《活性氢水抗氧化性测定ABTS法》

T/BJWA**—2023

1范围

本文件规定了采用ABTS法测定活性氢水抗氧化性能的方法。

本文件适用于活性氢水体外抗氧化性能的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

抗氧化能力（antioxidantactivity）

清除自由基的能力，以待测样品对ABTS自由基的清除率来表示。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ABTS：2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐

2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682规定的一级水。

5.1过硫酸钾，分析纯。

5.2ABTS，分析纯。

5.1.2.1ABTS溶液：称取ABTS2000mg，过硫酸钾34.4mg，溶于50.0mL蒸馏水，摇匀，室温避光放

置24h后，作为ABTS母液。取适量ABTS母液，用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70±0.02内(OD734)，

作为ABTS测定溶液，该溶液应现配现用。

注：可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液。

6仪器和设备

6.1分光光度计：波长范围为400nm～800nm，吸光度值精确至0.001。

6.2电子天平：感量为0.001g。

3

T/BJWA**—2023

6.3移液器。

6.4吸量管。

7原理

ABTS经氧化后生成较稳定的蓝绿色ABTS+自由基,在可见光区734nm处有最大吸收峰,活性氢水与

ABTS+自由基反应后使其褪色,在734nm处的吸光值降低。采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光

度。通过与不加样品的溶液进行比较，采用样品对ABTS自由基的清除率来判定的抗氧化能力。

8分析步骤

8.1测定

取两支试管，分别按表1的组合添加试剂。

表1试剂添加量

溶液名称空白（Ab）样品（As）

ABTS溶液3.6ml3.6mL

一级水0.4ml―

样品―0.4mL

在空白管和样品管中均加入3.6mLABTS溶液后，向样品管中加入0.4mL样品，向空白管中加入

0.4mL一级水，分别充分混合均匀后，室温避光反应5min，于波长734nm条件下，用紫外分光光度

计测定其吸光度值(采用一级水调零校准)。

8.18.2试验数据处理

按式（1）计算：

............(1)

式中：Ab−As

P=Ab×100%

P——自由基清除率；

Ab——ABTS溶液与一级水混合液的吸光度；

As——ABTS溶液与样品混合液的吸光度。

计算结果以平行测定值的算数平均值表示，保留三位有效数字。

9重复性

在重复性条件下获得的不低于3次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的20%。

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1范围

本文件规定了采用ABTS法测定活性氢水抗氧化性能的方法。

本文件适用于活性氢水体外抗氧化性能的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

抗氧化能力（antioxidantactivity）

清除自由基的能力，以待测样品对ABTS自由基的清除率来表示。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ABTS：2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐

2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6682规定的一级水。

5.1过硫酸钾，分析纯。

5.2ABTS，分析纯。

5.1.2.1ABTS溶液：称取ABTS2000mg，过硫酸钾34.4mg，溶于50.0mL蒸馏水，摇匀，室温避光放

置24h后，作为ABTS母液。取适量ABTS母液，用95%乙醇稀释至吸光度值在0.70±0.02内(OD734)，

作为ABTS测定溶液，该溶液应现配现用。

注：可以根据分光光度计的灵敏度配制合适浓度的ABTS测定溶液。

6仪器和设备

6.1分光光度计：波长范围为400nm～800nm，吸光度值精确至0.001。

6.2电子天平：感量为0.001g。

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6.3移液器。

6.4吸量管。

7原理

ABTS经氧化后生成较稳定的蓝绿色ABTS+自由基,在可见光区734nm处有最大吸收峰,活性氢水与

ABTS+自由基反应后使其褪色,在734nm处的吸光值降低。采用紫外可见分光光度计测定反应后的吸光

度。通过与不加样品的溶液进行比较，采用样品对ABTS自由基的清除率来判定的抗氧化能力。

8分析步骤

8.1测定

取两支试管，分别按表1的组合添加试剂。

表1试剂添加量

溶液名称空白（Ab）样品（As）

ABTS溶液3.6ml3.6mL

一级水0.4ml―

样品―0.4mL

在空白管和样品管中均加入3.6mLABTS溶液后，向样品管中加入0.4mL样品，向空白管中加入

0.4mL一级水，分别充分混合均匀后，室温避光反应5min，于波长734nm条件下，用紫外分光光度

计测定其吸光度值(采用一级水调零校准)。

8.18.2试验数据处理

按式（1）计算：

............(1)

式中：Ab−As

P=Ab×100%

P——自由基清除