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一例猪流行性腹泻的诊断与治疗实例分析目录TOC\o"1-2"\h\u28692一例猪流行性腹泻的诊断与治疗 155361、发病情况 2212392、临床症状 3250063、病理变化 3121054、病毒分离鉴定 3121364.1 病料采集 3127114.2 病料处理 4109455.1 引物设计 4268515.2 病毒的RT-PCR 4305575.3 病毒的RT-PCR鉴定结果 4250216、防治措施 5204576.1加强饲养管理 5290406.2合理补料,控制仔猪腹泻 5114976.3减少各种应激 5117166.4治疗措施 559067、讨论与小结 618043参考文献 810613致谢 9摘要:猪流行泄泻病毒,是指一种由猪流行泄泻病毒所致的急性上消化道感染。本病为生猪生产中常见的一种病症,以健康母猪和肥育型母猪的产性能居多,其危害程度与传染性胃肠炎类似。拉肚子、消瘦、拉肚子、食欲不振、脱水等是常见的症状,发病时间一般在1-2月份或12月份,病死率较高,随着年龄的增长,症状逐渐加重。就算能治好,也会对它的生长造成一定的影响。猪流行性腹泻是一个十分危害的病症,因此应该采取有效的预防措施,以减少对农民的经济损失。本文主要对猪流行性腹泻的病原学特征、体征、诊断标准以及具体的防控对策等进行了概括,希望对猪流行性腹泻的防控、病猪的养殖管理等方面具有一定的参考意义。关键词:猪流行性腹泻;仔猪;实验室诊断;治疗方法目录TOC\o"1-2"\h\u31051、发病情况 142562、临床症状 1239833、病理变化 1212024、病毒分离鉴定 2232054.1 病料采集 2227604.2 病料处理 2313895、病毒的RT-PCR鉴定 2263595.1 引物设计 2308945.2 病毒的RT-PCR 275935.3 病毒的RT-PCR鉴定结果 2176676、防治措施 3240666.1加强饲养管理 3123026.2合理补料,控制仔猪腹泻 3174696.3减少各种应激 311286.4治疗措施 3150277、讨论与小结 411421参考文献 6猪流行性腹泻(PED)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒(PEDV)所致的猪剧烈、较高接触性胃肠管感染,诊断表现一般有拉肚子、水样泄泻、重度脱水等,病理剖检可见空肠和回肠部分的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、脱落。此项研究成果以笔者工作实践中出现的一种猪流行性腹泻为例,通过对其检查和处理,总结猪流行性腹泻的预防要领。1、发病情况二零二二年四月,某市某规模养殖户畜主送交检疫一病死母猪,视诊消瘦、皮下干枯、有脱水表现,同时猪厂多数保育母猪和两个半月龄育肥母猪群体患病。户诉该次疫情从四月十二号开始,在疫情初期有二头仔鸡发生急性腹泻,并伴有严重腹泻,同时身体也发生了脱水。虽然户主曾用腹泻药剂处理过,但疗效并不太明显,且整个猪们的感染及传播状况也并未有所好转,之后疫情又进一步流行,且有部分仔鸡已经死去,也带来了一定的经济损失。2、临床症状本病的重要症状是水样泄泻,甚至在拉肚子时恶心。拉肚子多发生在进食和吃奶后,病症的轻重依猪年纪大小而有不同,年纪越小病症越重;体温略高或正常,精力、胃口较差。一周内,母猪发生大泄泻后的2~4天脱水而致死。断奶母猪、育肥猪的病症则较轻度,为精力沉郁,食欲不佳,拉肚子,但拉肚子在连续4~7天后逐渐康复。而成熟母猪则仅发生厌食和拉肚子(图1-3)。图1小猪水样腹泻图2肠道变薄透明图3胃内充满凝固的奶水3、病理变化病变范围仅限于胃消化道,自胃至直肠的以卡他性发炎为特点。胃内具有内容物,外观上呈现多层特征的弛缓性,肠内产生大量黄色液体;肠系膜有泪,肠系膜的淋巴腺血管水肿,而小肠绒毛的小肠壁则很薄、呈零点五透明状态。在受损区绒毛长短从中等到极度缩短,变短的茸毛成融合态,具有生长发育不好的刷状缘。心脏、肺、肾脏等一般无明显疾病。但尸体逐渐消瘦、脱水,体内小肠饱胀扩大,肠壁越来越薄成半透明状态,膨胀迅速,弹力逐渐减弱,充满大量液体及内含物质,成半透明状态或为淡黄色液体,肠系膜补液,肠系膜淋巴腺水肿,胃内产生大量黄白色凝乳块。4、病毒分离鉴定4.1 病料采集取死仔猪小肠黏膜、内含物质和水样腹泻大便作为分离病毒的样本,将样品冷藏保存。4.2 病料处理将收集的样本用灭菌PBS磨碎,多次冰冻,以四℃条件下3000r/min离心30min为宜、抽取上清,将上清液用0.22μm一次滤器过筛除菌、分装保
