DB34T 2252-2014 水产品中孔雀石绿残留的检测-胶体金免疫层析法

67.120.30B

50DB34

Detection

of

Colloidal

安徽省质量技术监督局

DB34/T

2252—2014前 言本标准按照

GB/T

1.1-2009

给出的规则起草。本标准由合肥市渔政监督管理站提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。司。本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、洪家春。IDB34/T

2252—2014水产品中孔雀石绿残留的检测-胶体金免疫层析法1

范围Malachite

Green（LeucomalachiteGreen断及表述、结果确证的方法。孔雀石绿残留的快速筛查检测。本标准方法的检出限为：3.0

μ2

规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T

6682 分析实验室用水规格和试验方法3

原理应，并通过胶体金的颜色而显示出红色条带。用胶体金读卡仪或目测比较板/卡上控制线（C

线）和检

性。4

试剂和材料4.1

除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合

GB/T

6682

规定的二级水。4.2

对甲苯磺酸（C7H8O3S）。4.3

盐酸羟胺（ClH44.4

乙酸铵（C2H724.5

乙腈（C2H34.6

中性氧化铝（Al2O3

pH

为

7.5，层析用，100

目。1DB34/T

2252—20144.7 氯化钙（CaCl24.8 正己烷（C6H）。4.9 四氯苯醌（C6Cl4O2）：化学纯。4.10 氢氧化钠（NaOH）。4.11 乙酸胺盐溶液：称取对甲苯磺酸

5.16

0.1

g，乙酸铵

0.2

500

mL，用

4

mol/L

4.10

pH

至

4.12 0.1％四氯苯醌溶液：溶解

0.1

g

80

mL

水中，加水定容至

mL。4.13 孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂板。4.13.1 孔雀石绿结合抗原：偶联率为

1:10

MG）。4.13.2 抗孔雀石绿抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于

5

000（间接

法），或有效抗体含量应大于

0.05

5

法）。单抗效价应大于

15

000（间接

法），或有效抗体含量应大于

0.5

5

法）。抗体相对亲和力应大于

3.0×

50％时，相对应的抗体浓度的倒数）。4.13.3 样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。4.13.4 金标微孔：微孔底部包被有抗孔雀石绿抗体和胶体金的结合物。4.13.5 NC

膜：4

cm

毛细管时间

121

4.13.6 吸水垫：滤纸、玻璃纤维或吸水纸。4.13.7 背衬：PVC。4.13.8 塑料模板。4.13.9 PBST

缓冲液。4.13.10 储存与使用。密封包装，干燥阴凉处保存，用前恢复至室温，即开即用。5

仪器和设备5.1

电子天平：感量

0.01

g。5.2

均质机：转速≥8

000

r/min。5.3

离心机：离心力≥3

g。5.4

氮气或空气吹干仪：加热温度≥65℃。5.5

pH

计：测量精度

±

pH

5.6

微量移液器：10

μL～100

μ

μ

000

μL。5.7

胶体金读卡仪：测量精度±0.02

RLU（@

<

0.4

±0.04

>

0.4

RLU）。6

测定步骤6.1 试样制备

cm×cm×0.5

cm

的小块后混合，用均质机制成糜状。6.2 提取称取

5.0

g（±0.1

g）均质后的样品于

mL

离心管中，加入

3

mL

乙酸胺盐溶液、10

mL

乙腈，剧烈振荡

3

4

g

3

2

g

1

min，3

000

g

离心

5

min。移取

5

mL

上清液于另一离心管中，加入

1

mL

正己烷，剧烈振荡，3

g

离2DB34/T

2252—2014心

1

min；移取

4

mL

下层溶液于

5

mL

0.1

mL

0.1％四氯苯醌溶液（4.12），摇匀，65℃氮气或空气吹干；用

0.3

mL

PBST

缓冲液（4.13.9）溶解残留物，静置

2

min，待测。6.3 测定6.3.1 取出孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂板（4.13），使用前恢复至室温，置于水平台面上。吸取待测样品溶液

100

µL

5

min，吸取金标微孔内溶液滴加到快速检测试剂板的加样孔中，在

8

min～10

min

内目测或通过胶体金读卡仪读取结果。6.3.2

6.3.1进行。6.3.3平行测定：每个样品的平行样数量≥2；分别按

和

6.3.1

注：7

结果判断及表述7.1 试剂板有效性判定7.1.1

能进行检测。7.1.2

T

线比

C

色深或一样深（如图

2），则检测试剂板有效，可进行检测。7.2 结果及表述7.2.1

果为阴性，孔雀石绿残留量<