用无菌棉拭子先蘸少许无菌生理盐水，然后采取靠近组织部分脓液及病灶深部的分泌物立即送检。闭锁性脓肿：指完整脓壁与体腔，及与外界不相通的脓肿采集前需对患者病灶局部皮肤或粘膜表面用2.5%-3%碘酊消毒、75%乙醇脱碘，用无菌注射器将脓肿内容物吸出。第64页,共71页，2024年2月25日，星期天

明明送检的是脓液，可培养结果却是“无菌生长”？第65页,共71页