5、病毒的RT-PCR鉴定5.1 引物设计按照GenBankJN825712.1序列设计,扩增长度661bp,用以识别猪流行性腹泻病毒。引物顺序分别为:上行引物:CGGTTCTATTCCCGTT,下行引物:GAAGCACTTTCTCACTATC5.2 病毒的RT-PCR提取病料的RNA,并同时提出与PEDV阴性肿瘤的对照(细胞培养液)和PEDV阳性球菌毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程(大连)公司供应的RNA萃取试剂盒萃取,一步法RTPCR的化学反应成份和反应程序如下。RT-PCR反应体系为:10×Buffer 5μL,MgCl2(25 mmol/L) 10μL,dNTPs(10 mmol/L) 5μL,Rnase Inhibitor(40 U/μL) 1μL,AMV RTase XL(5u/μL) 1μL,AMV-Optimized Taq(5 U/μL) 1μL,上游引物P1(20μmol/L)1μL,下游引物P2(20μmol/L)1μL ,模板5μL,RNase Free ddH2O up to 50μL。RT-PCR反应条件为:50℃反标音1h;94℃5min;进行PCR循环后,94℃45S,55℃1min,72℃1min,经过三十五个循环后,以七十二℃延长为10min。在反应完成后,用百分之零点八的琼脂糖凝胶电泳测定了扩增结果。5.3 病毒的RT-PCR鉴定结果琼脂多糖凝胶电泳测定结果表明,病毒的RT-PCR扩增反应产物大小约六百六十bp,与预测结论一致(如图4所示)。回收的RTPCR产品,送往上海生物工程公司检测。测序结果显示,和在GenBank上报告的猪流行性腹泻病毒序列同源性约在百分之九十六~百分之九十九左右。图4 RT-PCR结果6、防治措施6.1加强饲养管理搞好饲料管理工作,搞好预防性注射,保护猪场和舍内周围环境健康,严密杀菌,定时驱虫等,并针对该区域疾病的传播状况有选择性的给母猪和仔猪实施免疫接种。凡妊娠仔猪在生产前二十一天以内接种疫苗,仔猪则在分娩后十二小时内以多价幼畜腹泻为停。同时还可针对地方疫情的严重状况,选择性注入魏氏梭菌病、猪流行性腹泻、感染性胃肠炎和轮状病毒病等疾病的疫情,并认真作好地方疫情管理工作。6.2合理补料,控制仔猪腹泻从仔猪补料到断奶后二星期的饲养应该保持一致,后期逐步改变,并随时提供清洁饮水。在刚断奶后母猪的饲养中应适当补给矿物质、维他命、有机酸、酶制剂、微生态制剂以及抗生素等,以防止或降低母猪腹泻的发生。刚出生三天的小猪由于乳汁较稠,乳中的水份已无法适应其繁殖需要,故应该供给其充分的清洁水源,不然母猪极易因为寻找不到清洁水源,而去饮污水以及尿液。6.3减少各种应激母猪对周围环境的适应性一般很差,应适当防止或降低母猪在断奶、换料和分群等流程中产生的应激性影响。所以,在冬季时应注重御寒保温,在夏季注重抗暑减热,而改变的饲养方式要循序渐进,慢慢进行。饲养要按时定量,不得饲养发霉变质的饲料和冷冻饲养。6.4治疗措施哺乳仔猪和断奶母猪的护理。服用抗菌药剂,如氟哌酸、庆大霉素、磺胺二甲氧嘧啶、硫酸黄连素和高锰酸钾等,能有效预防流感,缓解症状。腹泻严重时可服用收敛特征药剂,如鞣酸蛋白、次硝镪水铋以及矽碳银等。对于脱水严重的仔鸡可进行补液,首先在静脉注射中滴入百分之五碳酸氢钠溶液防止酸中毒,而后静注百分之五的葡萄糖生理盐水,其间还可肌肉注射适当的硫酸阿托品溶液。或在饲养中加入抗菌药剂或抗病毒药物,如硫酸新霉素结合黄芪多糖,或氟苯尼考结合黄芪多糖,并且自由饮用口服补液盐水,并相互衔接约一星期。6.4.1小猪群体的治疗措施先对七出生日龄以内的小猪全面治疗,收集病料后做为组织灭活疫苗,对7~15出生日龄的小猪和母猪进行移动产房,并对患病的产房清理、消毒和干燥。