形态学实验-生物材料石蜡包埋实验

实验十生物材料石蜡包埋实验

（洗涤、脱水、透明）石蜡切片的主要步骤：一、取材二、固定三、洗涤四、脱水五、透明六、透蜡与包埋七、切片八、贴片九、染色十、封藏一、实验原理：1、洗涤洗涤是洗去渗入细胞内部的固定液。因为材料中的固定液有的会妨碍染色；有的会发生沉淀或结晶；有的会继续与组织作用，使材料变坏等。因此要彻底洗净固定液。2、脱水:

材料经洗涤后含有大量的水分，必须用脱水剂脱尽里面的水分，有利于材料的透明和制片的保存。因为水分会使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的，因此只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入到组织当中。3、透明：是指利用透明剂既可与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，将脱水剂替换出来，使石蜡能顺利进入材料中，达到不同程度的透明状态。常用的脱水剂：

酒精、丙酮、甘油、正丁醇、二氧乙环等。常用的透明剂：

二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油等。透明剂都是石蜡的溶剂，绝大多数不能与水混合。二、实验步骤1、洗涤

材料自固定液中取出，放入指形管或广口瓶，加入半管水，用纱布将管口扎住，置于水槽内，进行流水冲洗。注意水流不宜太急，以免冲坏材料。流水冲洗时间一般需要12～24小时。冲洗时应注意以下事项：

水溶性的固定剂：需用流水冲洗。酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗，以免水洗后固定作用消失。福尔马林固定剂：除长期存放外，一般可以不冲洗。

含有升汞固定剂：组织经固定后应在冲洗剂－水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。含有铬酸的固定剂：组织在冲洗时最好置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。

2、脱水材料自低浓度至高浓度的酒精进行脱水。一般经50%、70%、80%、95%直至纯酒精。每级停留约30分钟至1小时。如需过夜，应停留在70%酒精中。脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象。脱水时的注意事项：①脱水必须要在有瓶盖的器皿中进行，尤其是高浓度乙醇很容易吸收空气中的水份。②组织由低浓度向高浓度的乙醇转移时，以避免组织过度收缩和过度硬化。要用吸水纸吸干余液，以免将水份带入。③在低浓度酒精中，每级停留时间不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。④在高浓度或纯酒精中，每级停留时间不宜过长，否则会使组织变脆，影响切片。3、透明透明也是渐次由低浓度至高浓度进行，要求每级更换动作要迅速，盖好相应的盖子。材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸15～30分钟，再转入纯二甲苯中透明（至透明为止），一般15～30分钟。若透明过程中，材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回纯酒精中重新脱水，然后再透明。总的透明时间不宜超过3h。具体操作步骤：取材(鼠肝、脾、肾、心3mm)

→固定(10％福尔马林，12～24h)

↙洗涤↙

脱水→50%乙醇，30min→70%乙醇,30min

→80%乙醇，30min

→95%乙醇,30min

→无水乙醇，30min

透明→50%纯乙醇﹢50%二甲苯，15min

→纯二甲苯，30min（出现雾状，重新脫水)

三、实验用品1、器材：水浴锅、透蜡格、包埋机、石蜡模子、包埋盒、镊子、方盘等。2、试剂：各级酒精（50、70、80、95、100％）、二甲苯、石蜡3