分光光度计的测定条件如何选择 光度计常见问题解决方法

第第页分光光度计的测定条件如何选择光度计常见问题解决方法分光光度计可充分各种应用的要求，可用在生物讨论、生物工业、药物分析、制药、教学讨论、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域。

分光光度计的光源灯接受6V/10W插入式钨卤素灯，更换时应先切断电源，取出损坏的钨卤素灯，换上新灯，将仪器的波长置于500nm处，开启仪器电源，移动灯上、下、左、右位置，直到成象在进狭缝上。在T状态，不调整100%键，（盖上样品室盖）察看显示读数，调整灯使显示读数为高即可。

分光光度计的测定条件的选择：

一、入射光波长的选择

在大吸取波优点测定吸光度不仅能获得高的灵敏度，而且还能削减由非单色光引起的对朗伯—比尔定律的偏离。因此在分光光度计的分光光度法测定中一般选择大吸取波长为入射波长。

二、参比溶液的选择

在试验中，要选择合适的空白溶液作为参比溶液来调整分光光度计的零点，以便除去显色溶液中其他有色物质的干扰，抵消吸取池和试剂对入射光的影响。依据试样溶液的性质，选择合适组分的参比溶液很紧要。

三、吸光度范围选择与掌控

任何分光光度计都有确定的测量误差，测量误差的来源紧要是光源的发光强度不稳定法，光电效应的非线性，电位计的非线性，杂散光的影响，单色器的光不纯等因素，对于一台固定的分光光度计来说，以上因素都是固定的，也就是说它的误差具有确定稳定性。

四、比色皿的使用

选择适合规格的比色皿，尽量把吸光度值调整在0.2～0.8之间。同一试验使用同一规格的同一套比色皿，以削减测量误差，所以用一般分光光度法不适用于高含量或较低含量物质的测定。

分光光度计是一种常用的试验室分析仪器，面对浩繁品牌和型号的分光光度计，用户该应适合选择合适的分光光度计。尽管分光光度计种类繁多，但不外乎简易型、中档型和型三大类。

紫外分光光度计一般都随机附有一只塑料布罩，不使用时用其罩住整个仪器，这是很好的防尘手段。但发觉很多试验室里不用附来塑料布罩，而是本身用一块一般布或做成布罩来覆盖仪器，防尘效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入数袋防潮硅胶，也能更好起到延长防潮的功效。在防潮时，假如紫外分光光度计设有防潮干燥筒的，应常常检查，发觉变色立刻更换新的或加以烘干再用。长期停用的紫外分光光度计，要定期开机除潮，如每隔一个月通电预热半小时，以保持整机呈干燥状态，并且维持电子元件的性能。紫外分光光度计对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸取曲线。在一般情况下，我们总是选择最大吸取波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些情况下最大吸取峰很尖锐、吸取过大或相近有干扰存在，就不能选最大吸取波长，而必需在保证有确定灵敏度的情况下，选择吸取曲线中的其它波上进行测定（曲线较平坦处对应的波长），以除去干扰。绘制吸取曲线是正确选择波长的有效手段和方法。吸光度范围：试样在不同吸光度时，浓度的相对误差不同，一般选择0.2一0.8之间，浓度相对误差较小，可以通过更改吸取池厚度、检测波长或待测溶液浓度，使吸光度读数在适合范围内。狭缝宽度：狭缝宽度不仅影响光谱的纯度，也影响吸光度值，在定量分析时，为了得到充分的测量信号，应接受较大狭缝。在定性分析时，为了提高辨别率，应接受较小狭缝，以获得精细的光谱结构。

