公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物指标 编制说明

公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物指标编制说明检验方法标准的一个组成部分，本文件为第物指标》修订工作专家研讨会，研讨修订的主要工作容进行了介绍并与参会专家讨论，形成第二稿标准文本各级疾控机构、科研院所、卫生监督执法机构、检验机构、33条涉及法律法规、标准内容理解有偏差的意见未采纳。标准起草组按照反馈意见汇总处草组根据预评审专家意见修改相关资料，形项目负责人，负责项目立项、整体构思、编制思路及整体定位、项目技术把控、项目的整体组织和推撰写编制说明，汇总征求意见，撰写标准解读、上法评价以及方法文本、编制说明的撰写并征集意见法评价以及方法文本、编制说明的撰写并征集意见验方法评价、补充、方法验证以及方法文本、编制2.积极采用国际标准和国外先进标准推动公共场所检验检测技术发展，增加了一些公共场所卫生检测必需的先进技术方法标准检验方法进行修订，以2014年以来国内外发布的相关空气指标标准检验方法、发扰去除等方面开展实验研究，建立检验方法。同时在全国范围内选择3个单位开展方法验本次修订了原有四项指标的标准检验方法，补充了β-溶分，补充了嗜肺军团菌的定量检测方法和荧光PCR快速筛查方法，现将指标》保持一致（以下简称GB/T1820国标，以及实验室生物安全的国标要求，具体引用GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试本文件依据《伯杰细菌手册》中定义将β-溶血性链球菌的英文表述修改为β-hemolyticLegionellapneumophila。基平板暴露在空气中，微生物依靠重力作用自然沉降到平板上的采样方细菌总数检测的采样方法为撞击法和自然沉降法。撞击法是采用撞击式空气微器，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，使悬浮在空气中的带数。依室内空气微生物污染程度确定采样体积。固体撞击法普遍适用于各级微生物实验室，通过抽样泵主动抽入空气，可获得准确空气采样量评估室内菌落总数浓内空气质量标准》、GB/T34012—2017《通风系统用空气净化装置》、《颗粒生物气溶胶采样和分析通则》、T/CECS873—用于室内空气微生物较少、室内环境较洁净的场所，GB50333—20本次修订无新增方法，仍沿用原标准中撞击法和自然沉降法，但补充了撞击法ΣNi×1000C=i=1C——细菌总数，单位为菌落形成单Ni——每级平板菌落数，单位为菌落形成单位（CFU撞击法和自然沉降法计算得出的细菌总数的值均应四舍五入到整在相对封闭的公共场所（如宾馆、旅店、招待所等）采样时，应关闭门窗、空气净化设备及新风系统，若采样前空调处于使用状态，则采样时应仍保持空调正常运转。在相对敞开的公共场所（如商场、候车室等）采样时，应保持当时的环境状态。所以修改采件为：采样时关闭门窗15min～30min，在难以关闭门窗的公共场所（如商场、候车室等）采样时，应保持当时的环境状态。记录室内空调等设备运行状况、门窗状况每批培养基平板配置后需做无菌检查，可每批选定3块平板采样器需定期在负载条件下用检定合格的流量计进行校准，相对偏差不得超过5%;在采样前应对采样系统的气密性进行检查，不得漏气；采样前需用酒精棉擦拭采样头在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程和样品运输中应无菌操为避免运输和保存过程中的污染，需同时进行现场空白对照试验，每次或一个对照平板，与采样平板同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的平板一起箱培养，结果应无菌落生长。如空白对照有菌生长，则本批次样品作废，需重新室内空气中真菌的检测是一种应用广泛且技术成熟的方法，卫生部2006年颁布国疾病预防控制机构中已推广应用近5年，本次公共场所卫生检验方法修订等同采标并更较稳定，故被作为一种国际通用的空气采样法被广泛使用。准采样流量为1m3（28.3L/min）气流的逐层增高，不同大小的微生物粒子按空气动力学特征分别撞击在相应的培养基表面上。