高中生物3.1重组DNA技术的基本工具知识梳理新人教版选择性必修3

3.1重组DNA技术的基本工具知识梳理基因工程：指按照人们的愿望，通过______转基因______等技术，赋予生物新的______遗传特性______，创造出更符合人们需要的新的______生物类型和生物制品______。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫______重组DNA技术______。（1）手段：按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性。（2）目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（3）水平：分子水平。由于在DNA分子水平上进行设计和施工，因此又叫作重组DNA技术。（4）操作对象：基因（5）操作原理：基因重组（6）操作环境：体外（7）基本过程：剪切→拼接→导入→表达（8）操作结果：定向地改造生物的遗传性状，获得符合人们需要的新的生物类型和生物产品（9）优点：定向改造生物体的性状，目的性强（与诱变育种相比）育种周期短，克服远缘杂交不亲和障碍（与杂交育种相比）一、分子手术刀—限制性内切核酸酶1.全称和简称全称：______限制性内切核酸酶______简称：____________限制酶______2.来源：主要是从______原核生物____________中分离纯化出来的3.作用：①能够识别______双链______DNA分子的某种______特定核苷酸序列。②使______每一条______链中______特定部位______的______磷酸二酯键____________断开。4.作用部位：______磷酸二酯键____________5.识别序列：大多数限制酶的识别序列由______6______个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由______4______个、______8______个或____________其他数量______的核苷酸组成。6.切割结果：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式___黏性末端____和____________平末端____________。（1）EcoRⅠ限制酶切割EcoRⅠ识别序列为GAATTCEcoRⅠ切割部位为______GA______之间的磷酸二酯键（2）SmaⅠ限制酶切割SmaⅠ识别序列为CCCGGGSmaⅠ切割部位为______CG______之间的磷酸二酯键二、分子缝合针—DNA连接酶1.功能：将____________两个DNA片段连接起来______，恢复被限制酶切开的______磷酸二酯键____________。2.分类和对比种类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源______大肠杆菌______T4噬菌体特点只缝合______黏性______末端缝合______黏性___末端___平__末端作用恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______磷酸二酯键______3.比较与DNA有关的六种酶名称作用部位作用底物作用结果限制酶___磷酸二酯键____DNA将DNA切成两个片段DNA连接酶磷酸二酯键______DNA片段______将两个______DNA片段______连接为一个DNA分子DNA聚合酶或热稳定DNA聚合酶磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端DNA（水解）酶磷酸二酯键DNA将DNA片段水解为______单个脱氧核苷酸______解旋酶碱基对之间的______氢键______DNA将双链DNA分子局部解旋为______单链______，形成两条长链RNA聚合酶磷酸二酯键______核糖核苷酸______将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端三、分子运输车——载体1.作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。2.种类：______质粒、噬菌体______的衍生物、______动植物病毒______等。3.作为载体需具备的条件①______有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中____________；②______能在细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制______；③______常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选______；④______对受体细胞无害______。探究.实践：DNA的粗提取与鉴定1.提取思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在的差异，选用适当的物理或化学方法对他们进行提取。2.提取原理：①DNA不溶于______酒精______，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质；②DNA在______不同浓度的NaCl溶液______中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。3.鉴定原理：在一定温度下（沸水浴），DNA遇______二苯胺试剂______会呈现蓝色，因此______二苯胺试剂______可以作为鉴定DNA的试剂。4.比较DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶解规律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液DNA______溶解____________析出______5.DNA粗提取中的注意事项（1）本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作实验材料，原因是______哺乳动物成熟的红细胞______无细胞核（无DNA）。可选用鸡血细胞作材料。（2）加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫。加入______酒精______和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成______絮状沉淀______。（3）二苯胺试剂要______现配现用______，否则会影响鉴定的效果。（4）