兽药残留课件

2024/5/12兽药残留兽药残留安全问题出口日本的一万吨肉鸡，由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的残留量超标，要求我国政府销毁所有产品。与此同时，出口到德国的蜂蜜由于农药“杀虫脒”残留超标而被退货，接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜。日本政府制订法规，规定对来自中国的鳗鱼须加强对抗生素、磺胺制剂及恶喹酸三项有害物质控制检查，其中土霉素等四环素类抗生素要求未检出（检测限为0.1mg/kg）。

一.兽药残留研究背景

兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗生素或其他药物来控制可能爆发的疾病，同时有效使用兽药可以在很大程度上提高动物对饲料的利用率。1.1兽药残留的类型

抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青霉素等；磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等；激素和β-兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等；抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。1.2兽药残留产生的原因

非法使用违禁或淘汰药物；不遵守休药期规定；滥用药物；违背有关标签的规定；屠宰前用药。1.3兽药残留的危害

破坏微生态平衡，导致二重感染;引发过敏反应；导致病原菌产生耐药性;毒性损害;致畸、致癌、致突变作用;影响生态环境；影响畜牧业的发展二.兽药残留检测兽药残留检测方法

1.兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。

2.兽药残留检测方法中华人民共和国农业部公告第236号

根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了12种动物性食品中兽药残留检测方法，现予发布，请各地遵照执行。

附件：动物性食品中兽药残留检测方法.doc

中华人民共和国农业部

二OO三年一月二十二日2.2.1高效液相色谱仪

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。HPLC原理1）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。2）与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。高效液相色谱法应用HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。2.2.2微生物测定法

microbiologicalassay

在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法。微生物测定常用办法

1.液体稀释法在一组试管中分别加入一定的培养基，然后加入不等量的被测物质，再将已培养好的、用于测定的微生物接种进去,在规定的条件下培养一定时间,观察其消长情况并与标准曲线对比，计算出被测物质的含量。微生物测定常用办法2.固体平板扩散法将溶化的固体培养基与被测定微生物混合做成平板，把含不等量被测物质的液体滴入置于平板上(直接滴样法)；或注入平板上的牛津杯内（管碟法）；或吸入圆形滤纸片后，再置于平板上(纸片法)；也可以在平板上挖一定大小的圆孔，然后把被测物滴入孔内（打孔法）；经培养后在物质扩散所及的范围内出现抑菌法（或生长圈）,测量圈的直径,并与标准曲线对比,计算出被测物质的含量

固体平板扩散法1、3、7打孔法，2、8纸片法，4、6管碟法5直接滴样法。2.2.3猪组织中盐酸克伦特罗的检验

(1)盐酸克伦特罗概述盐酸克伦特罗（clenbuterol，CLB）是一种选择性β2-肾上素受体激动剂（简称β-兴奋剂），是国家按兴奋剂管理的药品，为人、畜呼吸系统药物（氨哮素、克喘素）。盐酸克伦特罗可促进动物生长，加速脂肪转化，提高瘦肉率，被俗称为“瘦肉精”。α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐

(2)盐酸克伦特罗加速脂肪转化胰高血糖素促甲状腺激素cAMP脂肪酶激活激活(3)盐酸克伦特罗的非法使用非法使用作为饲料添加剂，使用量大（是治疗剂量的5-10倍），使用时间长（持续添加时间一般3周以上），代谢慢，因而容易在动物体内（尤其是眼、肺、肝、肾）残留。盐酸克伦特罗通过食物链进入人体，产生蓄积中毒，如头晕、乏力、心律失常等。因此，国内外已经禁止β-肾上腺素激动剂在动物生产中的应用。（4）猪组织中盐酸克伦特罗的检验—ELISA法

GB/T5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》，提出了从ELISA(酶联免疫吸附测定)筛选、HPLC定量到GC-MS确证和定量对动物性食品中克伦特罗残留量进行监测。（A)基本原理：微孔板包被有针对克伦特罗IgG的抗抗体；加入克伦特罗抗体，经过温育和洗涤后；加入酶标记物、标准或样品溶液，克伦特罗与酶标记物竞争与抗体结合；没有连接的克伦特罗酶标记物在被洗涤除去；加入酶底物和发色剂并且温育，结合的酶标记物将无色的发色剂为蓝色的产物，加入反应终止液使颜色有蓝转变为黄色。在450nm处比色测定。(B)实验设计

(C)实验的关键操作

试剂盒的选择和准备；试样的处理；加样；洗涤；比色。(D)检验具体操作1）试剂盒的选择和准备储存条件：2-8℃；室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰箱中取出，待温度与室温平衡后使用；及时保存：试剂完毕后不需用的部分应及时放回冰箱保存。2）试样的处理尽可能使用新鲜样本；进行必要的前处理。3）加样加样前样本必须混合均匀；加在板孔底部，避免加在孔壁上部；不可溅出，不可产生气泡；每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染；加酶结合物和底物时可用定量多道加液器。4）温育温育前必须震动混匀，但不可溅出；温育的温度和时间应按规定力求准确；温育必须避光。5）洗涤清洗必须彻底；避免出现板孔干燥；反转倾空微孔板要迅速，避免清洗液混合。6）显色和比色显色的温度和时间应按规定力求准确；显色必须避光；使用多道加液器加终止液；显色完毕后尽快比色测定。

三.兽药残留监控措施

遵守最高残留限量和休药期规定是避免兽药残留超标，确保动物性食品安全的关键。在畜牧业生产过程中，只要科学、合理地使用兽药，不使用违禁药物和未被批准的药物，就不会导致动物性食品中兽药残留超标、危害消费者健康的情况发生。

兽药残留监控措施

到目前为止，农业部已先后制订、修订并颁布了240多种兽药