实验七-维生素C的定量测定-2-6-二氯酚靛酚法

■

一、实验目的■

二、实验原理■

三、器材仪器和主要试剂■

四、实验操作■

五、思考题维生

素C

的

定

量

测

定

-

2

,

6

-

氯酚靛酚法一

、实验目的■从食品原料等提取维生素C

、脱色2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定、计算■

染

料2,6一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，

一氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为

无色；二介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。■

用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C

的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，

当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗

坏血酸的含量。

、实验原理当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加

一

些染料，使滴定液

呈淡红色，即为终点。0—0HC

—0HHOH0

—

-C

—HCH₂O

H0=0C

=0HO-CH0

一

—HCH₂OH2,6-二氯酚靛酚氧化型(酸性溶液中，呈玫瑰色)2,6-二氯酚靛酚

还原型(无色)脱

氢VC氧化型VC还原型C1-0

HC1C1-0

HC

10+

H

00+

0—N

HN—三

、

器

材

仪

器

和

主

要

试

剂■

偏磷酸：2%溶液(W/V)*,■

盐酸：2%溶液(W/V)■抗坏血酸标准溶液(0.2mg/ml):称

取50

mg

(准确至0.1mg)抗坏血酸，溶于浸提剂中并稀至250

ml

。

现配现

用

。2,6—

氯靛酚(2,6

—

氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液：称取

碳酸氢钠52mg

溶解在200

ml

热蒸馏水中，然后称取2,6

一二氯靛酚50

mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定

容至250

ml,过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用

前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。吸取

1ml

抗坏血酸标准溶液于

5

0ml

锥形瓶中，加入

1

0ml

浸提剂，摇匀，用2

,6—二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15

s不褪色为止。同时，另取10ml

浸提剂做空白试验。滴定度(mg/ml)=cv/V1-V2S—每毫升2,6—二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数；C—

抗坏血酸的浓度，mg/ml;V—

吸取抗坏血酸的体积，ml;V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6—二氯靛酚溶液的体积，ml;V2—

滴定空白所用2,6—二氯靛酚溶液的体积，ml。白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。本实验结果为：0.088mg/ml标

定■1、

提取：

桔子肉10克(猕猴桃或枣5克)于研钵

→

加2%HCl约10ml→充分研磨

→

提取液通过两层纱布滤入50ml容量瓶

→2%HCl定容到50ml

。2、脱

色：液干燥锥形瓶

→

加白陶土一匙(用于吸附生物样品中的色素)

→

充分

振摇(约10分钟)

→

过滤

→

脱色滤液。3、滴定：1)样品滴定：取三角烧瓶两只，各加脱色滤液10ml,用2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下二份样品滴定所用的染液毫升数(滴定过程宜迅速，不超过2分钟),取其平均值----V₄;2)空白滴定用10ml

2%HCl代替脱色滤液，2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定至出

现微红色并保持5秒钟不褪色为止，记下滴定所用的染液毫升数------Vg;四

、

实

验

操

作

计算

维生

素C(mg/100g)样

品

=

(VA-VB)×S×V×100/W×D式

中

：VA:

滴定样品用去2,6-二氯酚靛酚钠的平均ml数

Vg:

滴定空白用去2,6-二氯酚靛酚钠的ml数S:

每毫升2,6-二氯酚靛酚钠溶液相当于维生素C

的mg数

V:样品提取液总毫升

(定容后的ml数，50或100

ml

)D:

滴定时所取的样品提取液ml数(10

ml)W:

样品的重量

(g)(

1)在

操

作

过

程中

某

些

步

骤

一

定

要

快，

避

免VC的氧化，

因

为VC

具

有

还

原

性，

还

要向

样品中

加

入

草

酸

溶

液，

保

护VC;■

(2

)对

于VC标

准

溶

液要

现

用

现

配，

尽

量

精

确，

避

免VC氧

化

，避免因

为

标

准

溶

液的

误

差

造

成

的

误

差；

(3)

整

个

操

作

过

程

要迅

速，

防

止

还

原型

抗

坏

血

酸

被

氧

化

。

滴

定

过

程

一

般

不

超

过

2

min

。

滴定

所

用的

染

料

不

应

小

于1

ml

或多于4

ml,如果样品含维生素C太

高

或

太

低时

，

可

酌

情

增

减

样

液

用

量

或

改

变

提

取液稀释度

。(

3)

本

实

验

必

须

在

酸

性

条

件

下

进

行。

在

此

条

件

下，干

扰

物

反

应

进

行

得

很

慢1、

为

了

测

得

准

确

的

维

生

素