项目一：菌落总数的商品化试剂盒快速检测法

食品微生物检验任务七菌落总数的商品化试剂盒快速检测法知识目标1.了解测试片菌落总数测定的基本原理。2.掌握测试片菌落总数计数、数据处理及结果报告。素质目标技能目标培养学生形成生物安全意识、环保意识、标准意识、社会服务意识。1.掌握蔬菜的无菌采样、样品预处理及稀释。2.掌握菌落总数测试片接种方法。任务目标讨论：为什么要进行食品微生物快速检测？原理：菌落总数测试片是一种预先制备好的培养基系统，含有标准的培养基和氧化三苯四氮唑指示剂，菌落在测试片上呈红色或粉红色，这样可增强菌落计数效果。知识点一检测原理及范围适应范围：适用于肉类、鱼类和海产品、水果和蔬菜制品、乳制品和杂品等食品种类中菌落总数的测定。检样制备样品匀液选择2个～3个适宜稀释度，各取1mL加入菌落测试片待稀释液扩散测试片的部分培养计算菌落总数结果报告检验程序计数各测试片菌落数知识点二称取氯化钠2.55g，加入300mL蒸馏水，量取225mL分装锥形瓶中，分别移取9mL到4支小的试管中。121℃高压灭菌15min。0.85%无菌生理盐水配制实验器材、试剂的准备500mL烧杯1个：配制生理盐水；锥形瓶2个：装225mL0.85%无菌生理盐水；1mL4支（灭菌）移液管10mL1支菌落总数测试片8片；试管4根；玻璃仪器准备准备工作知识点二实验器材、试剂的准备实验操作安全知识点三

操作前，用镊子取酒精棉球消毒桌子、消毒手蔬菜样品：以黄瓜为例，黄瓜用无菌刀在无菌环境下去皮、打浆，无菌称取25g样品+225mL0.85%灭菌生理盐水无菌采样知识点四样品稀释、接种及培养

用量筒量取225mL0.85%无菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%无菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）知识点五25g+225mL生理盐水10-110-210-39mL无菌生理盐水1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL样品稀释、接种及培养知识点五-1-1-2-2-3-300倒平板样品稀释、接种及培养知识点五测试片接种

2.垂直滴加1mL样液于测试片中央

4.用压板的平板使样液均匀分布于圆形接种区，静置1min使胶凝固1.将测试片置于平坦桌面，提起上层膜3.缓慢落下上层膜，切勿直接落下，以免气泡产生将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内，可堆叠至30片，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±2h培养倒平板样品稀释、接种及培养知识点五菌落计数到培养时间后应立即计数，计数红色菌落。知识点六菌落计数知识点六说明：

①不论菌落大小都应计数；

②当细菌浓度很高时，整个测试片会变成红色或粉红色，将结果记录为“多不可计”；

③本测试片有20个等分方格，当菌落数量过多计数困难时，可选择几个有代表性菌落的小方格，计算平均菌落数，再乘以相应倍数，即可得到整个测试片上的估算菌落数。数据处理与报告知识点七若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内（30CFU～300CFU），计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)样品中菌落总数结果。选取菌落数在30～300个之间、无蔓延菌落生长的平板计算菌落总数。序号不同稀释度的菌落数计算及菌落总数报告（CFU/g或mL）10-110-210-3150、523、50、0（50+52）×10∕2=510cfu/mL=5.1×102若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算。式中:N———样品中菌落数；C———平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n1———第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；n2———第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；d———稀释因子(第一稀释度)。序号不同稀释度的菌落数计算及菌落总数报告（CFU/g或mL）10-110-210-32多不可计232、24433、35(232+244+33+35)×102/〔2+（0.1×2）〕﹦2.5×104数据处理与报告知识点七若所有稀释度的平板上菌落数均大于300则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为“多不可计”，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。序号不同稀释度的菌落数计算及菌落总数报告（CFU/g或mL）10-110-210-33多不可计多不可计310、306（310×306）×103∕2=3.1×105数据处理与报告知识点七若所有稀释度的平板菌落数均小于30则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。序号不同稀释度的菌落数计算及菌落总数报告（CFU/g或mL）10-110-210-3420、182、11、0（20+18）×10∕2=1.9×102

5000＜1×10=＜10数据处理与报告知识点七若所有稀释度的平板菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。序号不同稀释度的菌落数计算及菌落总数报告（CFU/g或mL）10-110-210-36多不可计318、32626、28（26+28）×103∕2=2.7×1047多不可计306、30818、20（206+308）×102∕2=3.1×104数据处理与报告知识点七报告①菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。②菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。③若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。④若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。⑤称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。生化处理知识点八检测过程中所用的所有器具、培养后