免疫浊度测定检验技术

检验技术－－免疫浊度测定IMMUNOASSAYIA授课教师：郑军1免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫测定分类免疫浊度测定

g~ng标记免疫测定ng~pg2免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫浊度测定3免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫沉淀反应海德堡曲线Heidelberg’sCurve4免疫浊度测定检验技术5/8/2024抗原浓度测定范围抗体过剩抗原过剩Ag*Ab5免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫浊度测定分类透射浊度法散射浊度法6免疫浊度测定检验技术5/8/2024透射浊度法和散射浊度法的光路检测器A(透射浊度法)检测器B(散射浊度法)

I0I浑浊样品光源7免疫浊度测定检验技术5/8/2024反应物含量与散射浊度遵守HeidelbergerCurve。内容：当抗体量恒定时，抗原与抗体结合，形成免疫复合物的反应与散射光信号响应值的上升成正比。同时散射信号亦随抗原抗体结合时间的增加而曲线上升。8免疫浊度测定检验技术5/8/2024AnalyteAntibodyOtherstuff

Analyte-antibodycomplexingNowbigenoughtoscatterlightToosmalltodetectopticallyWhathappensinsidetheflowcell?9免疫浊度测定检验技术5/8/2024321TimeScatterScatterSignalVersusTime

Nephelometry1.Bufferaddition2.SampleAddition3.AntibodyadditionFluidinthecellhascauseslittlescatterAddingsampleincreasesscatterslightlyAddingantibodycausesalargeincreaseinlightscattering10免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫浊度测定分类终点法速率法11免疫浊度测定检验技术5/8/2024终点法定时散射比浊分析Fixedtimenephelometry12免疫浊度测定检验技术5/8/2024基本原理：免疫沉淀反与散射比浊分析相结合的技术。沉淀反应是在抗原抗体相遇后立即进行，到沉淀形成信号变化巨大影响散射的精确度，因此进行检测时会人为的进行几秒的延迟。13免疫浊度测定检验技术5/8/2024速率散射浊度法基本原理：是一种抗原抗体结合反应的动态测定法。速率即指在抗原抗体反应的测定过程中，每一单位时间内两者结合的速度，将各单位时间内抗原与抗体形成复合物的速率及复合物颗粒形成的散射信号连接在一起，即形成动力学分析方法。14免疫浊度测定检验技术5/8/2024321TimeScatterMeasuretheRATEAfterAntibodyAddition

RateNephelometry1.Bufferaddition2.SampleAddition3.AntibodyadditionFirstderivative:rateofchangeofscatterovertime;

thisistheSLOPEofthecurveRate15免疫浊度测定检验技术5/8/2024CONCENTRATIONRATE在速率峰基础上完成的标准曲线16免疫浊度测定检验技术5/8/2024速率法的特点：测定的是抗原抗体反应的第一阶段。快速，灵敏度高，可检测微量样品。检测的是速率，因此理论上讲不受本底影响。
17免疫浊度测定检验技术5/8/2024抗原过剩的测定18免疫浊度测定检验技术5/8/202419免疫浊度测定检验技术5/8/2024RATEofSCATTER抗体过量时的反应抗原过量时的反应60850反应时间(秒)ARRAY抗原过量自动检测加入校正液20免疫浊度测定检验技术5/8/2024透射浊度法检测器A(透射浊度法)检测器B(散射浊度法)

I0I浑浊样品光源21免疫浊度测定检验技术5/8/2024抗体试剂的要求1特异性2亲和力3反应时保持抗体过剩测定范围应包括高于及低于正常值的50%5测定的精密度应在5%左右22免疫浊度测定检验技术5/8/2024校正曲线：聚乙二醇的增强作用抗原浓度C1C2C3吸光度4%聚乙二醇不加聚乙二醇23免疫浊度测定检验技术5/8/2024NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析BenefitsAbilitytoexpandthemenuintohighsensitivityassaysincluding:Ferritin,Digoxin,andIgE.NIReliminatestheinterferenceofbiologicalsubstancessuchasbiliribinandhemoglobin.24免疫浊度测定检验技术5/8/2024NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析优点扩展检测菜单，增加高敏项目分析：如铁蛋白，地高辛

，IgE，超敏CRP等近红外波长分析消除生物物质如胆红素和血色素的干扰25免疫浊度测定检验技术5/8/2024NIR：940nm波长近0oC检测角检测颗粒大小：200~500nm直径速率法测定26免疫浊度测定检验技术5/8/2024NIPIA：940nm

