真菌的固体发酵工艺研究

真菌的固体发酵工艺研究真菌是最早被发现引起昆虫疾病的微生物，原因是它们可长出寄主体表，明显可见虫生真菌多从体壁侵入，自然扩散力强，对于防治刺吸口、钻蛀性以及在地下生活的害目前,化学农药(如P、呋喃丹等)仍是我国生产量最大、应用最广的杀虫剂。0世纪0年代曾在山东建厂生产农药(二溴氯丙烷)来杀线虫P的生产使工人患男性产丹产和使用会造成农产品农药残留和自然环境污染,因此,开发对环境友好的生物菌剂势在必国视（m有属有真菌在生物防治上虽然表现出巨大的潜力,市场前景广阔,但大规模生产技术的不成熟一]酵再转上试～艺1真菌固体发酵一般工艺流程12菌2小合3次)45持，在。2真菌剂生产培养基及仪器和生产设备1大米以%：（%；麸；2LL）1 目前国内真菌生物农药工业生产的菌种扩大培养一般都采用实验室和生产车间二级子培养流程。斜面菌种的培养是工业发酵工艺中的关键环节，操作必须在无菌室严格进在养斜面菌种不宜传代过多，一般不超过三代，以防菌种退化。有时也可使用平板培养进行菌种培养。其表面积大，产孢多，菌落生长和杂菌污染易观察，但无菌操作不如斜将固体培养基上培养出的孢子及菌丝转入三角瓶液体培养基中培养，通过往复振荡注意因菌种的不同而调节温度、培养基的组成和初始H值、培养时间以及摇床的速度种子罐的大小和需要逐级扩大培养的次数根据固体培养物的量而定。例如，按%要L套L的三级种子罐系统。种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少由多次移种而发酵过程中应注意观察，并将温度、H值和溶氧等发酵参数控制在有利于菌丝生长的最佳范围。另外还要通过在培养基中加入各种植物油及其他化学消泡剂（如聚二醇、八醇等高级醇类，聚氧丙烯甘油等聚醚类）或通过罐内的机械消泡装置来控制发酵过程真菌农药使用的都是好气性真菌，它们在深层液体中培养只能利用溶解在水中的氧（通气量控制的，而通气量是由来自空压机的高压气流（气升式发酵罐）的速率或搅拌转度于,2 保证真菌菌种生长的环境无其它杂菌,因此在生产前对固体发酵间及准备间进行彻底灭3 入好,温～℃蒸汽压力～,,温净4 将真菌固体发酵培养基陈大米,倒入塑料大桶内,向其注入清水,使大米完全浸没在清水中,浸泡～,使大米完全吸饱水分,用铁罩沥控干水分平摊在清洁的方盘内,每盘装量～粉的。将装有真菌固体发酵培养基的方盘整齐地摆放在消毒车上,推送到消毒间的消毒柜内关闭柜门。采用常规消毒方式消毒灭菌,控制蒸汽压力2～,温度1～3℃,蒸煮,将消毒车推到固体发酵间的准备间内,用铁钯子将大米迅速打散降温到8℃,准5 在真菌固体发酵间内,用L的无菌量杯接取真菌液体种子0～,均匀地淋在方盘内的固体发酵培养基上,用铁钯或小铁铲进行混拌,使真菌液体种子与固体发酵培养基充分混合均匀,再用无菌的双层纱布盖上固体发酵培养基,将方盘摆放到发酵间的架子6 固体发酵间内保持温度为8±1℃,发酵1～d保持发酵间内的湿度为%～%,从不必加湿保持正常环境下的湿%～)在发酵第d时给固体发酵培养基上喷洒无菌的%葡萄糖溶液一次,发酵,孢子成熟,固体培养基形成菌块,则固体发酵结表中燥风对固体发酵的全过程进行监控观察每一时期孢子生长状况h记录一次记录时间、温度、湿度、固体培养基上的菌落(真菌孢子)状态等固体发酵过程中菌落生长各时段状态列于中真菌孢子提取干燥以活孢子作为产品的真菌发酵物必须尽快干燥，否则不仅孢子活力会迅速下降，而迅速发生的杂菌污染甚至有可能造成含孢量很高的产品成为废品。然而，为了保持真菌孢子的活力，对发酵物不能使用高温干燥；同时，真菌的孢子易随风飞散，干燥过程中不能使用高速气流或者高速搅拌。因此，干燥工艺和干燥设备的选择一直是真菌农药生冷冻干燥能较好地保持孢子活力，但成本较高，不适用于大量生产。真空干燥避免高温和气流问题，且要求的真空度不是很高；缺点是干燥速度较慢。各种气流干燥器或转快速干燥机（也称旋转闪蒸干燥机）可用于干燥的前期，使初始含水量很大的湿发酵～过～℃。在%制剂提取出来进行制剂或直接投入使用。图9中左为我国常用的收孢机，加工起来成本低，可大量处理原菌剂，但无正式产品，且效率稍低。安徽农业大学省微生物防治重点I的rV制剂的目的是要将孢子或菌丝稀释和保护起来，并将各种剂型成分正确地组合起来形成良好的理化性状。由于真菌农药的活性成分是活孢子，因此制剂首先要考虑的是尽保持孢子的活力不受各种剂型成分的影响。尤其是在研制加有表面活性剂的悬乳剂和可性粉剂时，须对表面活性剂对孢子的影响做仔细的考察，因为它们多数都会降低孢子的力。其次要注意了解孢子的亲水性，虫霉及座壳孢的孢子是亲水的，而白僵菌和绿僵菌迄今已推出的剂型多为粉剂、油悬浮剂、颗粒剂等。在林业上常将纯孢子粉不加制就直接超低量喷施，省去了制剂的工序，节省了储存的空间，但用量难以控制，易造成结果与分析1 温度对真菌发酵影响很大,温度升高对真菌固体发酵有利产孢子量增加,因固体发酵是高过℃死于产见图是℃2 真菌是喜氧的,因此适量增加通气量有助于提高孢子生长速度,产孢子量随通气量的增加也随之增大但在固体发酵间内通风量不易过大过大生长速度快内热加大温度不易控制～]为,密有利于3 大～]期(～)就越大,最佳湿度为%～%,从第d开始固体发酵培养基上的孢子已基本成熟,湿度就大芽量酵%～。6 结 论中试结果表明真菌固体发