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文档简介

1淡水生物监测环境DNA定量PCR法GB/T19495.5-2018转基因产品检测实时荧光定量聚合酶链式HJ710.8生物多样性观测技术导则淡水底栖大型无脊椎动物SN/T4278—2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形3.1下列术语和定义适用于本文件。3.23.33.43.5阳性对照positivecontrol24.24.34.44.54.65.1样品采集及前处理设备5.2实验室分析设备5.3其他辅助设备和材料包括环境DNA样品采集、环境DNA提取、标准曲线制备、定量PCR扩增、结果分析与计算、质量控制3水+++++），入无水乙醇，确保样品中最终的乙醇浓度≥80%，常6.2.3.2同一采样点沉积物采集宜尽量涵盖各类小4按照DB32/T4178的规定从不同自然基质（如粗砾石、鹅卵石以及树木残干等）表面刮取一定面积样本DNA浓度应不低于1ng/µL，6.4标准曲线制备将含有目标物种或生物类群的质粒标准分子DNA溶液进行梯度稀释。为便于后续计算，可先稀释至2。标准曲线即以DNA拷贝数的对数作为横坐标，Ct值作为纵坐标作图，并获得标准曲线方程。5定量PCR预混液。每个DNA样品3个重复。体系配制应按照单次实验所DNA模板 设置PCR反应荧光信号收集条件,应与探针标记的报告基团一致。具体设置方法可参照仪器使用说实验设立以下对照:66.6结果分析与计算）；时，相应的不含目标物种的基因组DNA，或混合样品；根据实验需要和实验条件在DNA提取和测序过程中适当设置阳性对照无DNA提取7检出的物种所占比例，即假阴性率（FN）。假阴性率不应超过1FN=·······················存在的物种所占比例，即假阳性率（FP）。假阳性率不应超过10FP=········································7.2质量保证废弃物的分类、收集、存放和集中处理应按照GB19489和S在处理之前应采用高压灭菌、消毒或焚烧等方式灭活，对含核酸8日气温(℃):水温(℃):电导率(µS/cm采样工具：□抓斗混合大型底栖无脊采样工具：□抓斗式采泥器□彼得森采样器9B.1.3合理安排各类生物样品采集顺序，尽量避免生物类群在采集前受到较a)应全程佩戴无菌实验手套，采集下b)采样和前处理过程宜采用一次性无菌装置或耗材。对于重复使用装置和耗材，g)过滤水样前，每个样品的过滤器接触面应使用漂白剂消毒不少于1分钟，并用蒸馏水B.3.2样品运输应按照要求的贮存温度执行，必要时需准备冷C.1.3每个实验室应配备专用的实验工作服，并定C.2.1实验人员不应在同一天进行DNA提取和PCR扩C.2.6实验操作前，移液枪应选用75%的酒精消毒或紫外线消毒30C.2.7实验过程中，实验人员应全程穿着实验服，并佩戴一次性无菌实验手C.2.8实验过程中，移液枪不得接触任何盛放样品或试剂的容器C.2.11怀疑或确定产生交叉污染的样品、试剂或耗材，不得继续使C.3.1实验操作前，应用1.5%的漂白剂擦C.3

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