中草药对育肥猪链球菌病的预防及其生长性能、免疫指标的影响

摘要：试验选取140日龄、体重86kg、健康的育肥猪80头，随机分为4组。A组、B组、C组为中药添加组，D组为对照组。预试期7d，正式试验期40d。试验结果表明，与D组相比，A组、B组、C组育肥猪的平均日增重显著升高(p＜0.05），B组、C组育肥猪的平均日采食量显著升高(p＜0.05），A组、B组育肥猪的料重比显著降低(p＜0.05）；B组和C组发病率显著氏于D组(p＜0.05），与A组差异不显著(p＞0.05）、病死率B组和C组显著低于A组和D组(p＜0.05）。猪血清中肿瘤坏死因子-α含量A组、B组、C组均显著降低(p＜0.05），白细胞介素-10含量A组、B组、C组均显著增加(p＜0.05）。可见，中药在临床上可以显著提高患有链球菌病育肥猪的生长性能，降低血清炎性细胞因子含量，提高抗炎因子含量，对育肥猪链球菌病有较好的预防作用。在非洲猪瘟疫情常态化背景下，在生猪养殖中疫病防控为重中之重。在生猪的疫病中，猪链球菌病是疫病防控工作重要的内容之一，是生猪养殖领域发生率相对较高的细菌性传染病，该病致病性强、致死率高。近年来饲料行业规范管理，饲料添加抗生素被全面禁用，该病的发生率逐渐增加。中草药具有来源广泛，价格便宜，毒副作用小、不易产生耐药性等优点，逐渐被用于畜禽疾病的防治。本试验旨在研究中草药对育肥猪链球菌病的预防及生长性能、免疫指标的影响。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌株猪链球菌血清型2型，在本地养殖场采集分离。1.1.2中药材料金线重楼，野菊花，白头翁，紫花地丁，忍冬藤，黄连，甘草，金银花，栀子，郁金，白芍，黄芩，黄柏，蒲公英，柯子，白毛夏枯草，七叶一枝花。以上中药均购自怡康药店。1.1.3试验动物育肥猪由本地猪场提供，本试验于2021年9—11月在商洛兴旺猪场完成。选取140日龄、体重86kg、健康的育肥猪80头。每组20头，共分4组。其中A组使用方剂一(金线重楼16g、野菊花65g、白头翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B组使用方剂二(黄连50g，甘草20g、金银花15g、栀子20g、郁金30g、白芍30g、黄芩30g、黄柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C组使用方剂三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黄芩30g、野菊花65g、七叶一枝花20g、金银花15g、紫花地丁35g），D组为空白对照组。1.1.4基础日粮基础日粮配方见表1，复合预混料购自新乡市酵守康饲料有限公司。表1基础日粮配方注：预混料为每千克饲粮提供：铜10mg、I0.5mg、锌80mg、铁72mg、硒0.32mg、锰72mg、维生素A8000IU、维生素D3

1600IU、维生素E28mg、维生素K3

0.5mg、泛酸2.5mg、维生素B1

1.52mg、维生素B2

5.2mg、生物素0.1mg、叶酸0.25mg、维生素B12

0.04mg、维生素B6

3.0mg、烟酸20mg。1.2试验方法1.2.1方剂与药液煎煮制备方剂一：金线重楼16g、野菊花65g、白头翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g。方剂二：黄连50g，甘草20g、金银花15g、栀子20g、郁金30g、白芍30g、黄芩30g、黄柏30g、蒲公英15g、柯子40g。方剂三：忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黄芩30g、野菊花65g、七叶一枝花20g、金银花15g、紫花地丁35g。加入药物重量10倍量的洁净水，浸泡后煎煮，煮沸后文火煎30min，用四层纱布过滤药液，药渣加入8倍量药重的水，煮沸后文火煎30min，过滤药液，每副合并2次药液置于4℃冰箱保存备用。1.2.2饲养及给药对育肥猪进行正常的饲养管理，饲料和饲喂方式均不改变。在各中药试验组的饲料中按每头一服药量拌入饲料中饲喂，每天早晚各1次。在试验第7天通过口服猪链球菌血清型2型2.13×107

