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第第页土壤酸性木聚糖酶测定试剂盒说明书土壤酸性木聚糖酶（SoilAcidicXylanase，SACX）测定试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。测定意义：木聚糖酶（EC3.2.1.8）重要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原材料细胞壁以及β葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的汲取利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，ACX一般分别自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。测定原理：ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征汲取峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值加添速率，可计算ACX活力。自备试验用品及仪器：天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。试剂构成和配制：缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保管。试剂一：液体3mL×1瓶，4℃避光保管。试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保管。样品处理新鲜土样风干，过3050目筛。测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调整波长至540nm。2、操作表对照管测定管土样（g）0.020.02缓冲液（μL）150100试剂一（μL）50混匀，50℃震荡反应30min，立刻90℃水浴10min，8000g，25℃离心10min，取上清100μL试剂二（μL）100100混匀，90℃水浴中显色5min，取180μL于微量石英比色皿/96孔板测定540nm处吸光值A，分别记为A对照管、A测定管，△A=A测定管A对照管。SACX计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=2.5554x0.002，R2=0.9983酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个酶活单位。SACX活力（μmol/d/g土样）=（△A+0.002）÷2.5554×V反总×103÷W÷T÷150=18.78×（△A+0.002）÷WV反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L=103μmol/L；150：木糖分子量。b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=1.2777x0.002，R2=0.9983酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个酶活单位。SACX活力（μmol/d/g土样）=（△A+0.002）÷1.2777×V反总×103÷W÷T÷150=37.56×（△A+0.002）÷WV反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L=103μmol/

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