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文档简介
实验(Yan)二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察第一页,共三十页。实验(Yan)原理小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性,且细胞数量较多。第二页,共三十页。秋水仙素,可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成,使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内,可以收集到较(Jiao)多的中期分裂相的骨髓细胞。第三页,共三十页。第四页,共三十页。实验目的与要求:1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。3.认(Ren)识秋水仙素对细胞增殖的作用。器材与试剂内容与方法(一)小鼠骨髓细胞染色体制备预处理取材,收集细胞低渗固定、再固定滴片染色第五页,共三十页。取材前2~3h,向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻(Zu)断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水仙素2~3小时后,颈椎脱臼处死小鼠。第六页,共三十页。小白鼠(Shu)骨骼标本第七页,共三十页。第八页,共三十页。取出小鼠的后肢股骨,注意不要将股骨剪断,否则容(Rong)易造成骨髓细胞的流失。第九页,共三十页。用纱布(Bu)擦股骨上的肌肉组织,清除干净注射器抽取生理盐水冲洗骨髓第十页,共三十页。收集细(Xi)胞:暴露骨髓腔,反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞,收集到离心管中,定容至6ml.第十一页,共三十页。滴2~3滴于玻片(Pian)上,吹气,在酒精灯火焰过火8次,做记号,凉干,染色滴片:滴片后,将片子侵入Giemsa染液缸中,10~15分钟,弃去染液,水洗,晾干,镜检。第十二页,共三十页。第十三页,共三十页。第十四页,共三十页。作(Zuo)业与思考题1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用?3、简述实验中应注意那些关键问题?第十五页,共三十页。(二)染色体标本片观察1.标本片质量评价(1)细胞密度合适、均匀;(2)背景干净(Jing),细胞核和染色体清晰;(3)有较多的分裂相;(4)染色体分散较好。第十六页,共三十页。细胞密(Mi)度第十七页,共三十页。染色体(Ti)分散度第十八页,共三十页。2.染色体形(Xing)态特征观察第十九页,共三十页。3.染色体计(Ji)数(100×10)151699+16+15=401082222+8+10=40第二十页,共三十页。4.细胞增(Zeng)殖指数统计细胞增殖指数=分裂细胞数分裂细胞数+间期细胞数×100%第二十一页,共三十页。实验三细胞(Bao)器的观察一、中心体二、高尔基体第二十二页,共三十页。一、中心(Xin)体(4×10)马蛔虫子宫横切片全貌第二十三页,共三十页。中(Zhong)心体(10×10)第二十四页,共三十页。中(Zhong)心体(40×10)第二十五页,共三十页。二、高尔(Er)基体(4×10)脊神经节切片第二十六页,共三十页。高尔(Er)基体(10×10)第二十七页,共三十页。高(Gao)尔基体(40×10)第二十八页,共三十页。高尔(Er)基体(40×10)第二十九页,共三十页。内(Nei)容总结实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察。秋水仙素,可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成,使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内,可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。固定、再固定。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期,增加中期分裂相的比例。取出小鼠的后肢股骨
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