生物技术之层析技术

生物技术实验常用研究技术层析技术1生物技术之层析技术5/9/2024引言

1850年德国科学家朗格首先发现了色谱分离的现象，当他把一种有颜色的物质滴到一张滤纸上，观察到它们扩散成一圈一圈的圆环。

层析法也称色谱法，是1906年俄国植物学家茨维特（MichaelTswett）发现并命名的。他将碳酸钙细粉装入玻璃管内使其成柱形，然后把石油醚抽提的植物叶子的色素溶液倾入，让其通过碳酸钙柱，接着用石油醚洗涤，于是奇迹出现了，在吸附柱的不同部位出现了绿色的叶绿素，黄色的叶黄素和胡萝卜素，混合物的不同色素组分得到了分离。当时茨维特把这种色带叫作“色谱”，茨维特把他开创的方法叫色谱法（Chromatography)。2生物技术之层析技术5/9/20243生物技术之层析技术5/9/20244

层析技术（chromatography）又称色谱技术、层离技术等，是一组相关技术的总称。

层析技术是利用混合物中各组分的物理化学性质(分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等)的不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而达到分离的技术。

4生物技术之层析技术5/9/20245层析技术具有分离精度高、设备简单、操作方便等优点，样品可多可少，既可用于实验室的研究工作，又可用于工业生产，还可与其他分析仪器配合，组成各种自动分析仪器。层析技术是当前获得高纯度产物最有效的分离纯化技术。5生物技术之层析技术5/9/20246主要内容第一节概述第二节凝胶层析技术第三节

离子交换层析技术第四节

吸附层析技术第五节亲和层析技术6生物技术之层析技术5/9/20247第一节概述一、基本概念层析系统：任何层析过程都是在两个相中进行的，一个是固定于支持物上的固定相，另一个是流经固定相的流动相，层析系统就是由固定相和流动相组成的。当流动相流过加有样品的固定相时，由于样品中各组分的理化性质的差异，受固定相的阻力与流动相的推力的影响不同，因而各组分在固定相与流动相之间的分布（含量对比）不同，从而使各组分以不同的速率移动，达到分离物质的目的。7生物技术之层析技术5/9/20248第一节概述配合相应的光学、电学和电化学检测手段，可用于定性、定量和纯化某种物质，其纯度高达99%。固定相

固定相是由层析介质组成。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在纤维素或硅胶上的溶液），但这个液体必须附载在某个固体物质上，该物质称为载体或担体（support）。这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。它对层析的效果起着关键的作用。8生物技术之层析技术5/9/20249基本概念流动相

在层析过程中，推动固定相上待分离的物质向一定方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一。固定相与流动相，两相互不相溶9生物技术之层析技术5/9/202410

层析法是基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使混合物中各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，并使各组分以不同速率移动，从而达到分离的目的。二、基本原理10生物技术之层析技术5/9/202411柱层析系统的基本组成层析柱+层析剂上样洗脱系统检测系统收集系统三通阀收集器检测器泵泵流动相料液DCBA层析柱（a）层析系统基本组成11生物技术之层析技术5/9/202412时间（或流出体体积）流出组分浓度ABCD层析剂选择和预处理装柱平衡上样洗脱检测收集层析剂再生和保存柱层析的基本操作（b）分离出组分峰图12生物技术之层析技术5/9/2024(1)分辨力高(2)分析效率高(3)灵敏度高(4)操作简便，应用广泛局限性：在定量分析中需要纯制得标准物质；不能精确地解决物质的化学结构问题三、层析法的特点13生物技术之层析技术5/9/2024气-固(GSC)

气-液(GLC)液-固(LSC)