LED光源速率散射法：670nm激光光源27免疫浊度测定检验技术5/8/2024免疫浊度

自动分析系统28免疫浊度测定检验技术5/8/2024先进独特的原理·两种技术(透射法+散射法)，四种方法：-速率散射比浊法(蛋白检测)-速率抑制散射比浊法(TDM)-近红外颗粒速率法免疫分析(RateNIPIA)-速率抑制NIPIA(低分子量TDM)29免疫浊度测定检验技术5/8/2024严密的仪器运行系统·真正24小时待机·检测速度达每小时180测试·液面探测系统全程监控反应过程·试剂冷藏系统－增加试剂稳定性·自动校正光源30免疫浊度测定检验技术5/8/2024简便的操作系统·四个缓冲液位－完成1400个测试·39个半永久性反应杯·灵活的系统界面：触屏、鼠标、键盘·每日保养少于1分钟·穿刺式试剂盖，不需开关瓶·一次编程72个样本，每个样本24个项目·完善的用户自定义系统，与原装试剂同时运行31免疫浊度测定检验技术5/8/2024准确稳定的结果·真正实现抗原过量检测(所有项目)，避免假阴性结果·NIPIA排除生物活性物质非特异性干扰·稳定的原装试剂：开瓶效期18-24个月·单点定标，有效期超过28天·完善的用户自定义系统，与原装试剂同时运行32免疫浊度测定检验技术5/8/2024周到的样本处理系统·原试管上机·全面条形码系统·真正的急诊插入·样本检测项目的随机组合33免疫浊度测定检验技术5/8/2024如何正确阅读自动化浊度分析仪的说明书34免疫浊度测定检验技术5/8/2024规格：

RIgG1×50ml普通瓶型RIgA1×50ml普通瓶型RIgA1×50ml普通瓶型35免疫浊度测定检验技术5/8/2024用途：

本试剂用于测定血清或血浆中免疫球蛋白IgG、IgA及IgM的含量。适用于半/全自动生化分析仪。36免疫浊度测定检验技术5/8/2024原理：

人血清或血浆中免疫球蛋白G/A/M与其相应抗体（羊抗人免疫球蛋白G/A/M血清）在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。与通过同样处理的校准血清比较，即可计算出样品中免疫球蛋白G/A/M含量。37免疫浊度测定检验技术5/8/2024试剂盒组成：

R：

IgG试剂：羊抗人IgG血清消脂剂R：

IgA试剂：羊抗人IgA血清消脂剂R：

IgM试剂：羊抗人IgM血清消脂剂STD：免疫球蛋白G/A/M校准血清

38免疫浊度测定检验技术5/8/2024样品要求：样品为空腹血清、血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗1.0ml血液）。样品应在低温条件下运输保存，样品中Ig在2～8℃保存可稳定7天，冰冻保存可稳定3个月。39免疫浊度测定检验技术5/8/2024基本参数：方

法：终点法主波长：340nm反应温度：37℃副波长：700nm反应时间：10min40免疫浊度测定检验技术5/8/2024操作具有个人特征性。41免疫浊度测定检验技术5/8/2024计算及校准及质控

使用多点非线性/样条函数校准模式由仪器自动生成校准曲线后测定样品含量或以各标准管浓度值作为横坐标，吸光度变化值作为纵坐标，手工绘制校准曲线图，查阅该图即可得样品含量。1.建议使用四川迈克科技公司提供的Ig校准品进行校准。2.推荐使用卫生部临检中心提供的免疫质控品进行室内质控。42免疫浊度测定检验技术5/8/2024性能指标43免疫浊度测定检验技术5/8/20241.测定范围：IgG：0.00～40.00g/L，γ≥0.99IgA：0.00～6.20g/L，γ≥0.99IgM：0.00～5.08g/L，γ≥0.9944免疫浊度测定检验技术5/8/20242.精密度：IgG：批内、批间平均CV分别为2.5%；4.5%IgA：批内、批间平均CV分别为3.5%；7.0%IgM：批内、批间平均CV分别为3.5%；7.0%45免疫浊度测定检验技术5/8/20243.准确度：不准确度≤15%4.空白吸光度：试剂在340nm处，10mm光径下，吸光度应小于0.150。46免疫浊度测定检验技术5/8/2024注意事项1.如果样品中Ig含量超过测定范围，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数