产品标准空表

Q/KZ027—2016PAGE7饲料添加剂蛋白酶范围本标准规定了饲料添加剂蛋白酶产品的分类、要求、试验方法、检验规则及标签、包装、运输、贮存和保质期。本标准适用于本单位生产、销售、调拨的饲料添加剂蛋白酶产品。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6003.1试验筛技术要求和检验第1部：金属丝编织网试验筛GB/T6435饲料中水分的测定GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T14699.1饲料采样NY/T722饲料用酶制剂通则JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则国家质量监督检验检疫总局令第75号定量包装商品计量监督管理办法中华人民共和国农业部公告第2045号饲料添加剂品种目录（2013）分类和命名产品分类与命名见表1：产品命名与分类产品名称商品名称使用方法及添加量饲料添加剂蛋白酶XXXXX每吨畜禽饲料添加量为150～300克要求感官要求本产品为浅褐至褐色，流动性良好的粉末，气味明显。加工质量指标水分水分不高于10%。粒度通过W=0.84mm孔径分析筛，筛上物小于5%。混合均匀度均匀度变异系数不大于5%。卫生指标应符合GB13078和NY/T722要求，其中部分应符合表2要求。卫生指标项目指标总砷(以As计)/(mg/kg)≤3.0铅(以Pb计)/(mg/kg)≤10.0有效成分指标有效成分指标应符合表3要求。有效成分项目酶活蛋白酶/（U/g）≥9,0000净含量应符合国家质量监督检验检疫总局令第75号定量包装商品净含量计量检验规则。试验方法感官指标 用目测、鼻嗅及触摸进行。加工质量指标水分按GB/T6435进行。粒度按GB/T5917.1进行。混合均匀度 按NY/T722中的6.5进行。卫生指标按GB13078进行。总砷按GB/T13079进行。铅按GB/T13080进行。有效成分指标蛋白酶按附录A进行。净含量按JJF1070进行。检验规则出厂检验以同配方，同原料，同班生产的产品为一批，每批产品应进行出厂检验。抽样方法按GB/T14699.1进行。检验项目感官性状、水分、有效成分保证值酶活、粒度、净含量、标签。判定方法以本标准的有关试验方法和要求为判定方法和依据，对抽取样品按出厂检验项目进行检验。检验结果如有一项指标不符合本标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如有任何一项指标不符合本标准要求时。则判定该产品为不合格产品，不能出厂。型式检验有下列情况之一，应进行型式检验：改变配方或生产工艺；停产90天后恢复生产；核发生产许可证和产品批准文号；行业主管部门或技术监督及质检部门提出要求时。检验项目包括本标准“4要求”项下的全部项目。抽样方法在出厂检验合格的产品中，按GB/T14699.1进行抽样。判定方法以本标准的有关试验方法和要求为判定方法和依据。检验结果如有一项不符合本标准要求时，应加倍抽样复检，复检结果如有任何一项不符合本标准要求的，则判定型式检验不合格。标签、包装、运输、贮存及保质期标签标签应符合GB10648的规定。包装采用无毒、无害、确保产品质量要求及符合卫生标准的包装。本品为两层包装，内层为透明PE袋，外层为胶桶，标准规格：20千克/包；亦可根据客户实际需要进行包装。运输应防日晒雨淋，禁止与有毒有害物质同运。贮存置于干燥、通风处，勿受阳光直射，用后封口。保质期在符合上述包装、运输、贮存条件下，本产品自生产日期起，在未开封条件下，保质期为12个月。

（规范性附录）

蛋白酶的测定原理含氮酪蛋白是一种可溶的底物，由磺胺酸染色酪蛋白制备。蛋白酶水解酪蛋白后，可导致溶液变色，在标准状态下，这种颜色深浅与酶的活性密切相关。定义1U活性单位：在37℃，pH值=6.0，反应时间15分钟，每分钟水解1微克含酪蛋白所需的酶量。仪器和设备水浴，37℃，50℃，恒温装置涡流搅拌器离心分离机磁力搅拌器和磁转子分析天平（精确到0.1mg）烧杯玻璃试管（100×16×0.8）及试管架分光光度计容量瓶计时器天平（精确到0.01g）吸液管：移液器刮铲试剂和溶液磷酸缓冲溶液pH6.0(0.1M)NaH2PO4·2H2O：13.56g（±0.01g）Na2HPO4·2H2O：2.34g（±0.01g）溶于盛有950mL去离子水的烧杯中，检查pH值，可用1NNaOH（pH＜6.0）或1NHCL（pH＞6.0）调节pH值。然后用去离子水稀释到1L。如果pH值偏离目标值超过0.05，须放弃而重新配制。含氮酪蛋白底物（目录号：S-AZCAS，Megazyme）溶液向1g粉末状底物中，加入2mL乙醇。用磁力搅拌该混合物以消除所有的“结块”，然后加入48mL缓冲溶液（pH6.0）。在40℃下，搅拌让底物完全溶解（约须10分钟）。粘在烧杯壁上的含氮酪蛋白应用小刮铲全部刮下。三氯醋酸（TCA）：10%水溶液2NNaOH溶液含氮酪蛋白储备溶液将0.25g含氮酪蛋白溶于去离子水中，并稀释到100mL。含氮酪蛋白标准溶液对每一批新的含氮酪蛋白，均须作出标准曲线。制备浓度范围为每mL含0.50-2.5mg氮酪蛋白的标准溶液。用去离子水制备标准溶液。每种标准溶液使用1mL。含氮酪蛋白的浓度(mg/mL)储备溶液体积(mL)去离子水体积(mL)0.50.20.81.00.40.61.50.60.42.00.80.22.51.00测定步骤精确称取5g样品到100mL缓冲溶液中，在磁力搅拌器（转速400-500转/分）上搅拌3小时；离心分离5分钟可得到澄清的酶溶液（3,500rpm）；该溶液用缓冲液稀释20倍；用吸液管移取1mL上步配制的最后酶溶液到试管中（每个试样制备两次）；空白试管这时无任何溶液；在37℃的水浴中预热试管5分钟，预热底物10分钟；每间隔20秒钟，向每支试管中加入1mL底物溶液；用涡流搅拌器振荡每支试管，然后重新置入37℃水浴中；准确反应15分钟整；每隔20秒钟，向每支试管内加入4mL10%三氯乙酸溶液，并振荡以停止反应；空白试管中酶溶液应该在加入三氯乙酸溶液以后加入，并轻微振荡；将所有的试管置入50℃的水浴中加热15分钟，以使蛋白完全沉降；用涡流搅拌器振荡每支试管以改善离心分离效果；离心分离8分钟可得到澄清的酶溶液（3,500rpm）；取3mL的上层清液到另一试管并加入1mL2N的NaOH溶液；用去离子水将分光光度计调零，在440nm处测定最后的混合溶液吸光度，做标准曲线计算G值；依照上述程序，加入1mL去离子水代替1mL酶溶液，加入4mL去离子水代替4mL10%三氯醋酸，以制备标准曲线。计算根据标准曲线，求出溶解的含氮酪蛋白的量并计算出活性单位数量。G=A×k1+k0式中：A——440nm处测定的吸光度k1——标准曲线的斜率k0——标准曲线的截距活性=G×ft式中：t——总反应时间F——稀释因子