液-液(LLC)1.按流动相的形式不同气相层析GC液相层析LC以气体作为流动相以液体作为流动相四、层析技术分类14生物技术之层析技术5/9/20242.按层析的原理可分为吸附层析分配层析凝胶层析亲和层析离子交换层析层析技术分类15生物技术之层析技术5/9/20243.按操作形式不同柱层析平面层析：包括纸层析、薄层层析、薄膜层析等层析技术分类是将固定相装在柱内，使样品沿一个方向移动，以达到分离目的。是用滤纸作为液体的载体，点样后，用流动相展开，使组分达到分离。是将适当粒度的固定相均匀涂铺在薄板上。点样后，用流动相展开，使组分达到分离。是将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜，以类似纸层析的方法进行物质的分离。16生物技术之层析技术5/9/202417第二节常用的层析方法凝胶层析离子交换层析亲和层析吸附层析分配层析17生物技术之层析技术5/9/2024（一）凝胶层析又称为凝胶排阻层析、分子筛层析、凝胶过滤法等。——是指混合物随流动相流经装有凝胶作固定相的层析柱时，混合物中各种物质因分子大小不同而被分离纯化的技术。18生物技术之层析技术5/9/2024凝胶层析柱中装填着许多直径小于1mm的凝胶颗粒，颗粒内部不是实心的，而是三维多孔网状结构。

1.凝胶层析的原理固定相（凝胶）——三维空间网状结构19生物技术之层析技术5/9/2024凝胶层析法样品固定相流动相小分子被延滯小分子大分子较快流出分子筛效应：分子大小不同,在凝胶受到的阻滞作用有差异,从而造成各组分在凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。20生物技术之层析技术5/9/2024在洗脱过程中，混合物样品流经凝胶柱，大分子物质因其直径大于凝胶网孔的孔径，不能进入凝胶颗粒内部，只能沿着凝胶颗粒的空隙随溶剂流动，流程短而移动速度快，先流出层析柱；小分子组分由于其分子直径小于网状结构的孔径，可进入凝胶颗粒内部，流程长而移动速度慢，比大分子物质后流出层析柱，分子大小不同的混合物因此得到分离。

1.凝胶层析的原理21生物技术之层析技术5/9/2024凝胶层析不同大小的分子流过多孔凝胶→→分子大的组分先流出，分子小的组分后流出→→各组分便按分子从大到小的顺序依次流出22生物技术之层析技术5/9/202423生物技术之层析技术5/9/202424生物技术之层析技术5/9/202425生物技术之层析技术5/9/20242.凝胶层析的介质凝胶是一种多孔网状结构物质。层析用的凝胶一般都呈球形，颗粒的大小通常以目数来表示。层析的分辨率和流速与凝胶颗粒大小有关。颗粒大，流速快，但分离效果差；颗粒小，分离效果较好，但流速慢。一般常用的是100~200目。目前常用的有交联葡聚糖凝胶，交联琼脂糖凝胶，丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶以及Superdex。26生物技术之层析技术5/9/202427

是最传统的凝胶介质。由天然高分子葡聚糖与其它交联剂(3-氯-1,2环氧丙烷)交联而成的凝胶。国外商品名为Sephadex。主要由PharmaciaBiotech生产。常见的有三类：——SephadexG系列、SephacrylS系列和SephadexLH系列。

（1）葡聚糖凝胶：27生物技术之层析技术5/9/2024结构：基本骨架：葡聚糖（dextran）交联剂：3-氯代-1,2-环氧氯丙烷使葡聚糖之间通过醚键交联聚合而成的三维空间网状结构。葡聚糖凝胶：凝胶型号与交联度、吸水量的关系：交联度：如SephadexG25,G50,G100,数字越小，交联度越大，凝胶网状结构越紧密。吸水量与数字关系：如G25，表示吸水量为1g干胶吸水2.5g.28生物技术之层析技术5/9/202429（2）琼脂糖凝胶交联琼脂糖凝胶是由琼脂糖与1,3-二溴异丙醇交联而成的多孔网状结构。商品名为SepharoseCL。此类产品通常有Sepharose2B、Sepharose4B、Sepharose6B三种，分别代表含琼脂糖凝胶2%、4%、6%的凝胶。该凝胶具有良好的机械性能，分辨率高，分离范围广，广泛用于蛋白质的分离纯化和亲和层析的载体。29生物技术之层析技术5/9/202430

