离体蛙心灌注及药物的影响

离体蛙心灌注及药物的影响[教学要求]掌握离体蛙心的制备方法和实验方法。掌握多种因素对离体蛙心的影响和原理。熟悉MedLab系统的实验记录和实验结果处理方法。

[实验相关知识]1.维持心脏正常收缩的条件多种因素对蛙心活动的影响

2.离体蛙心的特性

正常蛙心舒缩正常结构与功能适宜

的体液环境适当的负荷正常的神经支配Na+K+H+Ca2+

温度PH？去甲肾上腺素（NA)乙酰胆碱(Ach)阿托品毒毛旋花子甙K离体林格液改变离体蛙心的制备仪器连接MedLab参数设置（表6-3）实验观察,处理和记录[实验步骤]离体蛙心的制备蛙心暴露结构辨认穿线结扎和备用插管和游离蛙心腹面心室左心房右心房动脉圆锥左主动脉弓右主动脉弓背面静脉窦后腔静脉左前腔静脉右前腔静脉蛙心的正常解剖结构

心脏背面观心脏腹面观动作要轻柔，不要伤及静脉窦和传导组织。切口位置要适当。插管成功标志。[插管注意事项]仪器连接注意事项：换能器插管液面高度烧杯调零实验观察、处理和记录1）观察和记录正常蛙心收缩曲线

(幅度，疏密度，规律性，基线)[实验步骤]2）观察无机离子的影响①等量0.65％NaCl

②1～2滴2%CaCl2

③1～2滴1%KCl3）观察受体激动剂和拮抗剂的影响②1滴1:100,000乙酰胆碱③1滴1:2,000阿托品,观察曲线变化，再滴入1滴Ach①1～2滴1:10,000去甲肾上腺素5）观察温度的影响6）观察酸碱的影响换入等量4℃的冷林格液①1～2滴

2.5%NaHCO3②1～2滴

3%乳酸，出现变化后，再加1-2滴

2.5%NaHCO34）观察强心苷类药物的影响1滴0.025%毒毛幻花苷K溶液图12.5%NaHCO3对蛙心收缩活动的影响图2先加3%乳酸再加2.5%NaHCO3对蛙心收缩活动的影响[注意事项]

换液时蛙心插管内的液面应保持大致相同的高度。林格液和药物交换时,所用吸管要用严格区分。加药时先加1滴并注意观察,作用不明显时再补加,

作用一旦出现应立即换回新鲜的林格液。施加处理因素前应先记录正常曲线，及时打标记。[结果处理]截取各种处理因素下有代表性的蛙心收缩曲线，用“画图”制成单页图打印出来。1.等量

0.65%NaCl

2.1～2滴

2%CaCl23.1～2滴

1%KCl收缩力下降收缩力下降4.1～2滴

去甲肾上腺素(NE)5.1滴

乙酰胆碱（Ach）总结收缩力增强收缩力加强，HR加快HR减慢，收缩力下降6.1滴1:2,000阿托品,观察曲线变化，再滴入Ach7.1滴0.025%毒毛花苷K溶液

8.换入等量4℃的冷林格液9.1～2滴

2.5%NaHCO3总结HR加快收缩力加强收缩力减弱，HR减慢收缩减弱10.1～2滴

3%乳酸，出现变化后，再加1-2滴2.5%NaHCO3总结收缩力减弱[实验报告]讨论:

分析各处理因素影响蛙心收缩的原理。结论:各处理因素对蛙心活动是何影响。[预习]

半数致死量的测定生理科学实验的实验设计林格液的成分（P15）NaClKClCaCl2NaHCO3图30.65%NaCl对蛙心收缩活动的影响图42%CaCl2对蛙心收缩活动的影响图51%KCl对蛙心收缩活动的影响图6

NA对蛙心收缩活动的影响

图7Ach对蛙心收缩活动的影响图8先加阿托品再加Ach对蛙心收缩活动的影响图9强心甙对蛙心收缩活动的影响图104℃冷林格液对蛙心收缩活动的影响[实验相关知识]1.维持心脏正常收缩的条件多种因素对蛙心活动的影响

