免疫标记技术

免疫标记技术

传统免疫学技术一、凝集反应已知Ag分子（未知）肉眼可见传统免疫学技术二、沉淀反应

可溶性Ag分子＋Ab⇌

Ag-Ab肉眼可见沉淀反应和凝集反应的灵敏度都较低免疫标记技术一、将某种标记物（*）与Ag/Ab分子连接Ag*/Ab*二、Ab*＋Ag⇌

Ag－Ab*

Ag*＋Ab⇌

Ab－Ag*用高灵敏的标记物检测技术检测Ag-Ab中标记物

的有无或多少，来判断结果常用标记物：酶、荧光物质、放射性同位素、化学发光物质、胶体金等免疫标记技术的分类

一、据标记物分

1.酶免疫分析

2.荧光免疫分析

3.放射免疫分析

4.化学发光免疫分析

5.金免疫分析免疫标记技术的分类

二、据应用分

1.免疫组织化学技术

2.免疫测定

免疫标记技术的分类

三、免疫组织化学技术1.以组织或细胞作抗原2.应用对组织细胞中的抗原作定性或定位检测对液体标本中抗体作定性或效价测定免疫标记技术的分类

四、免疫测定1.用于液体标本中可溶性抗原或抗体分子的定性、定量测定2.分类均相免疫测定非均相免疫测定免疫标记技术的分类

四、免疫测定3.均相免疫测定Ag*+Ab⇌Ag*＿Ab+Ag*

Ag、Ab反应后，不分离Ag*

－Ab和Ag*

，直接测定反应前后标记物活性改变免疫标记技术的分类

四、免疫测定4.非均相免疫测定Ag※+Ab⇌Ag※＿Ab+Ag※Ag+Ab※⇌Ag＿Ab※+Ab※Ag、Ab反应后，先将(Ag＿Ab)※与游离Ag※

/Ab※分离，再测定(Ag＿Ab)※中标记物免疫标记技术的分类

四、免疫测定4.非均相免疫测定固相法：Ag、Ab在固体表面反应，如酶联免疫吸附试验(ELISA)等液相法：Ag、Ab在水溶液中反应酶免疫分析基本原理

一、将酶分子与Ag/Ab分子连接：AgE/AbE

既有酶活性，又有免疫活性二、AbE＋Ag⇋

Ag－AbE

AgE＋Ab⇋

AgE－Ab

↓加酶底物

Ag-Ab中的酶催化底物进行显色反应三、据显色情况判断结果酶免疫测定

ELISAp162固相抗原载体标本双抗体夹心法显色包被酶免疫定位一、酶免疫组织化学技术p166酶免疫定位二、酶免疫印迹试验

p1681.SDS－PAGE电泳：将各种蛋白质抗原分离为不同区带2.将蛋白质抗原区带转移到NC膜上3.依次与第一抗体和酶标第二抗体反应4.加入酶不溶性底物，使抗原区带染色荧光免疫分析一、荧光免疫测定(FIA)p164时间分辨荧光免疫测定TrFIA1.标记物：Eu3+等镧系元素离子标记抗体2.Eu3+-β-二酮体螯合物能发出长寿命的高强度荧光3.延时测量长寿命荧光，以消除背景荧光干扰Eu3+螯合物荧光特点及测量TrFIA双抗体夹心法抗原抗体反应荧光免疫分析二、荧光免疫组织化学技术p166

标记物：异硫氰酸荧光素(FITC)等抗体芯片p171抗体芯片一、信号检测仪器扫描检测反应信号及其强度来判断样品中靶分子及其量激光共聚焦扫描仪二、高通量、微型化和自动化地对生物液体、细胞及组织中的成分进行准确、快速、大信息量的检测抗原抗体反应的应用

高特异、高灵敏、高通量的抗原抗体反应检测技术已广泛用于生命科学的各个领域抗原抗体反应的应用一、疾病诊断与研究：感染性疾病、肿瘤、遗传病、自身免疫病、内分泌疾病等二、3P医学：预防(preventive)医学、预测(predictable)医学和个性化(personal)医疗三、药物研究、检测和筛选