（3）聚丙烯酰胺凝胶丙烯酰胺与N,N’-亚甲基双丙烯酰胺交联而成。商品名为Bio-Gel。改变亚甲基双丙烯酰胺的浓度，就可以得到不同交联度的产物。聚丙烯酰胺凝胶的分离范围、吸水率等性能基本近似于Sephadex。pH为2~11之间比较稳定，能耐受强去垢剂与变性剂的影响L;非常亲水，基本不带电荷，吸附效应较小,流速快，分辨率高。不会象葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶那样可能生长微生物。丙烯酰胺凝胶商品型号有Bio-gelP-2到Bio-gelP-300等10种，其阿拉伯数字表示排阻极限。30生物技术之层析技术5/9/2024由丙烯酰基葡聚糖与甲叉双丙烯酰胺共聚生成的刚性凝胶，化学性质稳定，有良好的机械性能，可高温消毒，分辨率高，广泛用于蛋白质的分离与提纯。

（4）Sephacryl凝胶：31生物技术之层析技术5/9/2024一种由Phamarica公司生产的新型凝胶过滤介质，有高交联度多孔琼脂糖与葡聚糖共价结合而成，是目前分辨率和选择性最高的凝胶过滤介质。其物理化学性质稳定，能耐受强去垢剂与变性剂的影响，可高温消毒，流速快，分辨率高。现有Superdex30

Superdex75Superdex200三种型号。

（5）Superdex：32生物技术之层析技术5/9/2024生物大分子的纯化分子量测定脱盐及去除小分子杂质3.凝胶层析的应用33生物技术之层析技术5/9/2024凝胶层析的优点凝胶是一种不带电荷的惰性载体，结构稳定。操作条件较温和。样品得率高，重复性好，可进行大量样品的分离纯化。凝胶层析的缺点要求样品和洗脱液的粘度很低。凝胶颗粒网络孔径大小非常有限,所以可被纯化的物质的分子量范围受到限制。凝胶结构对某些溶质分子具有吸附作用。4.凝胶层析的特点34生物技术之层析技术5/9/2024（二）离子交换层析离子交换层析是在以离子交换剂为固定相。利用其对需要分离的各种离子结合力的差异而将混合物中的不同离子进行分离的层析技术。此法广泛应用于很多生化物质(例如氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、核苷和有机酸等)的分析、制备、纯化，以及溶液的中和、脱色等方面。35生物技术之层析技术5/9/2024

离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的某种离子进行可逆的交换性质来分离离子型混合物的层析方法。

——依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化。

1.离子交换层析的基本原理36生物技术之层析技术5/9/2024离子交换层析的基本原理离子交换剂——不溶于水的带有电荷基团的惰性高分子聚合物。包括基质、电荷基团(或功能基团)和反离子三部分。离子交换剂的基质是一类具有特殊网状立体结构的聚合物颗粒，其物理化学性质稳定，不溶于水和许多有机溶剂。基质上交联有较多的酸性或碱性基团，这些酸性或碱性基团通过静电作用可结合带相反电荷的离子（反离子）。当流动相中存在带电荷的离子时，就可与先结合在离子交换剂上的反离子进行可逆的交换。纤维素—O—CH2—

COO-—Na+纤维素阳离子交换剂组成示意图37生物技术之层析技术5/9/2024根据可交换离子的性质，离子交换剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。阳离子交换剂：交联酸性基团，能和流动相中的阳离子交换。例如：

R-SO3-H++Na+→R-SO3-Na++H+胶体胶体阴离子交换剂：交联碱性基团，能和流动相中的阴离子交换。例如：R-N+(CH3)3OH-+Cl-→R-N+(CH3)3Cl-+OH-离子交换层析的基本原理38生物技术之层析技术5/9/2024离子交换层析的基本原理示意图++++———++++++++++—+++39生物技术之层析技术5/9/2024流动相中，不同离子化合物带电荷数量不同，与离子交换剂相互作用的强弱也不同。因此，可以通过提高流动相中的离子强度或改变pH值得方法，将结合在离子交换剂上的反离子从离子交换柱上依次洗脱下来，达到分离纯化的目的。离子交换层析的基本原理40生物技术之层析技术5/9/2024带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来；带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。41生物技术之层析技术5/9/2024