2.离体蛙心的特性

各处理因素对蛙心的作用及原理影响无机离子：0.65％NaCl；2％CaCl2；1％KCl药物：NA；Ach；阿托品；毒毛旋花子甙K温度：低温林格液酸、碱：NaHCO3；乳酸【实验步骤】离体蛙心的制备仪器连接实验计算机设置实验观察、处理和记录【注意事项】

勿伤静脉窦，插管时注意方向和手法保持心脏湿润保持液面高度一致滴管勿混用，勿碰蛙心插管，加药勿过量做好标记，出现作用立即换新鲜林格液右主动脉弓蛙心结构图腹面左主动脉弓左心房右心房动脉圆锥心室背面心室左心房房室沟窦房沟静脉窦连接处后腔静脉右心房蛙心结构图1243穿线、插管离体蛙心实验装置2.MedLab实验参数设置见P84表6-3实验步骤*实验时请调用“蛙心灌流”定制实验*信号输入前先“调零”离体蛙心实验装置3.连接实验装置实验步骤仪器连接注意事项：换能器插管液面高度烧杯调零4.实验观察、处理和记录1）观察和记录正常蛙心收缩曲线

(幅度，疏密度，规律性，基线)2)改变无机离子浓度①等量换入0.65%Nacl②2%Cacl2（1~2滴）③1%Kcl（1滴）3)应用受体激动剂和拮抗剂1:10000NA（1~2滴）1:100000Ach（1滴）1:2000阿托品（1滴）

+1:100000Ach（1滴）实验步骤4)应用强心甙类药0.025%毒毛幻花苷K溶液（1~2滴）实验步骤5）观察温度的影响换入等量4℃的冷林格液6）观察酸碱的影响①1～2滴2.5%NaHCO3②1～2滴3%乳酸，出现变化后，再加1-2滴2.5%NaHCO35.实验后处理2)分析各处理因素对蛙心收缩曲线影响及其原理，写出实验报告。1)截取各种处理因素具有代表性的蛙心收缩曲线，制成单页图打印出来。实验步骤附图离体蛙心灌注及药物的影响实验结果1.等量0.65%NaCl,收缩力减弱，心率加快等渗溶液，其内环境仅有[Na+],[Cl-]，缺乏心肌收缩所必需的Ca2+,K+,尤其是Ca2+的缺乏，Ca2+内流减少，导致心肌收缩力降低。

2%CaCl2，收缩力增加，心率减慢

3.1%KCl，收缩力减弱，心率减慢4.NA，收缩力增加，心率加快5.Ach，收缩力减弱，心率减慢结果分析

胞外K+浓度升高，Ca2+内流减少（竞争）胞外K+浓度升高，静息电位绝对值减少，低于-55~-60mV时，快Na＋通透失活，兴奋性下降，心率减慢，甚至停止在舒张期NA与心肌β受体结合后，激活AC，Ca2+通道开放增加，正性变力、变时、变传导Ach与心肌细胞膜上M-R结合，抑制钙通道，同时激活GK蛋白，K+外流增加，负性变力、变时、变传导6.阿托品+Ach，无明显变化阿托品为M胆碱受体拮抗剂，但离体蛙心无神经支配，无ACh释放，加入阿托品后无明显作用；再加入Ach，由于阿托品已将M胆碱受体阻断，故Ach无作用。7.毒K，收缩力增加抑制Na+-K+－ATP酶使细胞内Na+量升高，K+下降，胞内Na+升高，可促进细胞内外Na+-Ca2+交换,使细胞内Ca2+增多，从而加强心肌细胞收缩力。（毒K的作用有赖于胞外Ca2+的存在）8.4℃冷林格液，收缩力减弱，心率减慢温度过低时，肌凝蛋白头部ATP酶活性降低酶活性降低，代谢水平降低，各离子通道蛋白活性降低，心脏收缩活动减弱，心率减慢。图30.65%NaCl对蛙心收缩活动的影响图42%CaCl2对蛙心收缩活动的影响图51%KCl对蛙心收缩活动的影响图6

NA对蛙心收缩活动的影响

图7Ach对蛙心收缩活动的影