一.光源部分：

（1）故障：钨灯不亮；原因：钨灯灯丝烧断（此种原因几率高）；检查：钨灯两端有工作电压，但灯不亮；取下钨灯用万用表电阻档检测。处置：更换新钨灯；（2）故障：氘灯不亮；原因：氘灯起辉电路故障；检查：氘灯在起辉的过程中，一般是灯丝先要预热数秒钟，然后灯的阳极与阴极间才可起辉放电，假如灯在起辉的开始瞬间灯内闪动一下或连续闪动，并且更换新的氘灯后仍旧如此，有可能是起辉电路有故障，灯电流调整用的大功率晶体管损坏的几率大。处置：需要专业人士修理；二.信号部分：（1）故障：没有任何检测信号输出；原因：没有任何光束照射到样品室内；检查：将波长设定为530nm，狭缝尽量开到宽档位，在黑暗的环境下用一张白纸放在样品室光窗出口处，察看白纸上有无绿光斑影像；处置：检查光源镜是否转到位？双光束仪器的切光电机是否转动了（耳朵可以听见电机转动的声音）？（2）故障：样品室内无任何物品的情况下，全波长范围内基线噪声大；原因：光源镜位置不正确、石英窗表面被溅射上样品；检查：察看光源是否照射到入射狭缝的中央？石英窗上有无污染物？处置：重新调整光源镜的位置，用乙醇清洗石英窗；（3）故障：样品室内无任何物品的情况下，仅仅是紫外区的基线噪声大；原因：氘灯老化、光学系统的反光镜表面劣化、滤光片显现结晶物；检查：可见区的基线较为平坦，断电后打开仪器的单色器及上盖，肉眼可以察看到光栅、反光镜表面有一层白色雾状物覆盖在上面；假如光学系统正常，大的可能是氘灯老化，可以通过能量检查或更换新灯方法加以判定；处置：更换氘灯、用火棉胶粘取镜面上的污物或用研磨膏研磨滤光片（注意：此种技巧需要有确定维护和修理阅历者来实施）；（4）故障：样品室放入空白后做基线记忆，噪声较大，紫外区尤甚；原因：比色皿表面或内壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白样品对紫外光谱的吸取太猛烈，使放大器超出了校正范围；检查：将波长设定为250nm，先在不放任何物品的状态下调零，然后将空比色皿插入样品道一侧，此时吸光值应小于0.07Abs；假如大于此值，有可能是比色皿不干净或使用了玻璃比色皿；同样方法也可判定空白溶液的吸光值大小；处置：清洗比色皿，更换空白溶液；（5）故障：吸光值结果显现负值（常见）；原因：没做空白记忆、样品的吸光值小于空白参比液；检查：将参比液与样品液调换位置便知；处置：做空白记忆、调换参比液或用参比液配置样品溶液；（6）故障：样品信号重现性不良；原因：排出仪器本身的原因外，大的可能是样品溶液不均匀所致；在简易的单光束仪器中，样品池架一般为推拉式的，有时重复推拉不在同一个位置上；检查：更换一种稳定的试样判定；处置：实行正确的试样配置手段；修理推拉式样品架的定位碰珠；（7）故障：做基线扫描或样品扫描时，基线或信号有一个大的负脉冲；原因：扫描速度设置得过快，信号在读取时，误将滤光片或光源镜的切换当做信号读取了；检查：更改扫描速度；（8）故障：做基线扫描或样品扫描时，基线或信号有一个长时间段的负值或满屏大噪声；原因：滤光片饲服电机“失步”，造成档位错位，国产电机尤甚；检查：重新开机有可能回复，或打开单色器对比波长与滤光片的相对位置来检查（注意：打开单色器时要保护检测器不被强光刺激）；处置：更换饲服电机；（9）故障：样品出峰位置不对；原因：波长传动机构产生位移；检查：通过氘灯的656.1nm的特征谱线来判定波长是否精准；处置：对于仪器而言处理手段相对简单，使用仪器固有的自动校正功能即可；而对于相对简单的仪器，这种调整则需要专业人员来进行了；（10）故障：信号的辨别率不够，实在表现是：本应叠加在某一大峰上的小峰无法察看到；原因：狭缝设置过窄而扫描速度过快，造成检测器响应速度跟不上，从而失去应测到的信号；按常理，确定的狭缝宽度要对应确定范围的扫描速度；或者狭缝设置得过宽，使仪器的辨别率下降，将小峰融合在大峰里了。检查：放慢扫描速度看一看或将狭缝设窄；处置：将扫描速度、狭缝宽窄、时间常数三者拟合成一个优化的条件；（11）故障：当仪器波长固定在某个波长下时，吸光值信号上下摇摆，特别是测量模式转换为按键开关式的简易仪器；原因：开关触点因长期氧化所致造成接触不良；检查：用手加重气力按琴键时，吸光值随之变化；处置：用金属活化剂清洗按键触点即可；（12）故障：仪器