两性离子如蛋白质、酶类、多肽和核苷酸等物质与离子交换剂的结合力，主要取决于它们的物理化学性质和在特定pH条件下呈现的离子状态。当pH低于等电点(pI)时，它们带正电荷能与阳离子交换剂结合；反之，pH高于pI时，它们带负电荷能与阴离子交换剂结合。pH与pI的差值越大，带电量越大，与交换剂的结合力越强。

离子交换层析之所以能成功地把各种无机离子、有机离子或生物大分子物质分开，其主要依据是离子交换剂对各种离子或离子化合物有不同的结合力。离子交换层析的基本原理42生物技术之层析技术5/9/2024离子交换层析的基本原理43生物技术之层析技术5/9/20242.离子交换剂通过化学方法将酸性或碱性基团交联在惰性基质上可获得离子交换剂。常用的基质有纤维素，葡聚糖凝胶，交联琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶等。根据交换基团酸碱性的强弱，阳离子交换剂又分为强酸型和弱酸型，阴离子交换剂又分为强碱型和弱碱型。在实际工作中，可根据被分离的物质的性质，选用适当类型的离子交换剂。分离碱性蛋白质常用阳离子交换剂，分离酸性蛋白质常用阴离子交换剂。分离蛋白质样品时一般常用弱型交换剂。44生物技术之层析技术5/9/2024离子交换剂对溶液中不同离子具有不同的结合力，这种结合力的大小是由离子交换剂的选择性决定的。强酸性(阳性)离子交换剂对H＋的结合力比对Na＋的小；强碱性(阴性)离子交换剂对OH－的结合力比对Cl－的小得多；弱酸性离子交换剂对H＋的结合力远比对Na＋的大；弱碱性离子交换剂对OH－的结合力比对Cl－的大。离子交换剂45生物技术之层析技术5/9/2024低盐高盐分离结束46生物技术之层析技术5/9/20243.洗脱在离子交换层析中一般常用梯度洗脱，通常有改变离子强度和改变pH两种方式。改变离子强度——洗脱过程中逐步增大离子强度，从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来。改变pH的洗脱——对于阳离子交换剂一般是pH从低到高洗脱，阴离子交换剂一般是pH从高到低。由于pH可能对蛋白的稳定性有较大的影响，故一般通常采用改变离子强度的梯度洗脱。

增强洗脱液与离子交换剂的结合力

降低分离物与离子交换剂的结合力47生物技术之层析技术5/9/20244.离子交换层析的特点样品处理量大，分离过程具有浓缩作用；分辨效率较高，所需柱长较短，可在较高流速下操作；吸附作用机理明确，非特异性吸附小，产品回收收率高。离子交换层析既可用于生物大分子物质的分离纯化，又可用于小分子物质的分离纯化，还可以用于硬水软化以及污水处理等方面。48生物技术之层析技术5/9/202449生物技术之层析技术5/9/202450生物技术之层析技术5/9/20245.离子交换层析的实验室应用除去离子（纯净水）聚苯乙烯树脂广泛的应用于高纯水的制备、硬水软化以及污水处理等方面

分离纯化多肽蛋白、氨基酸、核酸及其他带电的生物分子改变成分（青霉素-Na＋——青霉素-K＋）浓缩与提取（抗生素、蛋白质、工业废液中微量金属的提取）离子型化合物分离发展：自动化方向与光谱技术结合－－专门用途的综合性自动分析仪与计算机相连－－进行自动分析与自动控制51生物技术之层析技术5/9/2024四、应用