CFU/g攻毒。试验40d。1.2.3测定指标和方法第8天开始临床观察试验动物，主要观察精神、食欲和排便情况；记录发病率、死亡率。1.2.3.1生长性能饲喂试验开始与结束前，分别记录试验猪的初重和末重，试验育肥猪空腹12h，称重，试验结束后统计各组试验育肥猪的总采食量，计算猪平均日采食量、平均日增重及料重比。平均日增重=总增重/(试验天数×试验猪头数)平均日采食量=采总食量/(试验天数×试验猪头数)料重比=平均日采食量/平均日增重1.2.3.2血清细胞因子在前腔静脉进行采血，置于干净的离心管中等待血清的析出，在低温离心机中以3000r/min，离心15min，取上清液分装，及时测定血清指标。使用ELISA方法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白细胞介素-1(interleukin-1，IL-1）、白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10）、干扰素-α(interferon-α，IFN-α）含量。所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所，具体操作参考说明书。1.2.4生物试验取病死猪淋巴、肝脏、脾脏、关节液，加生理盐水研磨过滤。过滤液接种(20±2)g健康小白鼠，12～72h后观察其病理反应。观察感染后分离出的细菌，及LD50。1.2.5数据统计应用SPSS19.0软件对各组的发病率和病死率进行显著性分析。2结果与分析2.1中草药对育肥猪生长性能、猪链球菌病预防效果和血清细胞因子的影响由表2可以看出中草药对育肥猪生长性能、猪链球菌病预防效果和血清细胞因子的影响。与D组相比，A组、B组、C组育肥猪的平均日增重显著升高(p＜0.05），B组、C组育肥猪的平均日采食量显著升高(p＜0.05），A组、B组育肥猪的料重比显著降低(p＜0.05）。与D组相比，A组、B组、C组的发病数、病死数均少于D组；B组、C组发病率显著低于D组(p＜0.05）A组和B组间发病率差异不显著(p＞0.05）；B组、C组和A组病死率显著低于D组(p＜0.05）。由表4可知，与D组相比，猪血清中TNF-α含量A组、B组、C组均显著降低(p＜0.05）。IL-10含量A组、B组、C组均显著高于D组(p＜0.05）；IL-1和IFN-α含量各组间差异不显著(p＞0.05）。表2中草药对育肥猪生长性能、猪链球菌病预防效果和血清细胞因子的影响注：同列数据肩标字母相同表示差异不显著(p＞0.05)，肩标字母不同表示差异显著(p＜0.05)。A组使用方剂一(金线重楼16g、野菊花65g、白头翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B组使用方剂二(黄连50g，甘草20g、金银花15g、栀子20g、郁金30g、白芍30g、黄芩30g、黄柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C组使用方剂三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黄芩30g、野菊花65g、七叶一枝花20g、金银花15g、紫花地丁35g），D组为空白对照组。2.2病理剖检结果病死猪可见四肢内侧皮肤发红和充血，对病死猪进行剖检，可见淋巴结肿大和充血。腹腔浆膜可见大量黄色浆液。部分关节囊膜有出血症状。2.3生物试验结果12～72h后接种小白鼠均死亡，从死亡白鼠体内分离细菌，在显微镜下呈卵圆形、无鞭毛、链状排列。