捕获在各级上的粒子大小范围是由该级孔眼的气流速度和上一级的粒子截阻率而决定定动量，并因其惯性而偏离气体流线，撞击沉着在设备简单，方法易行，能对空气污染(1)由于地心吸引弱，小粒子很难在短时间内采集到，特别是对呼吸道感染有重要意义的微粒，在空气中沉降速度慢、悬浮降量与颗粒的大小的关系，因此菌落计数高，对呼吸道最易沉着的粒子大小逃污染严重时采样时间过长，可发生菌落重叠生长。存在壁损失造成的粒子从采集面滑脱和粒子被打碎等所致的采样结果误响小，计数结果的变异系数较小，平行样的相对离散程度较低，重复试验差。采样时菌落有时会相互融合和产生静因气流冲击和采样液搅动，可将粒子中的微生物释放并均匀分布于采样使用方便、价格低廉、易消毒、可反(1)不适宜低温或长时间采样。(2)采样空气流量小，微生物浓度低时，难于检测。使用方便灵活，对空气微生物粒子捕获率较高，除能采到空气中的细菌，还可采集到真菌、病毒及霉菌毒素问题无法判断采气量和有效采气量，有效采气量不恒定，对于呼吸道感染有重要意义的一部分细菌粒子会损耗于抽气叶轮的叶片上，而导致结果误差，采样片及外套难以在低温条件下采样，对微生物粒子的易使耐干燥能力低的微生物被气流吹干致死，且滤膜孔径易堵塞，难以保持稳定的采气量。后续的洗脱过程会影响微生物的活性，且滤膜容易堵塞，难以保持稳定的采集空气标本容量大，浓缩空气倍数高，对小粒子的捕获率高，实用性强(适于空气中微生物浓度很低条件下的采样，尤其是空气中致病微生物的在电晕放电过程中会产生紫外线、臭氧和氧化氮，这对微生物的存活不利；其次，空气的相对湿度≥85％时易漏电，采样效率低；另外设备大、结构复杂，使用维护采样器采集的样品可直接培养,对低浓度气溶胶快速、简单、粒子损面需要冷水冷却，使用不便利，难以在现具有一般空气微生物采样器所具有的功能外,还能为进入呼吸道的微生物长，所用动物量较多，携带管理不便，所酶链反应的PCR方法、免疫分析法以及测序法等也为真菌的检测和鉴定开辟了PCR法和测序法能够不受微生物是否可培养的特性影响，对空气样本中的所有真菌进行检测。还有针对真菌生物量评估的标志物进行检测的方法，如用气相色谱-质谱法测定麦角固很难实现对样本中的微生物进行时间长，受多种因素的影响，在分子遗传学方法如PCR法和测序法不受微生物是否可培养的特性影响，对空气样本中的所有真菌进气微生物污染程度确定采样时间为5min～15min；然补充所需主要仪器设备的技术参数，自然沉降法补充采样GB18204.3—2013颁布实施以来，操作，将沙氏琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3L/min流量min～10min，采样器使用按照说明书要求进行。在有菌生长时，按照公式计算结果，小数点后的数字四舍五入并保留到整仪器设备、采样过程、检测过程提出质量控制措施，保证实验结果的b)采样器需定期在负载条件下用检定合格的流量计进行校准，相对偏差不得超过5%;c)在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程中b)在采样开始前，确保所用试剂和材料为无菌状态，操作过程中避免人为污染。触酶试验是鉴定β-溶血性链球菌常用的生化鉴定方法，国家卫生和计划生育委员会检验》中就将触酶试验作为鉴定β-溶血性链球菌的生化方法。本次公共场所卫生检验方法修订将其纳入。另外补充6.1.5.5其他检验使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。增加此条可以更加准确的鉴定β-溶血性链球菌。压灭菌121℃20min改成121℃15min。血琼脂平板制法增加了“6.1.2.1.2.1脱纤维羊血”2（3）“6.1.5.1培养方法”中的培养温度由35℃~37℃改为36℃±1℃,5%CO2培养本次修订保留培养法，同时新增荧光PCR法对嗜肺检测方法—培养法被认为是检验嗜肺军团菌的金标准，在全国疾病预防控制机构中已EMA+qPCR法等。常规PCR法操作简便、快速菌浓度，但该方法在国内外均未标准化，方法技术尚不成熟军团菌检测的具有一定复杂性，分子检测法并不能完全取代传统的检测要选择相应的检测方法，或联合使用多种检测手段，才能正确评估军团菌病暴发的素，对及时采取预防控制措施，预防军团病的发生具有重要意义。因此，本次修订养法并补充定量检测方法，同时新增荧光P率液体冲击式采样器是利用喷射气流的方式捕获空气中的微生物粒子。