分离多肽蛋白、氨基酸、核酸及其他带电的生物分子52生物技术之层析技术5/9/202453（三）吸附层析（adsorptionchromatography）吸附作用是指某些物质能够从溶液中将溶质浓集在其表面的现象。吸附剂吸附能力的强弱与被吸附物质的化学结构、溶剂的本质有关。在不同条件下，吸附剂与被吸附物之间的吸附力不同。当改变吸附剂周围溶剂成分时，吸附剂对被吸附物质的亲和力便发生变化，使被吸附物质从吸附剂上解脱下来，这一解脱过程称为“洗脱”或“展层”。1.吸附层析概念53生物技术之层析技术5/9/2024541.吸附层析概念指混合物随流动相通过吸附剂时，由于吸附剂对不同物质的吸附力不同，从而使混合物分离的方法。吸附层析就是以吸附剂为固定相，根据待分离组分与吸附剂之间的物理或化学吸附力差别而达到分离目的的层析技术。优点：容易保持组分活性，操作简单缺点：吸附容量小，选择性差，无机吸附剂性能不稳定54生物技术之层析技术5/9/202455物理作用的范德华吸附：无选择性，吸附速度快，吸附的过程是可逆的。化学吸附：由原子价力的作用引起。有选择性，吸附速度较慢，不易解吸。吸附层析概念55生物技术之层析技术5/9/2024562.吸附层析基本原理56生物技术之层析技术5/9/2024

由于吸附剂的吸附能力可受溶剂影响而发生改变，样品中物质被吸附剂吸附后，用适当的洗脱液冲洗，改变吸附剂的吸附能力，使之解吸，随洗脱液向下移动。当解吸下来的物质向下移动时，又遇到前面新的吸附剂又重新被吸附。此被吸附的物质再被后来的洗脱液洗脱下来而使其下移动。经如此反复的吸附—解吸—再吸附—再解吸的过程，物质可沿着洗脱液的前进方向移动，经过一段时间以后，该物质会向下移动一定距离。吸附层析基本原理57生物技术之层析技术5/9/2024此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。不同的物质由于吸附力和解吸力不同，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质，移动速度就较快。所以在洗脱过程中各组分便会由于移动速率不同而逐渐分离出来，这就是吸附层析的基本过程。吸附层析基本原理58生物技术之层析技术5/9/2024根据操作方式不同3.吸附层析分类柱层析（columnchromatography）薄层层析（thinlayerchromatography）吸附层析59生物技术之层析技术5/9/202460生物技术之层析技术5/9/202461生物技术之层析技术5/9/2024

薄层层析(Thinlayerchromatography)

薄层层析是以涂布于玻璃板或塑料膜等载体上的基质为固定相，使之形成均匀的薄层，以液体为流动相的一种层析方法。层析板展开剂薄层色谱62生物技术之层析技术5/9/2024

薄层层析(Thinlayerchromatography)其方法是把吸附剂均一地铺在一块玻璃板或塑料膜上形成薄层，待分离的样品点在薄层一端，在密闭容器中用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对不同物质吸附力大小不同，因此当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，易被吸附的物质相对移动的较慢，较难吸附的物质则相对地移动得快一些。经过一段时间的展开，不同的物质就被彼此分开，最后形成互相分离的斑点。63生物技术之层析技术5/9/2024戊糖（木糖）：黄绿已糖（果糖、葡萄糖）：棕红、灰绿二糖（蔗糖）：兰褐三糖64生物技术之层析技术5/9/2024薄层层析的优点：1.展层时间短，薄层层析分离混合物一般仅需15-60min；2.设备简单，操作方便，既适用于分析，也适用于制备；3.灵敏度高，可检出微量物质。4.分离能力强，斑点集中。65生物技术之层析技术5/9/2024经过适当的时间以后，不同的物质各自形成区带，如果被分离的是有色物质的话，就可以清楚地看到色带(色层)。如果被吸附的物质没有颜色，可用适当的显色剂（喷雾显色）或紫外光观察定位。4.吸附层析显色66生物技术之层析技术5/9/20245.吸附层析的应用氨基酸、肽、糖类、脂类、苷（皂苷）类物质的分离、鉴定纯净水、医药用水的制备药液脱色67生物技术之层析技术5/9/2024分配系数：当一种溶质分布在两个互不相溶的溶剂中时，它在流动相和固定相两相内的浓度之比是个常数，称为分配系数。

