(高清版)GBT 40267-2021 植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法

植物源产品中左旋多巴的测定高效液相色谱法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T40267—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。本文件起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、四川大学、甘肃中商食品质量检验检测有限公1GB/T40267—2021植物源产品中左旋多巴的测定高效液相色谱法本文件描述了植物源产品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于蚕豆(ViciafabaL.)、狗爪豆[Stizolobiumcochinchinensis(Lour.)TangetWang]、常春油麻藤(MucunasempervirensHemsl.)等植物源干样品中左旋多巴含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样用2%(体积分数)盐酸溶液超声提取后，经反相色谱柱分离，紫外(或二极管阵列)检测器检5试剂或材料5.1试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1.1磷酸氢二钾(K₂HPO₄·3H₂O):优级纯。5.1.2盐酸(HCl)。5.1.3磷酸(H₃PO₄)。5.2溶液配制5.2.12%(体积分数)盐酸溶液：取盐酸20mL,加水至1L。5.2.210mmol/L磷酸氢二钾溶液：称取磷酸氢二钾2.3g,加水950mL溶解，加磷酸调节pH7.0,再用水稀释至1L。2GB/T40267—20215.4.1标准储备液：称取左旋多巴标准品约20mg(精确至0.1mg),用2%(体积分数)盐酸溶液溶解并定容至10mL,配制成质量浓度为2000mg/L的左旋多巴标准储备液，于4℃下保存备用，有效期为1个月。5.4.2标准中间液：准确移取标准储备液2.5mL于100mL容量瓶中，用2%(体积分数)盐酸溶液稀5.4.3低浓度标准工作溶液：分别准确移取适量标准中间液，用2%(体积分数)盐酸溶液稀释配制成质5.4.4高浓度标准工作溶液：分别准确移取适量标准储备液，用2%(体积分数)盐酸溶液稀释配制成质6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器(UV)或二极管阵列检测器(6.3超声波发生器：功率250W,工作频率40kHz。6.4离心机：转速不低于8000g。6.5酸度计：精度为0.01个pH单位。6.6涡旋混匀器。8试验步骤混匀后超声提取30min,间隔15min摇匀一次，然后在8000(×g)下离心5min,将上清液转移至3GB/T40267—202125mL容量瓶中。残渣再用10mL2%(体积分数)盐酸溶液重复提取一次，合并两次提取液，用2%(体8.2测定8.2.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下所示：磷酸氢二钾溶液=5:95;d)柱温：20℃;8.2.2标准工作曲线的制作依据试样中左旋多巴的含量选择合适质量浓度范围的标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析，以左旋多巴色谱峰面积为纵坐标，溶液质量浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。标准工作溶液色谱图见8.2.3样品测定将试样溶液注入高效液相色谱仪，依据保留时间定性，记录峰面积，根据标准工作曲线得到试样溶液中左旋多巴的质量浓度，应使试样溶液中左旋多巴的质量浓度在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样分析。典型样品溶液色谱图见图A.2。8.3平行试验按8.1和8.2的规定对同一试样进行两次平行测定。9试验数据处理试样中左旋多巴的含量按照式(1)计算：………….式中：w——试样中左旋多巴含量，单位为克每百克(g/100g);p——由标准工作曲线得到的试样中左旋多巴质量浓度，单位为毫克每升(mg/L);V——试样定容体积，单位为毫升(mL);f——试样溶液稀释倍数；计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。4GB/T40267—202110精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。11其他本方法测定左旋多巴的检出限为0.000275g/100g,定量限为0.00110