m的小粒子，采样液对脆弱微生物有保护作用e)因实验过程中需要使用微量移液器，故增加微量移液器：100μLb)因为实验过程中有氧化酶实验、硝酸盐还原实验、尿水解马尿酸实验，而原标准试剂和培养基中没有这些生化试剂，故需加上b)为了表达标准，原标准6.5.4中菌落整齐改为菌落边缘整齐。军团菌的不同种类。为了避免军团菌的死亡，不能将平板长时间暴露e)因为军团菌的颜色形态各异，培养基上每种颜色形态均有GB/T40392-2021《循环冷却水中军团菌的检测》有不同类型的疑似军团菌菌落，则每种类型应至少选择h)原标准6.5.6中生化实验没有具体操作步骤和结果观察，参考GB/Tj)原标准6.5.6中血清学实验缺少相应k)本次新增荧光PCR法对嗜肺军团菌进行快速检测的相关内容。GB/T18204.3—2013无质每次制备培养基均应严格按照实验操作标准规定的方法与剂量配制，灭菌，并用嗜肺军团菌和非嗜肺军团菌标准菌株接种BCYE和BCYE-试验，看其长势，以保证各种培养基能培养分离出相应致嗜肺军团菌是致病菌，实验操作人员应有二级生物安全实验人员在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施，减少职业暴同时强调采样点应避开通风口、通风道和热源，离墙壁距离应大于0.5《公共场所卫生管理规范》、GB37678《公共场所卫生学评价规范》的实本次修订补充了β-溶血性了链球菌的生化鉴定步骤，为000中用到的荧光定量PCR方法不仅能够定量，其最基本的功能包括但不限于WHO的《WHOGuidelinesforIndoorAirQual标准化组织ISO发布的空气真菌检验方法、新加坡空WHOWHO在2009年发布了《WHOGuidelinesforI《WHOguidelinesforindoorairquality:househoforIndoorAirQuality:DampnessandMold》中没有提出真菌的限值，只提出了一些预防）：b)过滤采样器（Filtrationsamplers使用滤膜捕获和收集生物气溶胶的方法，膜具）：效体积，因此菌落计数不能用体积单位表示，a)显微镜直接观察（Directmicroscb)基于培养的方法（Culture-basedme），醇（Ergosterol）、β-（1,3）-D-葡聚糖（Beta-(1,3)-d)分子遗传学方法（Moleculargeneticmethods），如基于PCR技术的方法。采样器，例如AllergencoMKZ3，采样量依据污染程度采集50cm3、1色，并在显微镜下以400倍或100美国：美国政府工业卫生工作者协会于1985年提出室内空气中的真菌的限值为1CFU/m3，参考由美国工业卫生学会于1996年出版的《实地测定环境样本的生物污染物指采样器和气旋粗梳机旋风洗涤等的采样仪器进行采样检澳大利亚：澳大利亚于2002年提出室内霉菌及真菌是已知的空气新加坡：1996年《办公室内良好空气质量指引》中规定可接受的室内新加坡:1996年《办公室内良好空气healthyliving》《室内环境中霉菌生长的基本原理及健康生活的策略》主要与霉菌相关，未涉及到溶血性链球菌内容。韩国：2010年《改善空气质量的法制A群和B群溶血性链球菌，如果采用cAMP试验，可能会漏检A群溶血性链球菌，故不采UmweltmedizinischeBewertungvonBioaerosol-Immissionen—Risikobeurteil《中华人民共和国传染病防治法》规定县级以上人民政府卫生行政部门对公共场所的卫本文件作为公共场所检验技术的推荐性国家广的方法，GB15982—2012《医院消毒卫生标准》、G我国与公共场所室内空气质量相关的室内污染物基础标准有两部，分别是GB/T范》。环保部门发布的GB3095—2012《环境空气质量标18883—2002只有采用撞击法检测菌落总在此基础上我国各部门发布了一系列特定环境下的空气2010《医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》、GB/T16294—2010《照采样方式不同检测浮游菌和沉降菌。卫生部2006年颁布实施的《公共场所集中空调通风年.霉菌生长，以及确定促使霉菌生长的因素（包括潮湿和尘本次修订广泛收集了国内关于β-溶血性