对患病期间新生的小猪1出生日龄服用仔猪病毒性流感腹泻弱毒疫苗治疗2头份,在第三天时即可用不腹泻带仔的母猪所产性能奶水口服用上下午各一次,每个五mL,奶水通过用人的挤奶器直接吸入带小猪的母猪乳腺中提取,可达到很好的防治效果。七出生日龄以上的泄泻小猪采用补液防治措施。对十五出生日龄以上小猪则采用及早断奶的措施,在断奶后2~3天小猪即可停止泄泻。6.4.2种猪群体的治疗措施对母猪,用猪感染性胃肠炎和流行性腹泻二联灭活疫苗普免,后海穴四mL/头和肌肉注射一头份的腹泻安徽三联学院弱毒疫苗,每间隔三周用组织灭活疫苗普免一遍,然后在仔猪的生产性能2~3星期注射一次性急性泄泻二联灭活疫苗。公猪可免疫接种于二次急性腹泻的二联灭活疫苗,不免疫组织灭活疫苗。在饮食中增加复合维生素、葡萄糖刺激和酸化阿莫西林,在泄泻停止后饲料中增加所有益菌。6.4.3育肥猪群体的治疗措施育肥羊一般补给糖水、复合维生素和酸化阿莫西林,在腹泻期终止后饲料中增加了健康菌和黏膜的促进生长剂。7、讨论与小结在临床应用与预防实践中,针对泄泻问题进行财务分析,搞懂主要的发病因子,分清了混杂感染与单一感染,以便制定针对性的防控对策,将传染病所造成的损失降到极限。每天进行清粪,注意通风,保证圈舍干旱,以降低病原细菌繁殖的机率。要进行"春捂秋冻",注意对产房仔鸡和保育猪的保温措施,特别是腹腔的有效温度。将该场内部灭菌池中的火碱液,每2~3天置换一遍。对猪舍和猪群,建议采用1:500~1000的过氧醋酸熏蒸灭菌。由于仔猪腹泻问题相对易于治疗,所以如果发现有仔鸡感染时,应立即找出原因,并对症下药处理。同时将其隔绝在洁净、干旱、暖和的猪舍中,并做好看护,适时清理粪便和废水,以避免病原传染。并对同窝母猪实施药剂防治。但对患有顽固性拉肚子和有严重拉肚子表现的患者则要在全面分析的基础上,采取综合预防、对因处理与对症治疗相结合的办法进行治疗。对于养殖区引起猪流行性腹泻的,主要对策是减少感染时间,避免复发,最大程度的降低风险,同时降低传染源,增强猪群抵抗力,创造良好的发展条件。产房的小猪死亡高,流传速度,发病周期较长。要对在产房的七日龄内感染小猪早处理,将其余小猪群迁移,对产房内早消毒处理,并做好全进全出,以尽量减少传染源的蔓延和重复感染,并尽量减少对仔猪流行腹泻病毒通过粪口传播和空气气溶胶传播的直接传播。而如何进行感染后对仔猪的疫苗免疫,是预防仔猪流行腹泻复发的重要举措。针对内分泌型IgA抗体保存持续时间较短的特性,猪场应对新发病仔猪紧急执行免疫力腹泻安徽三联学院弱毒疫苗和拉肚子二联杀灭病毒疫苗,然后间断三周再免疫接种腹泻三联弱毒和拉肚子二联杀灭病毒疫苗,然后间断3~4周再开始生产前的2~3周,随胎免疫接种拉肚子二联杀灭病毒疫苗,仔猪奶水中马上有了很高水平的内分泌型IgA抗体,给新生的小猪提供了母源抗体保障。如不实行跟胎免疫学,则母猪产性能在奶水中释放型IgA很低,故终止一次免疫必须要产前2~3周跟胎免疫学腹泻二联灭活病毒。对不是病发猪流行性腹泻的,母猪厂内必须要免疫腹泻活病毒的回饲,起到启动内分泌型IgA,而后期灭活疫苗免疫也可以促进内分泌型IgA的形成。针对全场母猪,发了流行性腹泻也不能返喂。公猪同时也要免疫于商品化的腹泻二联灭活疫苗,避免与公猪透过精液的垂直方式传染。对新生小猪要在一出生日龄服用二头份的弱毒疫苗,出生日龄后服用不能腹泻带仔母猪正常生产性能的奶水。一日龄免疫性腹泻弱毒疫苗也是很高效的,因为此时胃液为偏中性,疫苗迅速抵达小肠,达到对局部黏膜免疫力,通过服用带有抗体的母乳,就能够中和由发病母猪乳汁所传播的仔猪流行性腹泻病毒。最后要做好环境卫生,保证产房干燥,提高室温,以创造对猪群最适宜的生产环境。参考文献刘罗虎臣,陈清华.猪流行性腹泻病原学特征及其诊断与防治[J].湖南饲料,2018(05):16-18.LEEC.Porcineepidemicdiarrheavirus:anemergingandre-emergingepizooticswinevirus[J].Virology,2015,12(1):193-208.平作军.猪流行性腹泻的典型症状和治疗[J].中国动物保健,2019,21(09):15-16.钱广敏,陈传莲.猪流行性腹泻的诊断与防控措施[J].中国畜牧兽医文摘,2013,29(04):135.吴元忠
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