任务四 微生物培养基制作技术

食品微生物检验任务四培养基的制备任务目标知识目标1.了解培养基的配制原理和分类。2.掌握配置培养基的制备过程。素质目标技能目标培养学生形成生物安全意识、环保意识、标准意识、社会服务意识。

1.熟练掌握基础培养基的制作过程。2.掌握高压蒸汽灭菌锅的工作原理及应用范围。1.定义：培养基是指人工配制的、含有六大营养要素、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。（六大营养素：C源、N源、能源、水、生长因子、无机盐）知识点一培养基基础知识1.定义知识点一培养基基础知识2.分类按营养成分来源天然培养基：价格低廉半合成培养基：培养真菌的LB培养基和马铃薯蔗糖培养基等合成培养基：重复性强、成分精确知识点一培养基基础知识2.分类按物理状态液体培养基：不含琼脂半固体培养基：0.2%-0.8%琼脂固体培养基：1%-2%琼脂知识点一培养基基础知识2.分类按用途划分基础培养基：含一般基本营养成分加富培养基：加入某些特殊营养物质选择培养基：只适于目的菌生长繁殖的环境，而抑制其他微生物的生长鉴别培养基：鉴别不同类型微生物的培养基知识点一培养基基础知识3.配制原则浓度合适目的明确pH适宜经济节约知识点二制备流程培养基的制备一般程序：选择原料→计算→称重→混合溶解→调整pH→（加指示剂）→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→鉴定→保存。知识点三实验器材、试剂的准备试剂名称称取量酵母浸膏2.5g胰蛋白胨5.0g无水葡萄糖1.0g琼脂粉15.0g水1000mL试剂准备名称规格数量烧杯1000mL1个牛皮纸或报纸

数张棉线

2根锥形瓶250mL1个试管15×150mm4根以上棉塞90mm8个酒精灯

1个酒精棉球罐500mL1个镊子9mm1个剪刀

1把一次性手套

1副玻璃棒

1根pH试纸1-14

量筒1000mL

1mol/LNaOH

1mol/LHCl

天平

电炉

记号笔

电热鼓风干燥箱

高压蒸汽菌锅

器皿准备知识点四培养基的制备过程1、原料的选择、计算与称量根据培养基的配方，计算所配培养基需要原料的准确数量，选择不同精密的称量工具进行原料的称取。用普通天平准确称量出所需药品用量筒量出相应的蒸馏水的量知识点四培养基的制备过程（2）混合溶解

将称量好的各种原料根据要求将先后放入烧杯或其它容器中进行混合溶解，注意先加少于总量的水，在电炉上加热溶解，溶解时需不断搅拌。注意：固体培养基需要最后加入琼脂，边加边搅拌，待完全溶解后，补足所失水分。（3）调整pH值：用pH试纸或pH计测定培养基的pH，常用1moL/LNaOH溶液或1moL/LHCL溶液调节培养基的pH到所需范围。注意：逐滴加入酸碱调节剂，边加边搅拌，并随时测定。知识点四培养基的制备过程知识点四培养基的制备过程（4）加指示剂对某些培养基，按要求加入一定量指示剂。知识点四培养基的制备过程（5）过滤培养基配制后一般都有沉渣或浑浊出现，需要过滤方可使用，可用滤纸或2～4层的纱布过滤。固体培养基最好趁热用纱布过滤。（6）分装：将过滤后的培养基根据实验需要分装于不同容器内，注意各容器的分装量要求。

三角烧瓶：不超过容量的1/2，高度的1/3。试管：液体培养基、半固体培养基约装试管容量的1/4～1/3；斜面培养基：约装试管容量的1/5。

知识点四培养基的制备过程知识点四培养基的制备过程（7）加塞：由纱布包棉花做成的棉塞（形如未打开伞之幼嫩蘑菇，大小和松紧适中）和现在的硅胶塞。知识点四培养基的制备过程（8）包扎标记：加好塞后，在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放中防止尘埃等污染。知识点四培养基的制备过程（9）灭菌：最常用的是高压蒸汽灭菌法，将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，培养基灭菌时的温度和灭菌时间，按照不同种类的培养基的规定进行操作。以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。知识点四培养基的制备过程（10）鉴定：将消毒冷却后的培养基置于37℃恒温箱内培养24-48h后观察有无杂菌生长，如无杂菌生长则可接入微生物菌种，经培养后观察微生物生长发育情况，以便确定培养基是否合于实验要求。知识点四培养基的制备过程（11）保存：经验定合格的培养基，可存放于冰箱（4℃左右）内或暗凉处清洁的柜内，避免干燥、氧化、pH值的改变和杂菌的污染，这样保存数星期仍然可用。但不宜保存时间过久，以少量勤做为宜。知识点五倒平板倒平板斜面培养基的制作

注意事项（1）称药品用的各种药匙不要混用；称完药品应及时盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴，尤其是易吸潮的蛋白胨等更应注意及时盖紧瓶塞与旋紧瓶盖。（2）调pH时要小心操作，尽量避免回调而带入过多的无机离子。（3）配制半固体或固体培养基时，琼脂的用量应根据市售琼脂的牌号而定，否则培养基的软硬程度也会影响某些实验结果。知识点六注意事项知识巩固1.[单选题]琼脂在培养基中的作用是（

）。A.碳源B.氮源C.凝固剂D.生长调节剂2.[单选题]固体培养基分装于试管的量是（

）。A.1/4B.1/5C.1/3D.1/23.[单选题]高压蒸汽灭菌的温度为（

）。A.105℃B.121℃C.160℃D.170℃4.[单选题]实验室常用于培养细菌的温度为（

）。A.10℃B.28℃C.37℃D.50℃

5.[单选题]使用时，高压蒸汽灭菌锅打开排气阀的目的是（

）。A.防止高压蒸汽灭菌锅内压力过高，使培养基成分受到破坏。B.排尽高压蒸汽灭菌锅内有害气体。C.防止高压蒸汽灭菌锅压力过高，造成灭菌锅爆炸。D.排尽锅内冷空气。知识巩固6.[单选题]下列关于微生物营养物质的叙述中正确的是（

）A.同一物质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也可提供能量7.[单选题]在用微生物发酵生产味精的过程中，所用的培养基成分中的生长因子是（

）。A.豆饼水解液B.生物素C.玉米浆D.尿素8.[单选题]在合成培养基中加人含有C、0、H、N四种元素的某种大分子化合物，其作用是（

）A.作为异养生物的氮源和能源物质B.作为异养生物的碳源和能源物质C.作为异养生物的氮源、碳源和能源物质D.作为自养生物的氮源、碳源和能源物质9.[判断题]凡是碳源都能提供能量。10.[判断题]同一种微生物生长和代谢所需要的培养基是相同的。11.[判断题]同一物质有时可以既作碳源又作氮源。12.[填空题]光能自养菌以

作能源，以