3讨论根据中兽医辨证论治原则，猪链球菌病属于“热毒炽盛”，所以本次试验选取的都是清热解毒类中药，金线重楼消肿止痛、金银花疏散风热、白头翁清热解毒、黄柏解毒疗疮、忍冬藤疏风通络、紫花地丁凉血消肿、野菊花消肿解毒、蒲公英消肿散瘀、栀子凉血解毒、白芍解热镇静、郁金疏肝解郁、黄芩泻火解毒、黄连清热泻火等。3.1中草药对生长性能的影响刘仲昊等在育肥猪日粮中分别添加金银花粗提物、葛根粗提物和混合粗提物(金银花粗提物+葛根粗提物），与对照组相比，各试验组育肥猪的平均日采食量和平均日增重均有提高趋势，其中混合提取物组显著提高。申学林等研究育肥猪肉质时发现复方中草药能够改善猪肉的瘦肉质。陈晓明等试验表明，将一定量中草药渣添加至断奶仔猪日粮中进行饲喂，日增重指标有明显的提升，料重比呈下降趋势，其中腹泻率的下降尤为明显。和绍禹等挑选三元杂交生长猪做试验，饲喂试验结果表明，添加了中草药添加剂的试验组，育肥猪的生长速度加快，采食量及日增重明显提升，饲料利用率得到明显改善，料重比和病猪数明显降低。戴玲等用大蒜、黄芪、构树叶等六味中草药配制成中草药饲料添加剂对育肥猪生产性能和肉品质的影响，结果表明，在平均日增重和饲料利用率均显著高于空白组，氨基酸和脂肪酸的含量均显著高于空白组。谷新利等用黄茅、白术、熟地黄等中草药添加剂饲喂育肥羔羊，羔羊的日增重、饲料利用率显著提高。本试验中与D组相比，A组、B组、C组的平均日增重显著升高，B组、C组的平均日采食量显著升高，A组、B组的料重比显著降低，可能是中草药增强猪对链球菌病的抵抗能力，食欲较好。3.2中草药对猪链球菌病的预防冯沙沙等人用黄连、大黄、黄柏、黄芩、连翘、石榴皮、丹参、诃子、乌梅等中药对猪链球菌做了体外抑菌试验，均有不同程度的抑菌作用。刘启志等使用板蓝根、金银花、黄连、蒲公英、马齿苋、野菊花、连翘七味中药对猪链球菌病进行预防试验，在临床上对猪链球菌病有很好的预防作用，并且效果优于西药。潘任桃等将茶皂素与4种抗菌药物联用，测定其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。郭洋认为猪链球菌病综合征型为“热入营血，毒陷心包，扰动肝风证”，治疗原则为“清热凉血，平肝熄风”，使用方剂钩藤犀角地黄汤进行治疗，结果疗效较好。本试验中，A组、B组、C组的发病数、病死数均少于D组空白对照；发病率B组、C组为20%，A组为30%，D组为40%，B组、C组和D组显著降低；病死率B组、C组为0，A组为33.33%，D组为62.5%，病死率显著降低，D组与其他三组差异极显著。A组的发病率高于B组、C组，可能由于A组使用的中药种类少于其他两组。3.3中草药对血清细胞因子的影响汪德刚等认为中草药富含多种有效活性成分，如多糖、苷类、挥发油生物碱等物质，这些成分能够提高机体免疫和体液免疫。蔡进研究发现在日粮中添加黄芪多糖、益母草粉、甘草粉、山药粉能显著提高断奶前仔猪免疫力。谢红兵等研究表明，中草药饲料添加剂能明显提高猪只机体内猪瘟血清抗体、胰岛素和甲状腺素T4水平，对仔猪的免疫能力也有明显的增强。杜改梅等试验结果同样表明，中草药饲料添加剂能够增强猪的体液免疫能力。张林丽等研究表明，细胞因子是机体内部分子量小而生物学活性较高的一类物质，主要由免疫细胞、血管内皮细胞、表皮细胞等多类细胞经过刺激而生成，主要参与炎症、细胞增殖与凋亡及免疫应答等。本试验中与D组相比，猪血清中TNF-α含量A组、B组、C组均显著降低，IL-10含量A组、B组、C组均显著增加；IL-1和IFN-α含量4组差异不显著。本试验中药成分可能通过阻断ERK、MAPKs等蛋白磷酸化途径，从而抑制信号转导通路的激活，下调COX-2、iNOS等蛋白的表达量，进而抑制巨噬细胞合成TNF-α等炎性