牛结核γ干扰素磁微粒化学发光检测方法

XX/TXXXXX—XXXX牛结核γ干扰素磁微粒化学发光检测方法本文件规定了牛结核γ干扰素磁微粒化学发光检测方法的试剂与耗材、器材与设备、样本采集及下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范激发液由激发液A和激发液B组成，与化学发光免疫试剂配合使用，是一种辅助试剂，为发光XX/TXXXXX—XXXX34缩略语PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersalinEDC：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（1-(3-PPD：提纯结核菌素（purifiedproteinderivative）A-PPD：禽型结核菌素（AvianTuberculinPPD）B-PPD：牛型结合菌素（Bovine感染牛分枝杆菌的结核阳性牛，其外周血淋巴细胞已被牛分枝杆菌致敏并产生免疫记忆，当体外遇到牛分枝杆菌特异性抗原（牛结核菌素刺激时），淋巴细胞将被激活，发生再次细胞免疫反应，释放大量牛结核γ干扰素，通过磁微粒化学发光免疫检测(双抗夹心法)技术检测血清中牛结核γ干扰素。将待测样本、牛结核γ干扰素4E8单抗包被的磁性微球溶液以及吖啶酯标记的牛结核γ干扰素2G5单抗结合物混合；温育一段时间洗涤后，加入激发液；在碱性条件下，吖啶酯分子的发射光强度达到最大，通过测量的发光值结果和既定的判定方法判定待测样本的阴阳性。禽分枝杆菌属于非结核分枝杆菌，以禽型结核菌素刺激淋巴细胞作为对照，可有效排除环境分7.42℃~8℃冰箱，-20℃冰箱。XX/TXXXXX—XXXX8.1.1进行静脉无菌采血，每头5mL，立即转分混合，在37℃恒温培养箱中静置培养16h。收集细胞培养上清，立即9操作步骤9.1将样本、阴性对照、阳性对照分别各加50μL至相应反应杯9.5化学发光免疫分析仪自动测定各反应杯发光值。XX/TXXXXX—XXXX5B-PPD培养上清发光值-PBS培养上值≥3000且B-PPD培养上清发光值-A-PPD培养上清发光值＜3000，样本判定为牛结核γ干扰素阴XX/TXXXXX—XXXX示：1mL100,000IU的提纯牛型结核菌素加入99mLPBS。配制完成后用0.22μm滤膜过滤，无菌分装，置2℃~8℃保存。示：1mL100,000IU的提纯禽型结核菌素加入99mLPBS。配制完成后用0.22μm滤膜过滤，无菌分装，置2℃~8℃保存。称取十二水合磷酸氢二钠2.9g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钠8.0g、氯水搅拌溶解，加纯化水定容至1000mL，经0.22μm过滤，置2℃~8℃保存。XX/TXXXXX—XXXX7B.1取0.2mg牛结核γ干扰素单克隆抗体，装入透析袋，置PBS中室温（15℃~25℃)透析4h。除上清。重复用MES溶液磁分离洗涤2次，用0.5mLMES溶液重悬。液，摇匀后固定在混匀器上室温（15℃~25℃)反应30min。反应结束后，磁分离，移除上清，用体积1mL，摇匀后固定在混匀器上室温（15℃~25℃)反应4h。反应结束后，磁分离，移除上清，2℃~8℃保存备用。XX/TXXXXX—XXXX结合物），温（15℃~25℃)透析4h。将标记的抗体溶液，装入透析袋内，置于PBS（0.05moL/L，pH值7.4）中透析，室温（15℃~25℃)透析过夜，中间换液2次～3次。0.02%Proclin-300混匀后经0.22μm滤器过滤，无菌分装，于2℃~8℃保存。XX/TXXXXX—XXXX9室温（15℃~25℃)待血液凝固后，37℃静置2h，然后2℃~8℃静置1h，将析出的血清转XX/TXXXXX—XXXX相关试剂匀，加纯化水定容至1000mL。定量分装，2℃~8℃保存。X-1002.5mL，搅拌均匀，加纯化水定容至1000mL。定量分装，2℃~8℃保存。称取十二水合磷酸氢二钠72.5g、磷酸二氢钾5g、氯化钠200g、氯化钾5化水搅拌溶解，再加纯化水定容至1000mL，经0.22μm过滤，置2℃~8℃保存。0.22μm过滤，置2℃~8℃保存。），A.7.6封闭