大青叶黄酮化合物的分离纯化及对小鼠运动耐力的影响

背景介绍运动耐力指机体运动时能够承受的最大运动负荷，可通过呼吸频率、耗氧量、血糖浓度变化及运动持续时间来衡量。在运动过程中，伴随体内水分、糖分与电解质的消耗，机体逐渐产生疲劳，运动耐力开始降低，这不仅影响运动的状态，也干扰人们的正常工作与生活。大青叶(IsatidisFolium)属于十字花科菘蓝的叶，在我国中、东部广泛栽培，主要成分包括生物碱、黄酮类、有机酸、氨基酸等，部分地区群众将新鲜的大青叶凉拌、煮粥或清炒食用，具有抗氧化、增强机体免疫力等作用。文章亮点1.优化大青叶黄酮提取物的纯化工艺条件，并测定小鼠的力竭游泳时间和相关抗疲劳生化指标；3.大青叶黄酮纯化物有助于增长小鼠的运动时间，减少乳酸、尿素氮在体内的累积与丙二醛的生成，提高肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力，具有良好的抗运动疲劳活性。内容介绍1

实验部分1.1

主要仪器与试剂1.2

实验方法1.2.1

样品黄酮含量测定采取亚硝酸钠-硝酸铝法测定大青叶总黄酮含量，配制0.01~0.05mg/mL芦丁标准溶液后，以空白溶液作参比，在510nm波长下测定吸光度，得到标准曲线方程y=9.035

x+0.002，R2=0.9992。2

结果与讨论2.1

静态吸附与解吸性能的比较从表2吸附率结果可见，AB-8大孔树脂对该化合物的吸附率最高，达到87.2%，其次为X-5大孔树脂，达到83.4%。大青叶黄酮类化合物以2-苯基色原酮为母核，连有数个酚羟基，有一定的弱极性[19]，AB-8大孔树脂是苯乙烯型弱极性共聚体，从而可与弱极性黄酮化合物产生较强的吸附作用力，同时该树脂平均孔径在130~140Å，比表面积约为480~520m2/g，因此对吸附质的饱和吸附量较高。2.2

吸附条件考察结果2.2.1

上样浓度的选择由图1可见，AB-8大孔树脂对大青叶黄酮的吸附率，随上样浓度增大而降低，这与李奕[20]研究上样浓度对AB-8大孔树脂纯化襄荷黄酮的影响类似。2.2.2

上样液pH的选择随上样液pH升高，AB-8大孔树脂对大青叶黄酮的吸附率先增大后减小，当溶液pH为3.5时，吸附率达到最高为87.5%。2.2.3

不同上样流速的泄漏曲线图3为上样流速分别为0.5、1.5、3.0mL/min时大青叶黄酮的泄漏曲线。当上样流速逐渐加快，相同上样体积的流出液中大青叶黄酮化合物的泄漏量不断增大。3

结论本研究以大青叶黄酮为原料，采取AB-8大孔树脂作为纯化介质，通过单因素与正交试验确定最佳工艺条件为上样浓度1.0mg/mL、上样液pH3.5、上样液体积50mL、洗脱液乙醇体积分数70%、洗脱液用量80mL、上样与洗脱流速分别为1.5、1.0mL/min。在该纯化条件下，所得产物的总黄酮含量为65.0%，较纯化前约提高3.3倍，回收率达到72.5%。动物试验结果表明大青叶黄酮抗运动疲劳活性较好，与空白对照组相比，大青叶黄酮纯化物有助于延长小鼠的力竭游泳时间，减小运动后血清中LA与BUN的含量，并增强GSH-Px活力，减少MDA的生成。另外中、高剂量的大青叶黄酮纯化物的抗运动疲劳作用较提取对照组有显著性差异，表明通过大孔树脂纯化工艺提高单位质量产物中大青叶黄酮含