K（分配系数）=分配系数与温度、溶质和溶剂的性质有关，当两相做相对运动时，不同组分可得到分离。(五）分配层析（partitionchromatography）利用混合物在两种或两种以上的不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法，叫分配层析。1.概念68生物技术之层析技术5/9/2024固定在载体上的液体称为固定相，用做洗脱的液体称为流动相，则混合物各组分在两相间发生不同的分配现象而逐渐分开，形成色层。载体在分配层析中只起负担固定作用，它们是一些吸附力小、反应性弱的惰性物质如淀粉、纤维素、滤纸等。固定相液体均匀覆盖于载体表面，固定相除水外，还有稀硫酸、甲醇、仲酰胺等强极性溶液。流动相采用比固定相极性小或非极性的有机溶剂。概念69生物技术之层析技术5/9/2024分配系数小的溶质在流动相中的分配的数量多，移动慢；分配系数大的溶质在固定相分配的数量多，移动快，因此可彼此分开。2.分配层析基本原理hH70生物技术之层析技术5/9/2024纸层析是以滤纸作为载体的层析技术，分配原理属于分配层析的范畴。滤纸纤维上的羟基具有亲水性(能吸收22%左右的水)，吸附一层水作为固定相，纸纤维与有机溶剂的亲和力很小，所以某些有机溶剂，如醇、酚等为常用的流动相。3.纸层析71生物技术之层析技术5/9/2024纸层析——基本过程72生物技术之层析技术5/9/2024将待分离物质上样于滤纸一端，使流动相溶剂浸入移动。当流动相沿滤纸经过样品时，样品在水和有机溶剂这两相之间不断进行分配，由于几种待分离物质有不同的分配系数，因而在两相之间发生分配现象，最后逐渐分布到滤纸的不同部位。分配系数较大的成分，在纸上随流动相移动速率就小，其层析点位置离原点的位置就较近。反之，分配系数较小的成分，其移动速率就大，层析点位置离原点也远。纸层析——基本过程73生物技术之层析技术5/9/2024原点溶剂前沿氨基酸显色点XY纸层析示意图Rf=74生物技术之层析技术5/9/2024物质在滤纸上移动的速率可用Rf值(比移值)表示：

Rf值取决于被分离物质在两相间的分配系数以及两相的体积比。由于在同一实验条件下，两相体积比是一常数，所以Rf值决定于分配系数。不同物质的分配系数不同，Rf值也不相同，由此可以根据Rf值的大小对物质进行定性分析。纸层析——Rf值(比移值)Rf=75生物技术之层析技术5/9/2024溶剂前沿溶质最高浓度中心原点中心溶质最高浓度中心至原点中心距离溶质前沿至原点中心距离Rf值计算示意图76生物技术之层析技术5/9/2024根据操作方式不同纸层析分类垂直型水平型纸层析将圆形滤纸置于水平位置，溶剂由中心向四周扩散是将滤纸条悬挂，使流动相向上或向下扩散77生物技术之层析技术5/9/202478生物技术之层析技术5/9/2024

为了显示层析斑点位置，可根据物质的性质不同，采用显色剂显示或紫外光显示。(1)显色剂显示：被分离物质与显色剂生成有颜色的化合物，显示斑点位置。常用喷雾法、浸渍法或涂刷法。(2)紫外光显示：有些物质有紫外光吸收性质，如核苷酸类物质。有些物质受紫外光照射会发出荧光，如维生素B1、B2等，所以可在紫外光照射下观察到被分离物质的斑点。

纸层析显色79生物技术之层析技术5/9/2024层析后的斑点显示出来后，计算出各斑点的Rf值，就可以对物质进行定性。纸层析定性分析纸层析小实验动画演示80生物技术之层析技术5/9/202481也称为亲和色谱、功能层析、生物专一性吸附或选择层析。它是一种分离和纯化生物高分子化合物非常有效的方法。大多数生物高分子化合物都具有和某些相对应的专一分子发生可逆性结合的特性。例如，酶与底物（或其辅酶、辅助因子、竞争性抑制剂等），抗原-抗体、激素-受体、DNA-RNA等，通过某些次级键相互结合，并在一定条件下又可解离。（五）亲和层析（AffinityChromatography）81生物技术之层析技术5/9/20